染色体缩合调控子2对食管癌小鼠细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨染色体缩合调控子2(RCC2)对食管癌小鼠细胞增殖的影响及其作用机制。方法提取食管癌小鼠食管组织及原代细胞,分组进行转染,采用CCK-8检测细胞增殖水平,RT-PCR和Western blotting检测RCC2、SOX2及增殖细胞核抗原(PCNA)、锌指蛋白(Snail)的表达,荧光素酶实验分析RCC2与SOX2的靶向关系。结果RCC2在食管癌组织中表达上调(P<0.05);过表达RCC2后食管癌小鼠细胞增殖水平升高,而抑制RCC2表达后细胞增殖水平降低(P<0.05);过表达RCC2后细胞中SOX2和SOX2靶基因PCNA、Snail相对表达量升高(P<0.05),而抑制RCC2表达后SOX2、PCNA、Snail相对表达量降低(P<0.05);荧光素酶实验结果显示RCC2与SOX2存在靶向调控关系。结论RCC2通过上调SOX2及其靶基因表达,提高食管癌小鼠细胞增殖能力,促进肿瘤细胞的发生、发展。

雌激素通过调控RCC2参与乳腺癌细胞凋亡

目的探索雌激素刺激乳腺癌病变过程中染色体缩合调控子2(RCC2)的作用及机制。方法收集乳腺标本,用蛋白免疫印迹法检测RCC2蛋白表达水平;分别用雌激素(雌二醇)、RCC2小干扰RNA(siRNA),雌激素联合RCC2 siRNA处理MCF-7细胞,检测细胞增殖与凋亡。结果与乳腺纤维瘤组织相比,RCC2在雌激素受体阳性(ER+)乳腺癌组织中的表达水平升高(P=0.001),在ER-乳腺癌组织中无升高(P=0.404)。抑制RCC2后ER+乳腺癌细胞系MCF-7增殖无变化(F_(处理)=0.003,P=0.957),但凋亡比例比Allstars siRNA组高(t=2.679,P=0.037);雌二醇处理MCF-7后增殖能力增强(F=110.323,P<0.001),细胞凋亡比例减弱(t=5.881,P=0.004);雌二醇与RCC2siRNA的交互效应在MCF-7细胞增殖方面无统计学意义(F=0.281,P=0.604),在细胞凋亡方面有统计学意义(F=18.897,P=0.002)。结论雌激素可能通过调控RCC2来抑制细胞凋亡,从而促进ER+乳腺癌癌变进程。

研究RCC2以及XRCC2在结肠癌中的表达水平及临床意义

检测染色体缩合调控子2(RCC2)以及X线修复交叉互补基因2(XRCC2)在结肠癌中的表达水平及临床意义。方法 选取我院2014.3~2016.3确诊为结肠癌193例患者,收集结肠癌、癌旁组织,免疫组织化学染色检测RCC2蛋白表达水平。结果 免疫组织化学染色中,结肠癌组织RCC2的阳性率显著上调;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应以及免疫组化染色结果表明,XRCC2阳性表达在细胞质、细胞膜显色,表现为黄褐色,结肠癌组织中阳性表达率高于癌旁组织。在Dukes分期、淋巴结转移情况、组织分化等级中,RCC2、XRCC2表达水平上升呈现正相关。RCC2阳性表达患者OS和DFS低于阴性表达者。Cox分析表明,RCC2、XRCC2高表达是影响结肠癌患者不良预后独立危险因素。结论 RCC2、XRCC2在结肠癌组织中,其表现呈现为高水平状况,而高表达状况提示着患者预后情况较差,两者之间具有密切相关性,为一项可应用预测指标,能作为评估结肠癌潜在生物标志物。

甲状腺乳头状癌组织中p14^(ARF)、p16^(INK4a)、MDM2的表达变化及意义

目的观察甲状腺乳头状癌(PTC)组织中p14ARF、p16INK4a、MDM2的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测83例PTC、31例甲状腺乳头状微小癌(PTMC)、50例甲状腺腺瘤组织中的p14ARF、p16INK4a、MDM2。结果 PTC组织中p14ARF、p16INK4a、MDM2蛋白阳性率分别为22.9%、26.5%、74.7%,PTMC组织中分别为45.2%、48.4%、54.8%,甲状腺瘤组织中分别为52.0%、72.0%、52.0%。PTC组织中p14ARF、p16INK4a蛋白阳性率明显低于甲状腺腺瘤(P<0.01)及PTMC(P<0.05),MDM2蛋白阳性率明显高于甲状腺腺瘤(P<0.05)及PTMC(P<0.01)。p14ARF蛋白表达与PTC淋巴结转移有关(P<0.05),p16INK4a蛋白表达与PTC复发有关(P<0.05)。p14ARF、MDM2蛋白表达呈负相关(r=-0.343,P<0.05)。结论 PTC组织中p14ARF、p16INK4a蛋白表达降低、MDM2蛋白表达增高可能在PTC发生发展中起重要作用,联合检测有助于PTC生物学行为的判定。

石骨症特异诱导多能干细胞的建立及其功能研究

目的探讨氯离子第7通道蛋白(CLCN7)突变所致常染色体显性遗传骨硬化症2型(ADO2)患者破骨细胞发育相关的调控因子及其功能。方法选择2017年10月至2019年10月在中信惠州医院确诊为ADO2且CLCN7基因突变的患者10例作为实验组,同时将正常健康受检者10例作为对照组。将诱导多能干细胞(iPSCs)培养为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、苏木精(Hatmatoxylin)-伊红(Eosin)HE染色、荧光染色等并利用实时荧光PCR(qPCR)技术检测各种来源的破骨细胞CLCN7调控因子(ITGB5、CES1、PERF1、SERPINE2、WARS、GBP4、UCHL1)mRNA表达情况,采用Western blot法检测蛋白表达。采用基因表达谱芯片技术分析ADO2特异破骨细胞的基因表达谱,验证CLCN7突变对破骨细胞发育成熟相关通路的影响。结果通过qPCR技术检测mRNA可知,与对照组比较,实验组患者ITGB5的比例高46%,CES1的比例高143%,PERF1的比例低48%,SERPINE2的比例低53%,WARS的比例低39%,GBP4比例低28%和UCHL1的比例高58%,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组的供体破骨细胞比较,实验组患者细胞中ITGB5的表达增加278%,SERPINE2表达下降51%,WARS表达下降68%和PERF1表达下降49%,差异均有统计学意义(P<0.05);分析基因转染模型发现,实验组的ITGB5表达水平为(1.25±0.31)EU/μg,明显高于对照组的(0.93±0.23)EU/μg,PERF1表达为(1.07±0.26)EU/μg,明显低于对照组的(1.51±0.39)EU/μg,差异均有统计学意义(P<0.05);两组WARS和SERPINE2表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CLCN7突变所致的ADO2患者基因转染模型中ITGB5表达上调和PERF1表达下降,可能与破骨细胞功能障碍有关。