弗氏柠檬酸细菌酪氨酸酚解酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从弗氏柠檬酸细菌 (Citrobacterfreundii)中扩增得到含有酪氨酸酚解酶基因的DNA片段 ,定向连接到质粒 pUC118上 ,得到重组质粒 pTPL ,将此重组质粒转化到受体菌E .coliXL - 1-BlueMRF′中 ,通过蓝白斑鉴定挑出阳性菌株。从此阳性菌株中提取质粒 pTPL并将此质粒转入到E .coliJM 10 9中 ,用E .coliJM 10 9(pTPL)制备高活性的酪氨酸酚解酶。对质粒稳定性的研究表明 ,E .coliJM 10 9(pTPL)在无选择压力下 37℃连续培养 5 0代以上 ,质粒丢失率仅有 15 % 。

一株高效降酚菌的质粒特性及柠檬酸细菌表达的研究

在焦化废水处理厂的活性污泥中筛选的降酚效果较好的菌株H,研究其质粒特性并提取其降解质粒将其转入柠檬酸细菌进行表达。结果表明H菌株具有质粒,且质粒片段较大最大的超过10 kb,最小的2 kb左右。通过SDS和原生质体再生法分别对H菌进行质粒消除,结果发现质粒去除的菌株降酚能力也随之消失。说明H菌株的质粒上有控制酚降解基因存在;提取H菌的质粒将其转入柠檬酸细菌进行表达,获得了转化子。转化子具有较好的降酚效果12 h可达77.34%,但转化子的降解速率较小。另证明了转化子内含有与H菌株相同特性的质粒得到具有降酚能力的柠檬酸细菌表达体系。

弗氏柠檬酸细菌TNT降解酶及其调节

在弗氏柠檬酸细菌(citrobacter freundii)TNT降解酶中,同时检出需NAD(P)H的TNT还原酶和需NAD(P)^+的TNT脱氢酶。研究了酶形成的时间过程和辅酶在TNT酶促降解反应中的行为。不同种类和不同浓度的碳、氮源对酶形成的调节作用不同。当NH_4Cl和尿素浓度小于0.1 mol/L时,能促进TNT还原酶和TNT脱氢酶的产生。KNO_3严重阻遏这两种酶的形成。葡萄糖对TNT还原酶和TNT脱氢酶的形成均有促进作用。柠檬酸钠有助于TNT脱氢酶的生成,当其浓度小于0.5%,使TNT还原酶活力提高,当大于此浓度时,使该酶活力迅速下降。

转座子Tn5对柠檬酸细菌的诱变

含自杀性质粒 PJB4JI∷Mu∷Tn5的大肠杆菌1830与四株柠檬酸细菌作接合杂交均能获得 Kan^r 转移接合子。其中一株(C-3-1)的 Kan^t 转移接合子中绝大部分对庆大霉素敏感。鉴别了3000个这样的转移接合子菌落获得了21株营养缺陷型,其中赖氨酸1株,尿嘧啶1株,精氨酸2株,异亮氨酸2株,组氨酸2株,甲硫氨酸1株,苯丙氨酸1株,酪氨酸1株,丝氨酸1株,苏氨酸1株,亮氨酸3株,脯氨酸1株,腺嘌呤3株和乳糖利用1株。用琼脂糖电泳检查部分营养缺陷型突变体 DNA 均未发现自杀性质粒 PJB4JI∷Mu∷Tn5,以^(32)P 标记的Tn5 DNA 为探针与每个营养缺陷型的染色体作杂交均看到了 Tn5 DNA 同源序列的存在。由此得出结论,这些营养缺陷型产生于转座子 Tn5从自杀性质粒 PJB4JI 到 C-3-1染色体的转座。

利用甲醇的弗氏柠檬酸细菌的分离鉴定

分离到一株新的甲醇利用细菌,初步鉴定为弗氏柠檬酸细菌(Citrobacter freundii)4-1-1。该菌能以甲醇作为唯一碳源和能源,在甲醇无机合成培养基上,28—42℃条件下均能生长,以32℃为最适温度;pH5.4—8.0下可生长,最适pH为6.4—7.0;对甲醇最高耐受量为5.5%(V/V)。在适宜条件下,该菌比生长速率常数为0.691/h,甲醇转化率为36%。

信鸽柠檬酸细菌病的诊断与免疫试验

１９９７年上半年，兰州市参加全国比赛归巢的信鸽发生下痢。４月份，该病在兰州市七里河区某信鸽养殖场暴发流行，全场２２３６只信鸽死亡１９５６只，其中雏鸽全部死亡。之后，该病很快波及到兰州市城关区、安宁区和西固区的所有养鸽场。以后曾对病鸽用氯霉素、土霉素和...

尿路感染患者应用抗生素与中段尿细菌培养阳性率的关系

本文就我院门诊病人有尿频、尿急,尿痛等膀胱刺激症和尿沉渣检查脓细胞大于10/高倍的患者,取中段尿培养和计数,来观察患者在用过抗生素与未用过抗生素的中段尿培养的阳性率,现将结果报告如下。 一、材料与方法 1.材料:无菌试管,定量接种环,血平板,麦康凯平板,细菌鉴定系统。

一株高产谷氨酰胺酶菌株的鉴定和酶活特性的研究

对筛选得到一株高产谷氨酰胺酶菌株进行了初步鉴定并对酶活特性做了研究。通过生理生化实验并结合菌体形态特性,结果发现该菌株可以确定该菌属于柠檬酸细菌属(Citrobacter)。通过单因素试验,考察了温度、pH、NaCl和产物谷氨酸对该菌株产生的谷氨酰胺酶的影响。结果发现菌株产生的谷氨酰胺酶的最佳反应pH为6.2,酶最适反应温度为50℃。酶最稳定的pH为6.2,温度低于40℃,酶具有较高的稳定性。高浓度的NaCl对谷氨酰胺酶活性基本无影响,谷氨酸对酶也没有明显的抑制作用。

酪氨酸酚解酶高产菌株快速筛选模型的建立与应用

以甲酚红作指示剂 ,在加有酪氨酸的固态培养基上 ,根据甲酚红由黄变红所形成的变色圈的大小筛选酪氨酸酚解酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。弗氏柠檬酸细菌ATCC80 90菌株经紫外线和亚硝基胍诱变处理后 ,经该法筛选得到突变株C37 30 ,该菌株产酪氨酸酚解酶达 12 5U/ g干菌体 ,较出发菌株提高 2 32 %。连续 5代传代试验表明 ,突变株C37

化工上的应用

910333 补加丙酸盐和乙酸盐对丙酮丁醇梭菌分批培养时产生溶剂的影响[英]/Huesemann,M.H.W.…//Appl,Environ.Microbiol.-1990,56(5).-1497～1500[译自CBA,1990,(7),2977] 给不调节pH值的分批培养补加丙酸和乙酸盐对溶剂产生的开始过程无影响,但同不补料的培养相比,溶剂的终浓度提高.此现象可能是因为补加的酸提高,培养基的缓冲能力,因发酵后期培养物pH低,防止了培养物生长过早被抑制.由于丙酮比丙醇形成的少,通过辅酶A转移酶途径丙酸不会单独从培养基中被吸收.