临床常见持续高产AmpC β-内酰胺酶菌株中染色质ampD及其突变的研究

目的检测临床常见AmpCβ-内酰胺酶产酶菌株中染色质ampD及其高概率突变位点。方法41株临床常见AmpCβ-内酰胺酶产酶菌株(阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌)分离自医院感染患者样本,头孢西丁三维试验确定持续高产产酶类型,经抽提细菌染色质DNA,PCR法扩增ampD基因并连接入pMD19-T载体,双链测序后与同种非突变标准菌株的ampD序列比对,得到高概率突变位点。结果41株细菌的基因组中,使用PCR法扩增出染色质ampD基因有36株,并成功测定了其ampD基因的序列;并且统计出突变率>50.00%的位点,其中阴沟肠杆菌有62个,肺炎克雷伯菌1个,鲍氏不动杆菌23个,铜绿假单胞菌4个。结论ampD基因不伴随ampC基因同时存在;ampD基因的高概率突变位点可能成为致持续高产酶的关键位点。

鲍氏不动杆菌染色质ampD基因的研究

目的了解鲍氏不动杆菌染色质ampD基因及其高概率突变位点。方法从医院感染患者临床标本中分离鲍氏不动杆菌,经头孢西丁初筛试验和头孢西丁三维试验确定是否产AmpCβ-内酰胺酶及其产酶类型,抽提产酶菌株染色质DNA,PCR法扩增ampD基因并连接入pMD19-T载体,双链测序后与同种非突变标准菌株的ampD基因序列比对,并得到高概率突变位点。结果大部分产酶的鲍氏不动杆菌含有ampD基因,其中18株产持续高酶菌株的染色质中均扩增出ampD基因;鲍氏不动杆菌ampD基因上有62个突变率>50%的位点。结论产AmpCβ-内酰胺酶的鲍氏不动杆菌染色质上均含有ampD基因;鲍氏不动杆菌染色质ampD基因的高概率突变位点可能成为致持续高产酶的关键位点。