耐药柠檬酸杆菌属β-内酰胺酶检测

目的了解安徽医科大学第一附属医院临床分离的耐药柠檬酸杆菌属产β-内酰胺酶的情况。方法采用琼脂稀释法测定17种抗菌药物对临床分离的52株柠檬酸杆菌最低抑菌浓度(MIC),用改良三维试验检测31株柠檬酸杆菌ESBLs、AmpC、MBL的产酶情况,再用聚合酶链反应(PCR)法扩增β-内酰胺酶基因。结果31株柠檬酸杆菌对多种抗菌药物耐药,三维试验检出24株菌产ESBLs,3株菌产AmpC酶,2株同时高产AmpC酶和ESBLs,未检出MBL;PCR检出20株菌携带blaTEM基因,1株菌携带blaSHV基因,8株菌携带blaCTX-M-1基因,15株菌携带blaCTX-M-13基因,5株菌携带blaCIT基因。结论31株多重耐药的柠檬酸杆菌同时产>1种的ESBLs及高产AmpC酶,是其对β-内酰胺类药物耐药的重要原因。

柠檬酸杆菌属医院感染特性与多药耐药分析

目的调查医院柠檬酸杆菌属感染的菌群分布、产酶的特性和对抗菌药物的耐药性,分析其多药耐药(MDR)特点,指导临床用药。方法对临床分离147株柠檬酸杆菌属,采用三维试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶,用双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶(MBL),并使用K-B纸片琼脂扩散法测定其对15种抗菌药物的耐药性。结果柠檬酸杆菌属医院感染以弗氏柠檬酸杆菌为主,其次是无丙二酸柠檬酸杆菌,ICU的分离率与内、外科、其他病区相比差异无统计学意义(P>0.05);呼吸道与泌尿道感染率相近,明显高于其他部位(P<0.01);柠檬酸杆菌属总分离株的ESBLs、AmpC、同产ESBLs和AmpC、MBL检出率分别为36.05%、10.20%、7.48%和2.72%,总分离株对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为4.76%、3.40%,其次是对头孢哌酮/他唑巴坦为23.81%;对其余抗菌药物的耐药率均>40.00%;非ICU和ICU多药耐药菌分别占53.64%和81.08%,两组病房差异有统计学意义(P<0.01)。结论医院感染的柠檬酸杆菌属ESBLs产酶率高,且大多呈多药耐药,亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/他唑巴坦对其具有良好的抗菌活性。

枸橼酸杆菌耐药机制的研究

由于第三代头孢菌素在临床上广泛应用,在抗生素选择压力作用下,从临床标本中分离出枸橼酸杆菌的耐药菌株越来越多。枸橼酸杆菌主要对β-内酰胺类、氨基糖甙类、喹诺酮类、碳青霉烯类抗生素耐药。

在一株弗劳地柠檬酸杆菌中发现KPC-2型碳青霉烯酶

柠檬酸杆菌为条件致病菌，机体抵抗力下降时可引起腹泻和肠道外感染如败血症、脑膜炎、泌尿道、呼吸道及创伤感染等。根据中国医院内病原菌耐药监测网（NPRS）数据，1994-2001年分离到的革兰阴性致病菌中，柠檬酸杆菌属占第10位。

一株烷烃降解细菌的分离鉴定及其降解特性

从天津海域采集的水样中筛选获得一株烷烃降解细菌,经16S r RNA基因鉴定,结合菌株的形态学特征和生理生化特性分析,鉴定为柠檬酸杆菌属(Citrobacter),命名为Citrobacter sp.TUST-S5.利用GC-MS检测出菌株Citrobacter sp.TUST-S5能降解链长C11—C28的烷烃;对C20以上的长链烷烃,降解率为80%,以上,且降解率随碳链长度的增加呈升高的趋势;菌株的生长曲线及降解曲线显示菌株对烷烃的降解率的变化与菌浓度紧密相关;菌株的乳化活性为47.86%,疏水性为38.30%.菌株Citrobacter sp.TUST-S5对中长链烷烃的降解效果显著,乳化作用明显,对于修复海洋石油污染具有重要的作用.

枸橼酸杆菌中质粒介导喹诺酮耐药基因的检测

目的了解枸橼酸杆菌中质粒介导喹诺酮耐药（PMQR）基因的分布，以期发现新型PMQR基因。测定临床分离的PMQR基因阳性枸橼酸杆菌对临床常用抗菌药物的敏感性。方法收集安徽医科大学第一附属医院检验科2009年临床分离的枸橼酸杆菌，PCR扩增qnr、nnr（6’）-Ib-cr和qepA基因，产物纯化测序，测序结果在GenBank上比对并行转移接合实验。对收集的PMQR基因阳性枸橼酸杆菌及其接合子，采用琼脂对倍稀释法进行临床常用抗菌药物的药物敏感试验。结果收集的枸橼酸杆菌共31株，8株菌株扩增出qnr，qnr基因阳性率为25．8％；其中6株扩增出qnrB。4株qnr阳性菌株的qnr基因转移接合成功。在qnr阳性的枸橼酸杆菌中，测序发现1种PMQR基因新亚型，命名为qnrB24。所有qnr阳性临床菌株对喹诺酮类药物的耐药率为87．5％，对头孢噻肟、阿米卡星、头孢他啶、头孢吡肟和庆大霉素的耐药率分别为75．0％、7．5％、62．5％、37．5％和87．5％，所有qnr阳性菌株对亚胺培南耐药表型为敏感。喹诺酮类药物对qnr阳性的接合子最低抑菌浓度升高10-23倍，敏感性下降。结论安徽地区枸橼酸杆菌中qnr基因型的检出率较高，以qnrB基因型为主，qnr阳性枸橼酸杆菌对常用抗菌药物耐药性较高。

耐胆汁型牛黄转化菌的分离、鉴定及其牛黄转化活力研究

目的分离和鉴定能够耐受牛胆汁的牛黄转化细菌,并应用到体外培育牛黄的制备。方法从形成牛黄的牛胆囊胆汁中分离到可在牛胆汁中长期存活且具有较强牛黄转化能力的菌株(NDZNM-01),观测其外部形态、理化性状、分类学地位、牛胆汁耐受力,以及牛黄转化活力。结果根据对NDZNM-01菌株外部形态与生理生化特征的检测结果,判断为柠檬酸杆菌属细菌。进一步根据其16S rDNA序列的聚类分析结果,显示该菌株与其他3种柠檬酸杆菌属的细菌聚在一个分支上,但形成单系,属于新发现的菌株。应用菌株NDZNM-01发酵新鲜牛胆汁,其中的胆红素含量增加了2.35倍,胆酸含量增加了2.13倍。结论综合对NDZNM-01菌株的形态观察、生理生化鉴定,以及分子鉴定结果,NDZNM-01属于一种能够耐受牛胆汁的柠檬酸杆菌属的肠道细菌,具有高效转化牛胆汁为牛黄的活力。该牛黄转化细菌最终命名为Citrobacter bovis NDZNM-01 Wang Houwei,菌种收藏编号为CGMCC24893。

黑胸散白蚁肠道具内切葡聚糖酶活性共生菌的筛选、鉴定及产酶条件的优化

目的从黑胸散白蚁肠道内筛选获得具有降解纤维素性能的菌株,并对菌株最佳产酶条件进行优化。方法采用筛选性培养基进行筛选,通过培养性状、显微观察及16S rDNA部分片段同源性分析进行菌种鉴定,利用正交试验优化该菌株的最佳产酶培养基配方以及单因子试验优化产酶培养条件。结果通过鉴定,获得的菌株属柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.B03),最适产酶的碳氮源为CMC-Na和蛋白胨。该菌株最佳产酶培养基的配方为CMC-Na5.0 g/L、蛋白胨5.0 g/L、NH4Cl 0.6 g/L、KH2PO4 0.9 g/L、MgSO4 0.9 g/L;最佳产酶培养条件为起始pH 5.0,温度35℃,装液量20～30 mL/150 mL。结论经过优化,可将该菌株产生的纤维素酶酶活力从0.184 U/mL提高到0.311 U/mL,该研究结果对纤维素酶的工业开发具有一定的指导意义。