染色体组装因子1亚基A(CHAF1A)和增殖细胞核抗原在宫颈鳞状细胞癌组织高表达并与恶性程度正相关

目的探讨染色体组装因子1亚基A(CHAF1A)和增殖细胞核抗原(PCNA)在宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织中的表达和临床意义。方法荧光定量PCR检测CSCC组织和对应癌旁组织中CHAF1A和PCNA的mRNA的水平,免疫组织化学染色法检测正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变(CIN)以及CSCC组织中CHAF1A和PCNA蛋白的表达,分析其与临床病理参数的关系,并探讨相关性。结果 CHAF1A和PCNA在CIN及CSCC组织中表达明显高于正常宫颈组织,CHAF1A和PCNA呈正相关。CHAF1A与CSCC的分化程度、肿瘤大小、浸润深度及有人乳头瘤病毒(HPV)感染有关,PCNA与CSCC的分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、浸润深度及有HPV感染有关。结论 CHAF1A和PCNA在CSCC中高表达并且与恶性程度相关,二者呈正相关。

基于label-free定量蛋白质组学方法筛选沉默CHAF1B基因后心肌细胞差异表达蛋白及调控网络分析

目的分析沉默染色质装配因子1亚基B(chromatin assembly factor 1 subunit B,CHAF1B)基因后心肌细胞中差异表达蛋白,预测CHAF1B基因调控网络,为寻找促进心肌细胞修复的潜在治疗靶点提供参考。方法采用转染和蛋白质印迹法筛选沉默CHAF1B基因的有效小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)。应用有效siRNA沉默人源心肌AC16细胞CHAF1B基因后,采用细胞活力检测方法检测细胞活力;提取总蛋白质进行定量、还原、烷基化和胰蛋白酶裂解成肽段,利用高效液相串联质谱法鉴定肽段;搜索UniProt蛋白库筛选差异表达的蛋白质进行基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集和蛋白质互作网络(protein-protein interaction networks,PPI)分析。结果siRNA有效沉默CHAF1B基因后,心肌细胞存活明显受到抑制;label-free定量蛋白质组学方法鉴定结果显示,共有69个差异表达蛋白质,其中50个表达显著上调(差异倍数≥2,P<0.05),19个表达显著下调(差异倍数≤0.5,P<0.05)。GO分析显示,差异表达蛋白质主要参与大分子复合亚基体、细胞组分生物合成和组装等生物学过程,分布在细胞质和囊泡等区域,发挥蛋白质结合等分子功能。KEGG通路富集和PPI分析显示,差异表达蛋白质参与的信号通路包括蛋白酶体、氨酰tRNA生物合成、胞吞、嘧啶代谢和氨基酸生物合成等10条信号途径;表达显著上调的蛋白质如蛋白酶体亚单位A2和B7、26 S蛋白酶体调节亚单位6B和10B参与蛋白酶体途径,丝氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺和赖氨酸tRNA合成酶介导氨酰tRNA生物合成;表达显著下调的蛋白质包括骨架相关蛋白2/3复合体亚单位3和热休克70蛋白1样参与胞吞作用,核糖核苷-二磷酸还原酶大亚基介导嘧啶代谢等通路。实时荧光定量聚合酶链式反应结果证实,转染CHAF1B siRNA后心肌细胞中合成骨架相关蛋白2/3复合体亚单位3的基因ARPC3和氨酰tRNA生物合成关键基因QARS1的mRNA水平均显著降低。结论CHAF1B为心肌细胞存活的关键蛋白质,参与调控心肌细胞的胞吞和氨基酸生物合成等多种生物学过程,参考其调控网络可帮助寻找促进心肌细胞修复的干预环节。

染色质组装因子1 p60预测非小细胞肺癌预后的价值

目的探讨染色质组装因子(CAF-1)p60在非小细胞肺癌中的预后价值,分析其与临床病理特征的相关性。方法连续性选取179例非小细胞肺癌肿瘤组织,采用免疫组化法检测肿瘤组织中CAF-1 p60的表达,分析其与临床病理特征的相关性及预后意义。结果 CAF-1 p60在肺癌组织中为核表达。CAF-1 p60高表达率为47.5%(85/179),低表达率为52.5%(94/179)。CAF-1 p60表达与TNM分期(P<0.001)、肿瘤分化程度(P=0.018)、远处转移(P=0.011)密切相关。KaplanMeier生存曲线提示,CAF-1 p60高表达患者的生存率明显低于低表达者(P<0.001)。Cox多变量生存分析提示,CAF-1 p60高表达是重要的独立预后因素(HR=2.747,P=0.001)。结论在非小细胞肺癌中,CAF-1 p60高表达提示预后不良,并且与肿瘤分期、分级及远处转移相关。CAF-1 p60可以作为非小细胞肺癌的独立预后因子。

CHAF1A和ERα在宫颈鳞状细胞癌中的表达和临床意义

该研究探讨染色质组装因子1亚基(CHAF1A)和雌激素受体1(ERα)在宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织中的表达,探究CHAF1A和ERα的关系及其对CSCC潜在的临床意义,采用了免疫组织化学染色法检测CHAF1A和ERα在CSCC组织及对应的癌旁组织中的表达情况;从CSCC组织及对应癌旁组织中提取总RNA,RT-PCR检测其mRNA水平,分析其相关性;免疫印迹实验检测CHAF1A和ERα在HeLa、C33a、CaSki、Siha和HaCat细胞中的表达差异;慢病毒介导的ShRNA敲低CHAF1A mRNA的表达,RT-PCR检测CHAF1A基因敲低后对ERα表达的影响。结果显示,CHAF1A的表达随着CSCC病变的进展升高,在宫颈癌组织中的表达显著高于其对应的癌旁组织,在宫颈癌细胞株中的表达亦高于人正常表皮细胞系;ERα的表达随着CSCC病变的进展降低,在宫颈癌组织及细胞系中的表达趋势则与CHAF1A相反。CHAF1A基因敲低后ERαmRNA表达升高;另外,统计分析利用χ2检验、Spearman检验及Student’s t检验,探索CHAF1A和ERα表达与CSCC临床病理特征的关系。得出结论,CHAF1A在宫颈癌中高表达并与CSCC恶性程度呈正相关性;ERα在宫颈癌中低表达且与CSCC恶性程度呈负相关性;CHAF1A的表达与ERα的表达呈负相关性;CHAF1A可能对ERα的表达具有调控作用。