柚皮素磷脂复合物对实验性脉络膜新生血管NF-κB/iNOS通路的影响

目的探讨柚皮素磷脂复合物(NPC)对实验性脉络膜新生血管NF-κB/iNOS通路的影响。方法建立大鼠脉络膜新生血管模型,随机分为空白对照组、溶媒组、柚皮素(Nar)治疗组、NPC高、中、低治疗组,眼底血管荧光造影(FFA)检查分析评估CNV形成率,脉络膜铺片荧光显微镜观察CNV面积,实时荧光定量聚合酶链锁反应(RT-qPCR)和Western blot分别检测眼后节组织中NF-κB、iNOS、COX-2、VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达。结果FFA检查可见空白对照组,溶媒组显示有强荧光渗漏,荧光素渗透面积分别扩大180点、175点,占总光凝数192点的93.75%、91.14%;Nar组荧光信号减弱,渗透范围扩大161点,占总光凝点数的83.85%,与空白对照组相比CNV形成率差异有统计学意义(X^2=9.454,P=0.000);NPC低、中、高剂量组较空白对照组荧光信号显著减弱,渗透范围分别为143点、120点、105点,分别占总光凝数的74.47%、62.5%、54.68%,光凝4周后CNV形成率差异均有统计学意义(X^2NPC低=26.681、X^2NPC中=54.857、X^2NPC高=76.555,均P=0.000)。治疗4周后,空白对照组、溶媒组新生血管面积最大,两组之间无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,Nar组和NPC组CNV面积明显减少,差异有统计学意义(tNar=15.165,tNPC低=21.411,tNPC中=29.815,tNPC高=34.129,均P=0.000);NPC低、中、高三组组间比较总体差异有统计学意义(F=35.117,P=0.000)。NPC高剂量组CNV面积显著小于低、中剂量组(tNPC低=8.275,PNPC低=0.000;tNPC中=3.529,PNPC中=0.002)。与Nar相比,NPC低、中、高剂量组CNV面积明显减少(tNPC低=8.824,tNPC中=13.920,tNPC高=17.724,均P=0.000);与空白对照组相比,溶媒组6项观察指标mRNA表达水平均无统计学意义(P>0.05);Nar组COX-2、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平与空白组相比有统计学意义(tcox-2=10.824,tMMP-2=6.346,tMMP-9=14.710,均P=0.000);NPC低、中、高剂量三组组间在NF-κB、COX-2、VEGF mRNA有统计学意义(FNF-κB=95.681,Fcox-2=65.732,FVEGF=86.90,均P=0.000),NPC低剂量组6项观察指标mRNA表达水平较Nar组降低(tNF-κB=9.824,tiNOS=6.824,tcox-2=9.357,tVEGF=5.824,tMMP-2=5.914,tMMP-9=4.560;均P=0.000),NPC组高剂量组NF-kB、VEGF mRNA水平较低剂量组降低(tNF-κB=35.461,tVEGF=28.175,均P=0.000)。与空白对照组相比,溶媒组6项观察指标蛋白表达水平两组间均无统计学意义(P>0.05);Nar组6项观察指标蛋白水平与空白组相比有统计学意义(tNF-κB=4.261,tiNOS=4.750,tcox-2=3.824,tVEGF=5.432,tMMP-2=3.376,tMMP-9=10.722;均P=0.000);NPC组低剂量组iNOS、COX-2、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白水平与Nar组比较有统计学意义(tiNOS=12.117,tcox-2=3.227,tVEGF=5.972,tMMP-2=3.631,tMMP-9=4.932;均P=0.000),NPC高剂量组COX-2、VEGF蛋白表达水平较中剂量降低(tcox-2=10.753,tVEGF=6.148,均P=0.000)。结论NPC影响NF-κB、iNOS的表达,其可能通过NF-κB/iNOS通路影响实验性脉络膜新生血管的形成。

基于TMT技术的柚皮素磷脂复合物抑制大鼠脉络膜新生血管形成的蛋白质组学研究

目的应用TMT标记结合生物信息学分析技术,研究柚皮素磷脂复合物(NPC)对大鼠实验性脉络膜新生血管形成的蛋白质组学的影响。方法建立大鼠脉络膜新生血管模型,随机分为模型组、NPC组和正常对照组,应用TMT标记技术进行蛋白质组学研究,通过检索数据库Gene Ontology Database,对筛查到的差异蛋白进行生物信息学分析。结果获得特有肽段序列10819个,蛋白质2717个。模型组和NPC组、模型组和正常对照组、NPC组和正常对照组,差异表达蛋白分别为113个(上调57个,下调56个)、314个(上调202个,下调112个)、90个(上调22个,下调68个)。通过分析得到这些差异蛋白具有结合作用、抗氧化活性、催化活性、转运活性、转录调节等重要的分子生物学功能。结论基于TMT技术的蛋白质组学方法有助于鉴定出脉络膜新生血管相关的差异蛋白质,为进一步研究柚皮素磷脂复合物抑制实验性脉络膜新生血管的机制提供依据。

柚皮素磷脂复合物对实验性脉络膜新生血管形成的抑制作用及其机制研究

目的探讨柚皮素磷脂复合物(NPC)对实验性脉络膜新生血管的抑制作用及对基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)通路的影响。方法用氪激光光凝视网膜与脉络膜法制备脉络膜新生血管大鼠。按照体重将大鼠随机6组:正常组(0.9% NaCl)、模型组(建模后0.9% NaCl)、对照组(柚皮素20mg·kg^-1)和低、中、高3个剂量实验组(柚皮素磷脂复合物30,60,90mg·mL^-1),每组20只。分别用实时荧光定量PCR和免疫组化检测脉络膜中SDF-1、CXCR4的基因和蛋白表达水平;用免疫印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果给药后,模型组、对照组和高剂量实验组的SDF-1基因表达水平分别为1.94±0.12,1.62±0.11和1.06±0.09;上述这3组的SDF-1蛋白表达水平分别为57.42±5.67,47.54±4.06和30.28±4.06;上述这3组的CXCR4基因表达水平分别为1.84±0.06,1.38±0.07和1.07±0.05,上述这3组的CXCR4蛋白表达水平为70.44±4.59,60.34±4.36和45.18±4.09;上述这3组的的VEGF分别为1.16±0.06,0.79±0.07和0.31±0.05;上述这3组的MMP-2分别为1.20±0.07,0.65±0.09和0.47±0.08;上述这3组的MMP-9分别为1.47±0.05,1.13±0.06和0.33±0.04。高实验剂量组和对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NPC能够抑制实验性脉络膜新生血管形成,其机制可能与抑制SDF-1/CXCR4通路和影响VEGF、MMP-2与MMP-9蛋白表达有关。