柔嫩梭菌灌胃的高盐饮食小鼠血清炎症因子及粪便肠道菌群、短链脂肪酸水平观察

目的观察柔嫩梭菌灌胃的高盐饮食小鼠血清炎症因子及粪便中肠道菌群、短链脂肪酸水平变化。方法将16只C57BL/6雄性小鼠随机分为实验组和对照组,两组均给予含8%NaCl的高盐饲料喂养共16周;实验组同时以柔嫩梭菌菌体悬液(109 CFU/mL)2 mL每隔1 d灌胃,对照组以超纯水2 mL每隔1 d灌胃。采用ELISA法检测血清白细胞介素(IL)1B、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α);采集小鼠新鲜粪便样本,提取细菌总RNA进行16S rDNA高通量测序,检测肠道菌群,并进行短链脂肪酸定量检测。结果实验组血清IL-1B、IL-6、TNF-α水平低于对照组(P均<0.05)。肠道菌群α多样性与β多样性分析结果显示,实验组肠道菌群结构和多样性较对照组发生明显变化。与对照组相比,实验组拟杆菌门及变形菌门相对丰度增加,而厚壁菌门及疣微菌门相对丰度减少(P均<0.05);实验组鼠乳杆菌显著富集,对照组机会致病菌木糖葡萄球菌、迟缓葡萄球菌显著富集。实验组粪便中丙酸、丁酸、己酸水平高于对照组(P均<0.05)。结论柔嫩梭菌灌胃可降低高盐饮食小鼠血清炎症因子水平,改变肠道菌群结构并影响短链脂肪酸代谢。

实时荧光定量PCR法研究溃疡性结肠炎患者肠道双歧杆菌属、柔嫩梭菌属及拟杆菌属量的变化

目的应用荧光定量PCR技术对人粪便内双歧杆菌属、柔嫩梭菌属及拟杆菌属进行定量检测,揭示肠道相关菌群改变在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)发病中的作用及意义。方法分别设计双歧杆菌属、柔嫩梭菌属及拟杆菌属的特异性引物。收集溃UC患者粪便标本60份及正常对照标本60份,提取细菌基因组DNA,应用实时荧光定量PCR反应测定细菌的数量。结果 UC患者组双歧杆菌属及柔嫩梭菌属的数量较正常对照组明显减少(P<0.05),而拟杆菌属的数量较正常对照组明显增多(P<0.05),差异有统计学意义。结论 UC患者粪便中双歧杆菌属及柔嫩梭菌属的数量较正常对照明显减少,而拟杆菌属的数量较正常对照明显增多,提示肠道菌群与UC的发生、发展有一定的关系。

口服柔嫩梭菌对OVA致敏小鼠气道炎症的影响

目的在动物水平探索口服柔嫩梭菌(Clostridium leptum)对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法建立OVA致敏的BALB/c小鼠哮喘模型,依据检测气道炎症情况和气道反应性确定哮喘模型构建成功。30只BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组,安慰剂组和口服柔嫩梭菌治疗组,每组10只。通过HE染色检测小鼠肺组织病理变化,细胞计数检测肺泡灌洗液中炎性细胞(嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞)的数目,ELISA方法检测肺泡灌洗液中炎性因子(IL-4、IL-5、IL-13)的表达情况,并检测各组小鼠的气道反应性。结果验证OVA致敏哮喘小鼠模型构建成功;口服柔嫩梭菌可显著减轻OVA致敏小鼠的气道高反应性,气道炎症细胞浸润和炎性细胞因子分泌(P<0.05)。结论口服柔嫩梭菌可显著减轻OVA致敏小鼠的气道炎症和气道高反应性,这可能为哮喘治疗提供新思路。

qRT-PCR法分析复发性SLE患者肠道双歧杆菌、柔嫩梭菌数量的变化

目的运用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法分析系统性红斑狼疮患者肠道菌群数量的变化,探讨双歧杆菌、柔嫩梭菌与复发性SLE活动的关系。方法提取粪便细菌组DNA,运用q RT-PCR法分析此二菌绝对数量的变化。结果SLE复发活动期双歧杆菌、柔嫩梭菌数量均较治疗后稳定期减少(P<0.05),对比正常对照组也均减少(P<0.05)。结论双歧杆菌、柔嫩梭菌菌群数量与SLE活动度评分相关,肠道内此二菌数量减少可能与SLE病情的复发有关。

糖尿病患者肠道中4种重要菌群的定量分析

目的:了解正常人群与Ⅱ型糖尿病人,以及Ⅱ型糖尿病人在是否有家族遗传、是否用药治疗和是否伴随肥胖等情况下肠道中拟杆菌、双歧杆菌、柔嫩梭菌和乳杆菌的含量与变化,为预防和治疗Ⅱ型糖尿病开辟新途径。方法:收集上述各类人群粪便样品(每组10人),分别提取样品中微生物的总DNA,运用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增4种重要菌群的特异性片段,计算含量,分析上述菌群的变化差异。结果:正常人群肠道中的拟杆菌和双歧杆菌含量均显著低于Ⅱ型糖尿病人群;柔嫩梭菌和乳杆菌含量均显著高于后者。在Ⅱ型糖尿病人群中,用药患者组和肥胖+高血糖患者组的肠道中拟杆菌和双歧杆菌含量均显著低于未用药患者组和单纯高血糖患者组,而柔嫩梭菌和乳杆菌含量均显著高于后者。有无Ⅱ型糖尿病遗传史对患者肠道内4种菌群的含量均无显著影响。结论:4种重要菌群与Ⅱ型糖尿病的发生和发展有密切关系;用药治疗后的患者肠道中4种重要菌群含量比其他各组更接近正常人群;肥胖易加重Ⅱ型糖尿病病情;而有无Ⅱ型糖尿病家族遗传对这4种菌群的含量几乎没有影响。

小米膳食干预对糖耐量受损患者肠道菌群的影响

为了进一步探究小米膳食干预对糖耐量受损(IGT)患者肠道菌群的影响,解析肠道菌群在小米降糖过程中的作用,采用16S rRNA高通量测序技术,对比分析12周小米膳食干预前后64名IGT患者肠道微生物组成和相对丰度的变化。结果表明,12周小米膳食干预可显著提高IGT患者肠道微生物的OUTs数量和α多样性指数,显著提高厚壁菌门的相对丰度和厚壁菌门/拟杆菌门比值,显著提高柔嫩梭菌属的相对丰度。此外,空腹血糖和胰岛素抵抗指数均可显著影响IGT患者的肠道菌群。本研究结果表明,小米膳食干预或能通过促进益生菌增值和改善肠道菌群失调来改善机体血糖代谢。

青少年2型糖尿病人群代谢相关脂肪性肝病与肠道菌群的相关性研究

目的探讨青少年2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)人群代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease,MAFLD)与肠道菌群数量的相关性。方法选取2020年10月—2021年7月就诊于厦门大学附属福州第二医院内分泌科并接受肝脏彩超的青少年2型糖尿病患者44例,按照是否患代谢相关脂肪性肝病分为非MAFLD组(n=18)和MAFLD组(n=26)。收集两组人体学指标、生化代谢指标、炎症指标、甲状腺功能和粪便标本。采用实时PCR法对肠道中常见的几种细菌进行定量测定。采用Logistics回归分析探讨肠道菌群与青少年T2DM合并MAFLD的关系。结果MAFLD组体质指数(BMI)、腹围、血尿酸水平(SUA)、促甲状腺激素(TSH)水平均高于非MAFLD组,年龄和高密度脂蛋白(HDL-C)均低于非MAFLD组,差异有统计学意义(P<0.05)。MAFLD组的柔嫩梭菌属和双歧杆菌属数量明显均低于非MAFLD组,肠球菌属和乳酸菌属数量明显均高于非MAFLD组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素回归分析提示,在排除相关混杂因素后,柔嫩梭菌属和双歧杆菌属仍是青少年T2DM发生MAFLD的独立保护因素(P<0.05)。结论青少年T2DM中MAFLD患者与非MAFLD患者的肠道菌群存在差异,柔嫩梭菌和双歧杆菌是青少年T2DM发生MAFLD的独立保护因素。

肠道主要产丁酸细菌与内脏脂肪和胰岛素抵抗的相关性

目的 探讨4种肠道主要产丁酸细菌与内脏脂肪和和胰岛素抵抗的关系,为后续研究提供参考。方法 应用实时荧光定量PCR检测胰岛素抵抗组(76例,HOMA-IR≥2.68)和健康对照组(273例,HOMAIR<2.68)对象4种肠道主要产丁酸细菌的丰度变化。采用生物电阻抗法测量所有研究对象的内脏脂肪面积(visceral fat area,VFA)和体脂肪百分比(body fat percentage,BFP)。运用ROC曲线比较VFA和BFP对胰岛素抵抗的诊断价值。结果 VFA的ROC曲线下面积(0.751)显著高于BFP(0.647)。胰岛素抵抗组和健康对照组对象肠道4种产丁酸细菌的丰度差异均无统计学意义(均P>0.05)。Spearman相关分析显示普拉梭菌(R=-0.106,P<0.05)和柔嫩梭菌(R=-0.115,P<0.05)与HOMA-IR呈负相关。VFA与普拉梭菌呈负相关(R=-0.105,P<0.05),BFP与普拉梭菌和柔嫩梭菌均无显著相关性。调整BMI和年龄因素后,回归分析显示普拉梭菌与甘油三酯和空腹血糖独立相关,柔嫩梭菌与尿酸独立相关。结论 VFA对胰岛素抵抗的诊断价值比BFP高。普拉梭菌和柔嫩梭菌与胰岛素抵抗存在相关性,且普拉梭菌与内脏脂肪相关。

肠道菌群在糖尿病肾病中的变化及其与eGFR的相关性探究

探讨肠道菌群在糖尿病肾病严重程度中的变化分析及与表皮生长因子(eGFR)的相关性。方法 选择医院诊治的糖尿病肾病患者73例。检测其肠道菌群消化链球菌属、柔嫩梭菌属、乳酸菌属和双歧杆菌属及尿eGFR水平。比较不同糖尿病肾病严重程度患者的肠道菌群及尿eGFR水平,分析其相关性。结果 重度患者肠道菌群数量多于中度组及轻度组(P<0.05),且中度患者多于轻度(P<0.05)。重度患者尿eGFR水平低于中度组及轻度组(P<0.05),且中度患者低于轻度(P<0.05)。肠道菌群数量与糖尿病肾病严重程度呈正相关(P<0.05),尿里面的eGFR浓度水平和糖尿病肾病具体的严重程度呈现出负相关(P<0.05)。结论 糖尿病肾病不同严重程度的病人肠道菌群、尿里面的eGFR浓度水平不同,且肠道菌群、尿eGFR水平均影响糖尿病肾病严重程度。

酒精性肝病患者肠道中6种重要菌群的定量分析

目的对酒精性肝病患者肠道中大肠杆菌、粪球菌、乳杆菌、双歧杆菌、拟杆菌及柔嫩梭菌的含量变化进行定量分析,并就其与肝损伤的相互关系进行初步探讨。方法全自动生化分析仪检测健康人及酒精性肝病患者血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及谷氨转肽酶(GGT)活力;ELISA实验检测血浆中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、D乳酸(DAO)、二氨氧化酶(D-LA)和肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)水平;荧光实时定量PCR技术对粪便中上述6种重要菌群进行定量分析。结果随着肝功能损害程度的加剧、饮酒史及饮酒量的增加,酒精性肝病患者血清ALT、AST、GGT活力,及血浆TNF-α、IL-6、DAO、D-LA和FABP2水平均较健康人群组及各自对应组有不同程度升高(P<0.05)。粪便中双歧杆菌和拟杆菌含量均明显降低(P<0.05),而大肠杆菌、粪球菌、乳杆菌和柔嫩梭菌含量有所改变,但未见显著性差异(P>0.05)。结论肠道微生态失调在酒精性肝病发生发展过程中发挥重要作用,其作用机制可能与酗酒导致肠道中双歧杆菌和拟杆菌等肠道菌群生长受到抑制有关。

下一代益生菌的研究进展

肠道菌群与疾病关系的研究进展揭示和推动了肠道微生态疗法的发展, 其中益生菌是目前最为广泛使用的干预手段。疾病相关关键菌株的发现为下一代益生菌的开发提供了重要基础。目前下一代益生菌主要应用方向为代谢性疾病、炎症性肠病和肿瘤等, 其安全性、定殖能力与厌氧特性是开发过程中需要重点考虑的问题, 对其益生机制的研究有助于实现临床转化。

2型糖尿病患者肠道菌群特征及其与胰岛素抵抗间的关系

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者肠道菌群特征及其与胰岛素抵抗(IR)间的关系。方法将2017年3月至2018年1月收治的46例T2DM患者纳为观察组,同时将50例同期行健康体检者纳为对照组,首先采集观察组与对照组粪便标本,调查42例T2DM患者肠道菌落特征,并比较两组患者血脂代谢及IR指数,分析肠道菌落失常与患者血脂紊乱及IR间的关系。结果T2DM组柔嫩梭菌、肠球菌水平显著高于健康对照组[(5.78±1.12)logN/g vs(5.21±1.01)logN/g,(4.61±0.89)logN/g vs(4.23±0.87)logN/g,P<0.05],拟杆菌与大肠杆菌水平显著低于对照组[(6.64±1.07)logN/g vs(7.41±1.05)logN/g,(1.91±0.54)logN/g vs(2.18±0.55)logN/g,P<0.01,P<0.05],两组球形梭菌、乳酸杆菌、普氏菌及双歧杆菌水平无明显差异(P>0.05);两组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及IR指数间存在明显差异[(5.77±1.13)mmol/L vs(4.02±0.58)mmol/L,(3.41±0.67)mmol/L vs(1.36±0.35)mmol/L,(1.21±0.46)mmol/L vs(1.63±0.43)mmol/L,(3.59±0.89)mmol/L vs(1.89±0.51)mmol/L,(1.02±0.23)vs(3.68±1.01),P<0.05];经Pearson相关性分析得出,拟杆菌与IR指数呈负相关(r=-0.264,P<0.05),肠球杆菌与TG呈正相关,与HDL-C呈负相关(r=0.313,-0.247,P<0.05),柔嫩梭菌与HDL-C呈负相关,与IR指数呈正相关(r=-0.221,0.314,P<0.05)。结论T2DM患者存在肠道菌落失常现象,肠道菌落失常可能通过影响患者血脂代谢加重其IR现象。