基因拷贝数与染色体位置对酵母表达乙肝病毒融合表面抗原SA-28基因的影响

应用FLP重组酶介导的染色体定点整合技术,将带有不同拷贝数的乙肝病毒融合表面抗原SA28基因表达单元的质粒整合在酵母不同的染色体位点,并测定了SA28基因的表达情况,初步研究了基因拷贝数与染色体位置对酵母表达外源基因的影响。结果表明SA28基因在HIS3位点整合时的表达水平随基因拷贝数的增加而提高,遵循基因剂量效应;在某些染色体位点整合时,插入方向对其表达有不同程度的影响,呈现出明显的染色体极性效应。

染色体位置对酵母SUC2基因表达的影响

通过FLP－FRT位点特异性DNA切离和DNA定点整合技术，将酵母蔗糖酶基因（SUC2）整合到酿酒酵母染色体不同位置上，测定了SUC2基因表达情况，从而对酵母染色体位置效应进行了初步研究．发现酵母中存在染色体位置效应，但染色体位置对SUC2基因表达水平的影响并不显著．

酿酒酵母基因组位置效应对外源基因表达的影响

外源基因元件和模块在底盘细胞中发挥特定功能是合成生物学研究的基本过程,而外源元件和模块在基因组中的位置对其功能的实现具有显著影响。为了系统、全面地表征酿酒酵母基因组位置效应对外源基因的表达影响,以绿色荧光蛋白为报告基因,通过双交换同源重组方法,对酿酒酵母单基因敲除库进行高通量转化,构建酿酒酵母基因组单位点荧光标记菌株库。结合流式细胞术和高通量测序技术对单位点荧光标记库菌株进行分析,构建高表达位点库和低表达位点库,共发现促进绿色荧光蛋白表达的位点428个,抑制绿色荧光蛋白表达的位点444个。通过分析高、低表达位点在酵母染色体上的分布,从全基因组尺度上对酿酒酵母基因组整合位置对基因表达的影响进行表征。本研究可为酿酒酵母基因组位置效应的分布规律和产生机理研究提供重要参考,对外源蛋白工业生产和合成生物学中的基因表达精细调控也具有重要的指导意义。