姐妹染色单体差别染色效果相关因素的研究与改进

目的探讨影响姐妹染色单体差别染色效果的因素,明确作为课堂实验教学项目的可行性。方法用常规外周血淋巴细胞培养、染色体制备技术制备染色体标本片,细胞培养过程中分别加入新配制和-20℃保存10年的BrdU溶液。标本制备后分别取新鲜(1 d龄)和-20℃冻存1,2,3,4,5周龄的染色体片用紫外线照射,照射条件为50,56,60℃三种温度,10,20,30 min三个时间,然后Giemsa染色10 min。根据姐妹染色单体着色效果与色差评价各因素对差别染色的影响。结果在-20℃冻存10年的BrdU与新鲜配制的BrdU掺入DNA后的染色效果无显著差异,终浓度以10μg/ml为佳。新制备和-20℃保存1-5周的染色体标本片,在50-60℃的片温范围内,紫外照射10-30 min均获得良好的差别染色效果。结论BrdU溶液在-20℃长期冻存不影响DNA掺入效果;姐妹染色单体差别染色对相关因素容差性较强,改进后作为课内教学实验项目具有很好的可行性。