以变性染色皮粉为底物的蛋白酶活力检测方法研究

以活性染料Remazol brilliant blue R(RBB)对皮粉进行染色,制备了在较宽的pH范围内稳定的热变性染色皮粉。研究了反应时间、底物和蛋白酶浓度等因素对酶催化染色皮粉水解速度的影响,建立了一种基于变性皮粉-RBB底物的蛋白酶活力检测方法。用建立的方法,对几种常用的制革蛋白酶进行酶活力测定,并与常用的基于酪素底物的福林法和LVU法进行对比,结果表明:对于大部分蛋白酶,2种底物检测结果有较大差异。

基于低温活性染料标记皮粉底物的蛋白酶性能表征方法

建立了一种以低温活性染料标记的未变性皮粉(胶原纤维)为底物的快速测定蛋白酶活力的方法。优化了染色皮粉的制备方法,考察了底物的性质,优化了酶活力检测条件,并对几种蛋白酶的活力进行了测定。结果表明,染色后皮粉的结构未发生明显的改变,适合在较宽pH值范围进行蛋白酶活力测定,测定结果具有较好的重现性;蛋白酶不同底物作用性能有较大的差异,相对于酪蛋白和热变性染色皮粉,新建立的方法的测定结果对制革过程中酶的选用和使用条件的优化更具实际的指导意义。