和血柔肝方通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路调控自噬相关蛋白改善大鼠肝纤维化机制研究

目的:探讨和血柔肝方通过调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子-κB(NF-κB)信号通路调控自噬相关蛋白改善大鼠肝纤维化的作用机制。方法:将40只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组与和血柔肝方最佳剂量组,每组各10只。除空白对照组外,其余各组均以四氯化碳(CCl_(4))构建肝纤维化大鼠模型。造模8周后,空白对照组、模型组采用0.9%氯化钠溶液灌胃;秋水仙碱组采用秋水仙碱灌胃;和血柔肝方最佳剂量组以和血柔肝方灌胃。灌胃结束后,取各组大鼠血清及肝脏组织。生化检测各组大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;HE及Masson染色评估大鼠肝纤维化情况。RT-qPCR法检测大鼠肝组织PI3K、Akt、NF-κB以及NF-κB下游自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1的mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测大鼠肝组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB P65、p-NF-κB P65、LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平。结果:与模型组比较,和血柔肝方最佳剂量组血清ALT、AST水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,和血柔肝方最佳剂量组大鼠肝脏病理受损可见明显缓解。与模型组比较,和血柔肝方最佳剂量组大鼠肝组织PI3K、Akt、NF-κB、LC3-Ⅱ、Beclin-1基因表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,和血柔肝方最佳剂量组的PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB P65、p-NF-κB P65、LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达Western blot结果均显著降低(P<0.05)。结论:和血柔肝方可通过抑制肝纤维化大鼠肝组织PI3K/Akt/NF-κB信号通路的表达以降低自噬相关蛋白活化,从而改善大鼠肝脏炎症,减缓肝脏病理损害,改善肝纤维化。

和血柔肝方对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制物表达影响的实验研究

目的:观察和血柔肝方(HXRGF)对肝纤维化(LF)大鼠基质金属蛋白酶(MMPs)及其特异性抑制物(TIMPs)的影响,评估HXRGF对LF的疗效。方法:将80只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组(CL,n=10)和肝纤维化模型组(FL,n=70),在大鼠颈背部皮下以60%CCl 4溶液(CCl 4∶Olive oil=3∶2,3 ml/kg体重,每周2次)连续注射12周进行造模。造模成功后,原FL组大鼠被随机分为模型组、秋水仙碱组、HXRGF低剂量组、HXRGF中剂量组和HXRGF高剂量组,每组10只,分别给予相应的受试药液灌胃4周(1次/d)。比较各组大鼠的体质量、肝功能、病理Metavir评分和肝组织中MMP2、MMP13、TIMP1、TIMP2、TGFβ及Lect2的mRNA和蛋白表达量的差异。结果:①与对照组相比,模型组大鼠的肝脏形态、HE染色、免疫组化和羟脯氨酸测定结果提示肝纤维化模型复制成功,其体质量下降、肝功能恶化、病理Metavir评分升高,MMP2、MMP13、TIMP1、TIMP2、TGFβ和Lect2 mRNA水平和蛋白表达量升高(P<0.05)。②与模型组比较,HXRGF高剂量组大鼠ALT、AST水平降低(P<0.05);HXRGF高剂量组、中剂量组病理Metavir评分降低(P<0.01);HXRGF各剂量组MMP-2、TIMP1/2、TGFβ和Lect2 mRNA水平和蛋白表达量降低(P<0.05),HXRGF各剂量组MMP-13 mRNA水平和蛋白表达量升高(P<0.05)。结论:HXRGF可以显著改善CCl 4诱导的大鼠肝脏的炎症及纤维化程度,其机制可能是通过调控MMPs及其抑制物TIMPs的表达,降低Lect2调节血管生成,减少TGFβ的表达,从而减轻肝纤维化。

运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征大鼠脑肠轴的影响探讨

研究运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征(IBS-C)大鼠脑肠轴的影响。方法 采用冰水刺激法建立IBS-C模型,造模成功后,将大鼠随机分为IBS-C模型组、运脾柔肝方高、中、低剂量组(48.8g、24.4g、12.2g /kg·d)、莫沙必利组(1.35mg/ kg·d)。通过碳墨推进试验评估肠道蠕动状况,并采取酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组化法 (IHC)测定结肠、脑组织、脊髓背角中脑肠肽因子SP、VIP、5-HT表达水平。结果 与空白组比较,IBS-C模型组大鼠进食量减少、粪便颗粒数和含水量明显降低(P<0.01),碳墨推进率明显降低(P<0.05),结肠、脑组织、脊髓背角中SP含量减低,VIP、5-HT含量增加。与IBS-C模型组比较,运脾柔肝方干预后,大鼠进食量增加、活跃度增加、毛发有光泽、粪便颗粒数和含水量明显增加(P<0.05,P<0.01),碳墨推进率明显升高(P<0.01),大鼠结肠、脑组织、脊髓背角中SP含量增加,VIP、5-HT含量降低。结论 运脾柔肝方可能通过改善大鼠脑肠肽因子的表达水平从而改善大鼠肠道推进率和粪便性状。

运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征大鼠5-HT、VIP及SP影响的实验研究

目的通过观察运脾柔肝方对便秘型肠易激综合征(C-IBS)模型大鼠血清、肠组织5-羟色胺(5-HT)、血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)的影响,探讨运脾柔肝方对C-IBS模型大鼠的可能作用机制。方法将42只Wistar大鼠,随机选取6只作为正常组,剩余36只大鼠采用冰水灌胃法造模14d,评价模型,随机选取造模成功的30只大鼠,采用随机数字法分为运脾柔肝方中药低、中、高剂量组、莫沙必利组、模型对照组,每组6只。运脾柔肝方低、中、高剂量组分别以12.2、24.4、48.8g/(kg·d)的给药剂量灌胃,莫沙必利组以莫沙必利混悬液1.35mg/(kg·d)灌胃,模型对照组及空白组给予等量蒸馏水灌胃。14d后观察各组大鼠一般情况,并检测各组大鼠血清5-HT、VIP、SP水平和肠组织5-HT、VIP的含量。结果与空白组相比,模型对照组血清、结肠组织免疫组显5-HT、VIP的表达水平较正常组显著升高(P<0.01),而血清SP的表达水平则明显降低(P<0.05),不同剂量运脾柔肝方均可显著降低C-IBS模型大鼠血清5-HT、VIP的表达水平(P<0.01),明显升高大鼠血清SP水平(P<0.05),免疫组化结果显示各组均能明显降低5-HT在肠组织中的表达(P<0.05),显著降低VIP的表达(P<0.01)。结论运脾柔肝方可显著改善C-IBS模型大鼠便秘症状,可能是通过降低5-HT、VIP和升高SP的表达水平,从而调节肠道功能,发挥治疗C-IBS的作用。

益肾柔肝方联合屈螺酮炔雌醇治疗体质指数正常多囊卵巢综合征疗效及对激素水平、卵巢功能的影响

目的观察益肾柔肝方联合屈螺酮炔雌醇治疗体质指数正常多囊卵巢综合征患者疗效及对激素水平、卵巢功能的影响。方法将2019年6月—2021年1月在石家庄市中医院妇科治疗的90例正常体质指数多囊卵巢综合征患者随机分为西药组30例、中药组30例、中西医结合组30例。西药组给予屈螺酮炔雌醇治疗,中药组给予益肾柔肝方治疗,中西医结合组给予屈螺酮炔雌醇和益肾柔肝方治疗,3组疗程均为12周。检测3组患者治疗前后血清抗苗勒管激素(AMH)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平和卵泡数量、双侧卵巢体积,评价3组患者治疗前后中医症状积分,比较3组患者临床治疗总有效率,记录3组患者随访6个月内排卵率、妊娠率。结果治疗后,3组患者血清AMH、LH、T水平及窦卵泡数量、两侧卵巢体积、中医症状积分均明显低于治疗前(P均<0.05),中西医结合组上述指标均低于其他2组(P均<0.05),中药组均低于西药组(P<0.05);3组患者血清FSH水平高于治疗前,中西医结合组高于其他2组(P均<0.05),中药组高于西药组(P<0.05)。西药组、中药组、中西医结合组总有效率分别为60.0%(18/30)、76.7%(23/30)、93.3%(28/30),中西医结合组治疗总有效率显著高于其他2组(P均<0.05),中药组高于西药组(P<0.05)。随访西药组排卵率和妊娠率分别为50.0%(15/30)、36.7%(11/30),中药组分别为63.3%(19/30)、50.0%(15/30),中西医结合组分别为80.0%(24/30)、66.7%(20/30),中西医结合组排卵率和妊娠率显著高于其他2组(P均<0.05),中药组高于西药组(P均<0.05)。结论益肾柔肝方联合屈螺酮炔雌醇治疗正常体质指数多囊卵巢综合征患者的临床疗效显著优于单纯西药和中药治疗,可明显改善症状,提高排卵率和妊娠率,机制可能与调节激素水平有关。

“运脾柔肝方”治疗便秘型肠易激综合征63例临床研究

目的:观察运脾柔肝方治疗便秘型肠易激综合征(IBS-C)的临床疗效。方法:将123例IBS-C患者随机分为治疗组63例和对照组60例,治疗组采用运脾柔肝方中药汤剂口服治疗,对照组服用枸橼酸莫沙必利片。2组均治疗4周后比较临床疗效及单项症状积分、症状总积分、Zung焦虑自评量表(SAS)评分和抑郁自评量表(SDS)评分治疗前后改善情况。结果:治疗组总有效率90.5%,明显高于对照组的76.6%(P<0.05)。2组治疗后便秘、胸胁胀满、烦躁易怒等症状和SAS、SDS评分均较治疗前显著改善(P<0.05),治疗组在改善烦躁易怒、嗳气呃逆症状和SAS、SDS评分方面明显优于对照组(P<0.05)。结论:运脾柔肝方治疗IBS-C具有良好的临床疗效。

肝纤维化大鼠TGF-β_1与TIMP-1 mRNA的表达及补肾柔肝方的治疗作用

目的 :探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺 (dimethylnitrosamine ,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织金属蛋白酶抑制因子 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP 1)和转化生长因子β1(transforminggrowthfactor beta 1,TGF β1)的影响 ,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制。方法 :雄性Wistar大鼠 4 0只 ,随机分为正常对照组、模型组和治疗组 ,对模型组和治疗组运用DMN诱导大鼠肝纤维化。治疗组在造模 4周后给予补肾柔肝方灌胃 ,剂量 10 g·kg 1·d 1,共治疗 4周。第 8周末处死全部大鼠 ,对肝组织进行HE和天狼猩红染色观察 ,并采用RT PCR半定量方法 ,检测大鼠肝组织TIMP 1及TGF β1mRNA的表达水平。结果 :肝组织病理学研究结果显示DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化 ,模型组肝组织TIMP 1和TGF β1mRNA表达明显增强 ,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱 ,而正常对照组表达较少。结论 :TIMP 1与TGF β1mRNA的表达与肝纤维化的发生密切相关 ,中药复方补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TIMP 1及TGF β1具有明显的抑制作用 。

益脾柔肝方联合化疗对中晚期原发性肝癌患者疗效及生存质量的影响

目的探讨益脾柔肝方联合化疗对中晚期原发性肝癌患者疗效及生存质量的影响。方法选取2013年4月-2015年12月在台州市立医院胃肠外科进行诊治的97例中晚期原发性肝癌患者作为研究对象,采用抽签法随机分为中医组48例和单纯化疗组49例,2组均给予肝动脉介入栓塞化疗,中医组同时给予益脾柔肝方进行辅助治疗,21d为1个疗程,共计完成4个疗程。结果中医组的化疗总有效率与单纯化疗组比较差异不具统计学意义（83.33%vs.77.55%）;治疗后,中医组的生活质量（quality of life,QOL）评分、行为状态评分（Karnofsky performance score,KPS）高于单纯化疗组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;治疗后,中医组的各项中医症候积分低于单纯化疗组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论益脾柔肝方联合化疗对中晚期原发性肝癌患者的化疗效果影响不显著,但是可以显著的缓解患者的临床症状、提高患者的生存质量。

补肾柔肝方治疗大鼠肝纤维化的实验研究

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导的大鼠肝纤维 化的治疗作用。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组及治疗组。模型组和治疗组大 鼠以10mg/kg的剂量腹腔注射0.5%DMN,1次/d,每周连续3d,共4周。模型组在造模结束后给予生理 盐水灌胃,而治疗组在造模结束后灌胃补肾柔肝方(10ml·kg-1·d-1)进行治疗干预,共用药4周。第8周 末处死全部大鼠,采用全自动生化分析仪检测血清总胆红素(totalbilirubin,TBIL)、丙氨酸氨基转移酶 (alanineaminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)、白蛋白 (albumin,A)及球蛋白(globulin,G)等;用放射免疫法检测血清透明质酸(hyaluronicacid,HA)、层黏连蛋 白(laminin,LN)及Ⅳ型胶原(collagenⅣ,Ⅳ C)的含量。结果:治疗组大鼠一般状态明显好于模型组;正常 组大鼠无死亡,而模型组大鼠病死率为40%(6/15),治疗组病死率为20%(3/15);与正常组比较,模型组大 鼠的血清TBIL、ALT及AST显著升高(P<0.01),治疗组较模型组有显著改善(P<0.01);模型组大鼠 血清的A/G严重倒置,达到0.62±0.07,较正常组差异显著(P<0.01),而治疗组的A/G有一定程度的改 善,为0.77±0.04(P<0.05),但是仍倒置比较明显。血清胶原?

柔肝方上调肝组织Dectin-1及下调TLR4治疗CCl4造模小鼠肝纤维化的作用机制研究

目的评价柔肝方对CCl4致肝纤维化小鼠的治疗作用及对Dectin-1、Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法C57BL小鼠60只,随机分为对照组、模型组和柔肝方组。模型组与柔肝方组均腹腔注射CCl4,每周3次,共6周;其中第3周起两组分别给予0.9%NaCl溶液与柔肝方灌胃,干预6周。检测各组小鼠肝功能,肝组织中Dectin-1、TLR4及相关下游蛋白和mRNA的水平,探讨柔肝方的抗肝纤维化作用。结果柔肝方组ALT、AST明显低于模型组,ALB明显高于模型组(P<0.01);柔肝方组肝脏假小叶形成和纤维化程度以及肝脏羟脯氨酸(Hyp)水平明显低于模型组(P<0.01);柔肝方组Dectin-1表达高于模型组(P<0.01),TLR4表达水平低于模型组(P<0.01);柔肝方组肌动蛋白α(α-SMA)、转化生长因子受体(TGF-β1 R)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)表达均明显低于模型组(P<0.01),且柔肝方组脊髓趋化因子受体2(CCR2)表达也明显低于模型组(P<0.01)。结论柔肝方具有较好的抗肝纤维化的作用,其机制可能与上调Dectin-1、下调TLR4的表达有关,也可能与下调CCR2表达有关。

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体-γ与转化生长因子-β1表达的影响

目的研究扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ与转化生长因子(TGF)-β1表达的影响及机制。方法 80只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、扶正化瘀组、FRF大、中、小剂量组,采用四氯化碳加上乙醇复制大鼠HF模型,造模10 w成功后,给予对应药物干预,每日1次,连续4 w,正常对照组、模型组给予生理盐水。检测血清肝纤维化指标,采用苏木素-伊红(HE)染色观察HF程度,免疫组化法观察肝组织PPAR-γ的表达,q RTPCR、Western印迹方法检测肝组织PPAR-γ、TGF-β1 m RNA和蛋白表达水平。结果模型组的HF分期较其余组明显升高(P <0. 01),模型组大鼠肝纤维化指标较其余各组均明显升高(P<0. 01),模型组肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达明显下调(P<0. 01),TGF-β1表达明显升高(P<0. 01);与模型组比较,各药物干预组肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达上调,TGF-β1 m RNA和蛋白表达下调,其中FRF大剂量组差异有统计学意义(P<0. 01)。结论 FRF上调HF肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达水平,下调TGF-β1表达,可能是其抗HF作用机制之一。

补肾方和柔肝方含药血清对软骨细胞增殖动力学研究

目的 :探讨补肾方和柔肝方对软骨细胞增殖的影响。方法 :补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞 ,测定 H3 -Td R的掺入量 CPM和 MTT法测定 OD值。结果 :通过 MTT法观察确定补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞观察点在第 5～ 7天 ;采血时间点确定为末次灌胃后 3 h,而血清浓度确定为 5 %为宜 ;采血时间点确定为 1 d～ 3 h,采血灌胃剂量确定为等效剂量 ;通过 H3 -Td R掺入 ,补肾方兔血清和柔肝方兔血清有明显促进 DNA的合成作用。结论

滋肾柔肝方治疗自身免疫性肝炎30例临床观察

目的:通过对确诊为自身免疫性肝炎(AIH)患者采用中西医结合新疗法,打破西医长期、大剂量激素治疗,避免由此产生的一系列临床副作用及极高的复发率,以达到非激素治疗的目的。方法:将60例随机分为治疗组30例以滋肾柔肝联合胸腺肽及甘草酸二铵治疗;对照组30例予胸腺肽及甘草酸二铵治疗,疗程均为3个月。结果:治疗组能明显改善肝功能,明显改善肝脏纤维化指标(P均<0.05),阻止肝硬化进展;明显改善肝脏炎症。结论:滋肾柔肝方治疗AIH疗效肯定。

补肾柔肝方对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化后CTGF mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)mRNA的表达影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:♂Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=15)及治疗组(n=15).模型组和治疗组以10mg/kg的剂量腹腔注射DMN,每天1次,每周连续3d,共4wk.模型组在造模结束后给予生理盐水ig,而治疗组在造模结束后给补肾柔肝方ig进行治疗干预,用药4wk.第8周末处死全部大鼠,用放射免疫试剂盒方法检测血清胶原成分HA、LN及Ⅳ-C的含量;用HE和天狼猩红染色法观察肝组织的炎症及纤维增生情况.并采用RT-PCR半定量方法,探讨大鼠肝组织CTGFmRNA的表达水平.结果:治疗组大鼠一般状态明显好于模型组正常组大鼠无死亡,模型组死亡率为40%,治疗组死亡率20%.模型组血清胶原成分HA、LN及Ⅳ-C的含量较正常组显著增高,治疗组较模型组显著下降(HA:319.75±63.23pg/Lvs434.44±98.81pg/L;LN:44.83±4.09pg/Lvs70.67±6.32pg/L;Ⅳ-C:52.79±5.71pg/Lvs79.39±10.52pg/L,均P<0.01).DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化,模型组肝组织CTGFmRNA表达明显增强,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱(CTGF/β-actin:0.76±0.10vs1.08±0.17,P<0.01),而正常对照组表达较少.结论:CTGF mRNA的表达可能与肝纤维化的发生密切相关,中药复方补肾柔肝方具有较好的抗肝纤维化作用,可以显著抑制大鼠肝组织CTGF mRNA的表达.

补肾柔肝方治疗乙肝后肝纤维化临床对照研究

目的:探讨补肾柔肝方治疗乙肝后肝纤维化的临床疗效。方法:采用随机对照的方法,将60例患者分为治疗组30例和对照组30例。治疗组给予补肾柔肝方,对照组给予复方鳖甲软肝片治疗,疗程为24周。观察两组患者的临床疗效及血清肝功能、肝纤维化指标及Fibroscan的变化。结果:治疗后治疗组和对照组相比,症状和体征改善显著,两组比较有统计学意义(P<0.05);治疗组患者的HA、PШP下降幅度明显大于对照组(P<0.05)。结论:补肾柔肝方治疗乙肝后肝纤维化具有较好的临床疗效,其降低肝纤维化指标HA、PШP及改善肝弹力的效果优于复方鳖甲软肝片。

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的干预作用

目的探讨补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β_1-Smads信号通路的影响。方法将53只Wistar大鼠随机分成空白组8只、模型组15只、补肾柔肝方组15只和秋水仙碱组15只。除空白组外,其余组均首次在背部皮下注射纯四氯化碳5 m L/kg,3 d后注射40%CCl4花生油3 m L/kg,每周注射2次,连续8周。第9周开始,补肾柔肝方组和秋水仙碱组分别给予补肾柔肝方流浸膏5 m L/(kg·d)、秋水仙碱溶液5 m L/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,共8周。然后取各组大鼠肝组织,分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应检测肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白,Smad2和Smad3磷酸化水平及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA的表达情况。结果与空白组比较,模型组肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ蛋白及TGF-β_1、TβRI、TβRⅡmRNA表达水平均显著升高(P均<0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均>0.05);与模型组比较,补肾柔肝方组和秋水仙碱组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白以及TGF-β_1、TβRⅠ、TβRⅡmRNA表达水平均显著降低(P均<0.05),Smad2和Smad3磷酸化水平无明显变化(P均>0.05)。结论在TGF-β_1-Smads信号通路中,补肾柔肝方主要是通过抑制TβRⅠ、TβRⅡ表达,无法磷酸化的Smad2和Smad3失去活性,从而阻断信号通路传导发挥抗纤维化的作用。

补肾柔肝方对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的预防作用及其机制研究

目的:探讨补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化的预防作用及初步机制。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=15)及补肾柔肝方预防组(n=15)。模型组和补肾柔肝方预防组以10mg/kg DMN腹腔注射,1次/d,每周连续3d,共4周。模型组在造模同时给予生理盐水灌胃,补肾柔肝方预防组在造模同时给予补肾柔肝方灌胃,共4周;第4周末处死全部大鼠,留取血清及肝组织标本。采用全自动生化分析仪检测血清总胆红素(total bilirubin,Tbil)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白等;应用逆转录聚合酶链式反应法检测肝组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果:补肾柔肝方预防组大鼠一般状态明显好于模型组;模型组大鼠死亡率为13.33%(2/15),补肾柔肝方预防组死亡率为6.67%(1/15);模型组大鼠腹水发生率为46.67%(7/15),补肾柔肝方预防组大鼠腹水发生率为20%(3/15),两组比较差异有统计学意义(P<0.01);补肾柔肝方组肝功能较模型组有显著改善(P<0.01)。模型组肝组织CTGF和Ⅰ型胶原mRNA表达明显增强,补肾柔肝方预防组与模型组相比明显减弱(P<0.01)。结论:补肾柔肝方可通过抑制大鼠肝组织CTGF和Ⅰ型胶原mRNA的表达,达到抗肝纤维化的作用。

和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路的影响

目的观察和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路相关因子表达的影响,探讨其治疗肝纤维化的作用机制。方法SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组,造模组大鼠每周2次颈背部皮下注射60%CCl4溶液(CCl4∶橄榄油=3∶2),剂量3 mL/kg,连续12周,复制肝纤维化大鼠模型。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及和血柔肝方低、中、高剂量组,每组10只。各给药组分别予相应药液灌胃,对照组和模型组予等体积蒸馏水,每日1次,连续4周。给药结束后分别检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST),HE染色观察大鼠肝组织病理变化,RT-PCR检测大鼠肝组织鞘氨醇激酶1(SphK1)、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)及转化生长因子-β(TGF-β)mRNA表达,Western blot检测大鼠肝组织SphK1、S1PR3、ERK1、PTEN和TGF-β蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量、肝质量、肝系数和脾系数显著降低(P<0.01,P<0.05),血清ALT、AST含量显著增加(P<0.01),肝脏呈深褐色、无光泽,肝体缩小,包膜粗糙,散在大小不等的结节,肝小叶结构破坏,汇管区和中央静脉间有明显桥接纤维间隔形成,并伴有少量炎性细胞浸润,肝组织TGF-β、SphK1、TRAF2、PTEN、ERK1和S1PR3 mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05),TGF-β、SphK1、PTEN、ERK1、S1PR3蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠体质量、肝质量、肝系数、脾质量和脾系数差异无统计学意义(P>0.05),和血柔肝方高剂量组大鼠肝脏形态和肝小叶结构改善,纤维间隔明显减少,炎性细胞浸润减少,和血柔肝方各剂量组大鼠肝组织TGF-β、SphK1、TRAF2、PTEN、ERK1和S1PR3 mRNA表达显著降低(P<0.01),TGF-β、SphK1、PTEN、ERK1、S1PR3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论和血柔肝方可减轻CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏炎症及纤维化状态,尤以和血柔肝方高剂量组疗效显著,其可能通过抑制SphK1/S1P/S1PR信号轴活化状态、减少TGF-β产生,发挥治疗肝纤维化的作用。

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学以及α-SMA蛋白表达的影响

目的观察补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学的影响。方法 SD大鼠随机分为空白对照组8只、模型组15只、秋水仙碱组15只、补肾柔肝方组15只。均以标准鼠食饲养,自由饮水,除空白对照组外,其余各组大鼠采用CCl4造模8周制备肝纤维化模型。从第9周开始,秋水仙碱组、补肾柔肝方组灌胃相应药物,空白对照组、模型组灌胃等体积生理盐水,均连续灌胃8周。末次给药后2 h,取肝组织进行HE、天狼猩红染色,评价肝细胞变性与胶原纤维增生程度。分别采用RT-PCR法和蛋白印迹法检测肝组织α-SMA表达情况。结果补肾柔肝方组大鼠肝脏的纤维化程度明显低于模型组;与空白对照组相比,模型组大鼠的α-SMA蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,秋水仙碱组及补肾柔肝方组α-SMA蛋白表达水平有所降低(P均<0.05)。结论补肾柔肝方能够降低大鼠肝脏内α-SMA蛋白的表达水平,具有明确的抗肝纤维化作用。

灵甲柔肝方治疗慢性乙型肝炎肝炎后肝硬化43例

目的:观察灵甲柔肝方治疗肝炎后肝硬化的疗效。方法:将85例肝炎后肝硬化肝肾亏虚兼瘀血阻络型患者随机分为两组。治疗组43例给予灵甲柔肝方,每日1剂水煎服,每日3次;对照组42例给予复方鳖甲软肝片口服,每次4片,每日3次。结果:治疗组可显著降低HA、PC-Ⅲ、LN肝纤维化血清标志物水平,改善ALT、AST、A、G肝功能指标。两组以上诸指标及总疗效比较,治疗组显著优于对照组(P均<0.05)。结论:灵甲柔肝方对肝炎后肝硬化肝肾亏虚兼瘀血阻型具有显著的治疗作用。