用Y染色体特异性探针作斑点印迹法检测人血痕的性别

血痕的性别检查是法医学检案中一个重要内容。过去常用的方法是检查血痕里残存有核细胞中的x和y小体，也有试图测定血痕中性激素(主要是睾丸酮)含量的办法来达到鉴定性别的目的。但都因方法比较繁琐且结果不大可靠，或男女性别判断的界线不够清楚，或受澎响的因素太多而不能令人满意。

中间偃麦草染色体2Ai-2特异PCR新标记的建立和St基因组特异序列的克隆

对中间偃麦草麦、小麦和小麦 中间偃麦草 2Ai 2附加系Z1、Z2、Z6 ,代换系ZD2 8等进行RAPD分析 ,从 32 0个RAPD引物中 ,鉴定出 2Ai 2染色体特异的 2个RAPD标记OPO0 5 6 50 和OPM0 4 1 40 0 。利用这 2个特异RAPD引物OPO0 5和OPM0 4 ,PCR扩增普通小麦CS(ABD)及其近缘植物中间偃麦草 (E1 E2 St)、拟鹅冠草 (St) ,长穗偃麦草 (E)、簇毛麦(V)、黑麦 (R)、大麦 (H)、粗山羊草 (D)等基因组DNA。结果表明 ,OPO0 5 6 50 和OPM0 4 1 40 0 均是 2Ai 2染色体上St基因组区域的特异标记。将上述 2个特异片段分离回收、克隆、测序 ,根据测序结果重新设计、合成特异引物 ,成功地转换RAPD标记为SCAR(sequencecharacterizedamplifiedregion)标记SC O5和SC M4。利用SCAR标记对不同材料进行分析的结果表明 ,凡含有 2Ai 2染色体的抗黄矮病材料及拟鹅冠草均产生一条扩增带 ,不含 2Ai 2染色体的材料 ,包括小麦、长穗偃麦草、簇毛麦、黑麦、大麦、粗山羊草以及含有其他中间偃麦草染色体的附加系 ,均没有扩增产物 ,说明上述 2个SCAR标记是中间偃麦草 2Ai 2染色体的特异性PCR标记 ,且是 2Ai 2染色体上St基因组区域的特异性标记。克隆与鉴定中间偃麦草的 2个SCAR扩增片段TiSCO5和TiSCM4 ,结果表明 。

伴特异性染色体髓细胞白血病患者细胞形态学特征与临床表现

目的:分析206例初发髓细胞白血病,急性原始粒细胞白血病部分分化型(M2b)、急性早幼粒细胞白血病(M3)、急性粒鄄单核细胞白血病伴嗜酸性粒细胞增多亚型(M4EO)和慢性粒细胞性白血病(CML)患者细胞形态学特征及临床表现。方法:采用细胞形态学(M)结合细胞遗传学(C)和分子生物学(M)检查方法检测患者骨髓标本。结果:细胞形态学特征:M2b为异常中幼粒细胞增生,M3为异常早幼粒细胞增生,M4EO为异常嗜酸性粒细胞增生,CML为粒系细胞增生。染色体及融合基因检测表明:M2b、M3、M4EO、CML分别与各自特异性染色体及融合基因t(8;21)(q22;q22)/AML1鄄ETO、t(15;17)(q22;q21)/PML鄄RARα、inv(16)(p13;q22)/CBFβ鄄MYH11、t(9;22)(q34;q11)/BCR鄄ABL密切相关。结论:①M2b、M3、M4EO、CML4种白血病患者不论在临床特点上,还是细胞形态学上都有各自一定的特征。②4种白血病分别与特定的染色体及融合基因具有一定的相关性。③特定的染色体和融合基因可作为白血病的标记物,对白血病的诊断、预后估计、监测治疗和微小残留白血病等都具有一定价值。

大麦1H特异性CAPs标记和ASA标记的创制

选取大麦１Ｈ染色体的ＳＴＳ标记ＭＷＧ９１３特异性扩增小麦，把得到的片段进行克隆。用ＴａｑＩ酶切分类并测序，把得到的序列同大麦的序列进行比较。依据比较结果，选取对大麦特异的内切酶，用该酶来酶切大麦、小麦、黑麦、长穗倡麦草、中间偃麦草、簇毛麦的ＭＷＧ９１３扩增产物，获得对大麦１Ｈ染色体特异的ＣＡＰｓ标记。同时，依据酶切位点碱基的差异设计引物对扩增的产物进行第二次扩增，得到该位点的一对染色体特异性ＡＳＡ标记。

t(8;21)染色体易位的37例实验室分析

t（8;21）易位是和M2b 型急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML） 相关的一种特异性染色体重排.世界卫生组织提出的造血和淋巴系统疾病最新分型,建议只要检出t（8;21）（q22;q22）以及AML1/ETO 融合基因的AML,就可纳入急性髓系白血病伴重现性遗传学异常[1].本次研究发现t（8;21）的病例37 例,现将这些病例的细胞形态学、染色体核型分析报道如下.

急性髓细胞白血病的细胞遗传学特征分析及其诊断预后价值

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)患者的细胞遗传学异常特征及其与诊断、治疗、预后的关系。方法:采用短期培养法制备骨髓细胞染色体,并以R带显带技术对76例初诊AML患者进行染色体核型分析。结果:本组76例中有47例(61.8%)出现染色体异常。共有9种主要的染色体异常核型,t(15;17)及t(8;21)为最常见的染色体结构异常,且t(15;17)及t(8;21)分别只见于急性早幼粒细胞白血病(M3)及急性髓细胞白血病(M2)患者,核型异常与临床完全缓解率及完全缓解持续时间等预后因素高度相关。结论:61.8%的AML患者有染色体异常,特异性的核型异常与特定的FAB亚型相关,是AML诊断和分型的一个重要指标,并有重要的预后意义。

采用长距离PCR检测黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤新鲜标本中特异性染色体易位

目前用于检测软组织肿瘤染色体易位的技术方法各有特色，其中长距离PCR技术仅适用于新鲜标本，但可扩增基因断裂点周围长至10余kb的DNA片段，从而可以检测出内含子上断裂点的位置，确定融合基因类型，并可进一步用于分析染色体断裂点基因组DNA序列，以确定是否有某些特征序列参与了染色体易位的发生。

血清miR-98-5p、LncRNA XIST在急性呼吸窘迫综合征患儿中与疾病严重程度、预后的关系

目的:检测急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清中微小RNA(miR)-98-5p、长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异性转录因子(XIST)表达情况,并探究二者与疾病严重程度、预后的关系。方法:收集86例ARDS患儿为研究对象(研究组),同期健康体检儿童90名设为对照(对照组),参考柏林(2012年)ARDS病情严重程度诊断标准中动脉血氧分压/吸入氧浓度将ARDS患儿分为轻度组、中度组、重度组;另根据ARDS患儿28 d生存状况分为存活组和死亡组。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测血清miR-98-5p、LncRNA XIST水平,绘制受试者工作特性(ROC)曲线分析血清中miR-98-5p、LncRNA XIST水平对ARDS患儿预后不良的预测价值;Kaplan-Meier生存曲线分析血清miR-98-5p、LncRNA XIST水平与ARDS患儿预后的关系;Pearson分析ARDS患儿血清中miR-98-5p与LncRNA XIST的相关性。结果:与对照组相比,研究组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.01),LncRNA XIST水平升高(P<0.01)。与轻度组相比,中度组、重度组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.05),LncRNA XIST水平升高(P<0.05);与中度组相比,重度组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.05),LncRNA XIST水平升高(P<0.05)。与存活组相比,死亡组血清中miR-98-5p水平降低(P<0.01),LncRNA XIST水平升高(P<0.01)。ROC曲线显示,血清中miR-98-5p、LncRNA XIST水平预测ARDS患儿预后不良的ROC曲线下面积分别为0.771、0.764,截断值分别为0.54、1.97,其敏感性分别为76.1%、86.9%,特异性分别为73.7%、52.6%;血清中miR-98-5p联合LncRNA XIST预测ARDS患儿预后不良的ROC曲线下面积为0.888,其敏感性为77.6%、特异性为94.7%。miR-98-5p高表达者存活率35.14%高于低表达者12.24%(P<0.05),LncRNA XIST高表达存活率12.73%低于低表达者38.71%(P<0.01)。Pearson分析发现ARDS患儿血清中miR-98-5p与LncRNA XIST呈负相关关系(r=-0.411,P<0.05)。Starbase3.0预测发现LncRNA XIST与miR-98-5p存在结合位点。结论:ARDS患儿血清中miR-98-5p水平降低、LncRNA XIST水平升高,二者均与疾病严重程度、预后关系密切,且二者呈显著负相关,有望用于评估ARDS疾病严重程度、预后。

机械臂关节空间轨迹的累积非支配赋值NSGA-Ⅱ算法规划

为了对机械臂运动轨迹的能耗、时间和冲击进行综合优化,提出了基于累积非支配赋值NSGA-Ⅱ算法的多目标优化方法。对七自由度冗余机械臂的实物及模型进行了介绍,以机械臂到达各给定轨迹点的时间为优化参数,以减少机械臂轨迹的能耗、时耗和冲击为目标建立了多目标优化模型。对传统NSGA-Ⅱ算法进行了缺陷分析,引入了累积非支配赋值的选择方法和自适应模拟交叉二进制算子,从而提高染色体的多样性和特殊性。给定6个轨迹点进行仿真验证,结果表明:累积非支配赋值NSGA-Ⅱ算法得到的Pareto解集优于传统NSGA-Ⅱ算法的Pareto解集,以时间最少为例给定了规划的关节空间轨迹,该轨迹满足设定的角度约束、角速度约束、角加速度约束,可以应用于实际工作。

一种用PCR快速检测绒毛性别的方法

本文采用快速提取绒毛细胞DNA,用Y染色体特异性引物,通过PCR扩增Y染色体上特异性片段。对胎儿进行性别鉴定。在对10例流产绒毛所做结果,为男性,3例为女性,并与染色体G、C带对照。完全一致。

长链非编码RNA XIST在系统性红斑狼疮患者外周血CD4+T细胞表达降低并与疾病活动度负相关

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X连锁X染色体特异性失活转录本(XIST)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+细胞亚群中的表达,并分析其临床意义。方法募集50例SLE患者和30例健康人,比较SLE组和健康对照组CD4+T细胞中XIST表达情况。根据系统性红斑狼疮疾病活动度指数(SLEDAI)评分情况将50例SLE患者分为稳定期SLE组(SLEDAI评分<5分,n=19)和活动期SLE组(SLEDAI评分≥5分,n=31)。比较稳定期SLE组和活动期SLE组CD4+T细胞中XIST表达情况。分析活动期SLE患者CD4+T细胞中XIST表达水平与SLEDAI的相关性。根据是否合并狼疮肾炎,将31例活动期SLE患者分为无合并狼疮肾炎组(n=17)和合并狼疮肾炎组(n=14),比较两组CD4+T细胞中XIST表达情况。绘制CD4+T细胞中XIST诊断SLE和合并狼疮肾炎的受试者工作特征(ROC)曲线。结果与健康对照组相比,SLE组CD4+T细胞XIST表达显著降低。与稳定期SLE组相比,活动期SLE组CD4+T细胞中XIST表达显著降低。相关性分析显示,活动期SLE患者CD4+T细胞中XIST表达水平与SLEDAI评分呈负相关。活动期SLE患者中,与无合并狼疮肾炎组相比,合并狼疮肾炎组CD4+T细胞中XIST表达显著降低。ROC曲线结果显示,CD4+T细胞中XIST在诊断SLE及是否合并狼疮肾炎中具有良好效能。结论SLE患者CD4+T细胞中XIST表达显著降低,其表达水平与疾病活动度密切相关,而且在诊断SLE及SLE合并狼疮肾炎方面具有良好效能。

下调USP9X表达对胃癌AGS细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的:探讨下调X染色体连锁的泛素特异性肽酶9(USP9X)表达对胃癌细胞凋亡和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:将USP9X小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA转染胃癌AGS细胞,将细胞分为3组:未处理的AGS组、对照siRNA组和USP9X siRNA组。采用real-time PCR和Western blot检测不同处理组的胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术和Boyden小室分别检测不同处理组胃癌AGS细胞的凋亡和侵袭能力;Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白的表达水平。结果:USP9X siRNA显著下调胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达水平。USP9X表达下调显著诱导胃癌细胞凋亡,并降低胃癌细胞的侵袭能力。USP9X表达下调显著降低Mcl-1和MMP-2的表达,但明显上调Bax蛋白的表达(P<0.05)。结论:USP9X可能是胃癌细胞凋亡和侵袭的关键调控因子。

结肠癌组织中lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2的表达变化及临床意义

目的观察结肠癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异性转录本基因(XIST)、微小RNA(miR)-32-5p、基因增强子的人类同源基因(EZH2)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测86例结肠癌组织和癌旁组织中的lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2,分析lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2表达与患者临床病理特征的关系,采用Pearson线性相关分析三者之间的相关性。结果与癌旁组织相比,结肠癌组织中lncRNA XIST、EZH2表达高,而miR-32-5p表达低(P均<0.05)。结肠癌组织中lncRNA XIST、miR-32-5p、EZH2表达与肿瘤分期有关(P均<0.05)。结肠癌组织中lncRNA XIST与miR-32-5p的表达呈负相关(r=-0.612,P<0.01),miR-32-5p与EZH2的表达呈负相关(r=-0.608,P<0.01)。结论结肠癌组织中lncRNA XIST、EZH2表达升高,而miR-32-5p表达降低,均与肿瘤分期有关,有可能成为新的结肠癌肿瘤标志物。

225例急性髓细胞白血病的细胞遗传学研究

目的 探讨急性髓细胞白血病 (AML)的细胞遗传学改变及与诊断、治疗、预后的关系。方法 对 2 2 5例初治AML的患者进行骨髓染色体分析 ,采用短期培养法制备骨髓细胞染色体G显带。结果 发现本组 131例 ( 5 8.2 % )有克隆性染色体异常。共有 14种核型异常。t( 15 ;17)、t( 8;2 1)、t( 9;2 2 )为最常见的结构异常 ,且t( 15 ;17)、t( 8;2 1)、inv( 16 )分别仅见于M3 、M2 、M4E0 。核型异常与临床完全缓解率 ,完全缓解持续时间及中位生存期等预后高度相关 ,t( 15 ;17)、t( 8;2 1)完全缓解率高 ,完全缓解期及中位生存期长 ,预后相对较好。而正常核型次之 ,其它核型异常预后较差。结论 染色体研究对AML的诊断 ,分型 ,治疗选择及预后估计均有重要意义。

USP9X基因表达下调对胃癌AGS细胞株增殖和细胞周期的影响

目的探讨X染色体连锁的泛素特异性肽酶9(USP9X)在胃癌中的表达,分析其表达下调对胃癌细胞增殖和周期的影响。方法利用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测胃癌组织和胃癌AGS细胞及正常胃黏膜组织和细胞中USP9X mRNA和蛋白的表达。将USP9X siRNA转染胃癌AGS细胞株,分析转染前后胃癌AGS细胞株中USP9X蛋白的差异表达。进而采用流式细胞术和CCK-8检测转染前后AGS细胞的细胞周期和细胞增殖的变化。结果胃癌组织和细胞中的USP9X mRNA和蛋白表达显著高于正常对照。USP9X siRNA能够显著下调胃癌AGS细胞中的USP9X蛋白表达。USP9X基因的表达下调使AGS细胞周期静止在G0/G1期,并显著抑制胃癌AGS细胞的增殖能力(均P<0.05)。结论USP9X可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用,并可能成为胃癌细胞增殖和周期的关键调控因子。

细胞分化周期蛋白27基因沉默抑制GH3细胞迁移及其分泌功能

目的进行3种全基因组外显子测序所得基因体外的功能验证,为垂体柄中断综合征病因研究的体内实验提供理论依据。方法将细胞分化周期蛋白27(cell division cycle protein 27,CDC27)、神经纤维瘤病1型(neurofibromatosis type1,NF1)、X染色体关联的泛素特异性蛋白酶9(ubiquitin specific peptidase 9,X-Linked,USP9X)三种基因经由小干扰RNA(si RNA)分别转染至细胞内,每种基因均设置实验组、阴性对照(negative control,NC)组、空白细胞组。通过RTPCR筛选出各基因最佳的si RNA敲低序列以用于复筛,Western bolt复筛各基因最佳敲低序列在蛋白水平的表达,以确定目标基因进行下一步研究。依次运用CCK-8检测细胞增殖能力及形态,细胞划痕实验检测细胞迁移,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞分泌功能,Western bolt检测垂体特异性转录因子-1(pit-oct-unc class 1homeobox 1,POU1F1)和垂体特异性转录因子祖先蛋白(homeobox protein prophet of pit-1,PROP1)表达水平。结果 1)CDC27在si RNA 117和1968序列时能够达到稳定的沉默效率,并且在mRNA及蛋白两个水平上均能够被敲低,NF1和UPS9X仅能在mRNA水平上实现敲低而未实现蛋白水平的敲低,无法进行后续实验;2)CDC27沉默对于细胞的增殖及形态无明显影响(P>0.05);3)CDC27沉默能够明显抑制细胞的迁移能力(P<0.05);4)CDC27沉默能够明显抑制细胞分泌生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)分泌(P均<0.05),对促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)的分泌无明显影响(P>0.05);5)CDC27沉默能够明显下调POU1F1与PROP1的表达水平(P<0.05)。结论 CDC27沉默可以抑制GH3细胞的迁移及其生长激素、泌乳素的分泌。

193例初治急性髓系白血病细胞遗传学与FAB分型的相关性分析

目的探讨急性非淋巴细胞自血病（ANLL）的核型状况。方法利用短期培养法和直接法制备骨髓细胞染色体，用R带显带技术对151例初治的ANLL患者行染色体核型检查。结果该组患者中克隆性染色体异常的有98例（56．98％）：异常核型主要为特异性染色体重排，t（15；17）（35例）和t（8；21）（23例）是最常见的结构异常，各亚型的核型检出率分别为M3（86．90％）〉M2（62．10％）〉M5（43.75％）〉M1（37．50％）〉M6（25．00％）〉M4（16.67％）应用R显带可检测56．98％的急性髓系白血病患者的染色体异常．与FAB分型相关。结论细胞遗传学是诊断、分型、判断预后的一项重要指标。