花生白藜芦醇合成酶基因家族序列克隆及分析

以花生H2007为材料，从花生基因组中扩增出约500bp的白藜芦醇合成酶基因（Resveratrol synthase，RS）的保守序列，该序列与已发表的来源于花生的RS推导的蛋白序列相似性为91％。根据获得序列设计巢式基因特异性引物，以紫外辐射后花生叶片总RNA反转录成的cDNA作为模板，通过3’-RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends），获得15个不同RS基因的片段，序列分析结果表明，扩增得到的15个白藜芦醇合成酶基因片段与已报道的基因的序列相似性为86％～98％。RS的部分编码区聚类分析结果表明这15个序列遗传距离在0．05之内（图5）。15个RS基因的3’-uTR碱基长度不等，最短的有69bp，最长的有244bp，两两比较相似性为23％～100％。四组RS基因的部分编码区聚类分析结果与3’-uTR区相同。

擎天凤梨花色素合成关键基因CHS、F3'H和DFR的克隆及表达分析

擎天凤梨‘Ostsra’是一种观赏红色苞片为主的高档盆栽花卉。一般认为植物苞片的呈色物质除叶绿素外多来源于花色素,而CHS、F3'H和DFR是在花色素的合成过程中的关键酶。本研究采用采用简并引物及同源克隆法获得了881 bp的CHS基因,编码276个氨基酸的序列,GenBank登录号为KX364270;采用cDNA全长文库构建、EST批量测序及目标单克隆序列测通法,获得了F3'H和DFR基因。F3'H基因长1 176 bp,可编码325个氨基酸序列,GenBank登录号为KX364271;DFR基因长1 209 bp,可编码167个氨基酸的序列,GenBank登录号为KX364272。采用实时定量PCR法检测CHS、F3'H和DFR在‘Ostsra’苞片呈色过程中的表达变化,结果表明,3个基因在苞片变色过程中(绿苞-半红苞-全红苞)都呈现出递增的趋势,即随着苞片颜色的变深,3基因的表达量逐渐增加,全红状态时,表达量最高,而作为对照的绿叶,表达水平都是最低的。