柯氏无梗囊霉双重培养体系的构建

利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)C58C1诱导烟草Va116产生毛状根,建立烟草Va116毛状根-柯氏无梗囊霉(Acaulospora koskei)双重培养体系;分析不同消毒方法、培养基pH、激素对柯氏无梗囊霉萌发的影响,筛选柯氏无梗囊霉与烟草Va116毛状根建立双重培养体系的最佳条件。结果表明:发根农杆菌C58C1菌液在600nm处的吸光值为0.6~0.8、侵染时间为8~10 min,通过抑菌、除菌培养,获得烟草Va116毛状根,诱导率为53.33%。柯氏无梗囊霉孢子在体积分数75%酒精中消毒1 min, A液(质量浓度20 g/L的氯胺(T)、每0.1 L加2滴吐温20)消毒10 min,转入B液(质量浓度200 mg/L的硫酸链霉素+质量浓度100 mg/L的硫酸庆大霉素)消毒10 min,萌发率最高(为48.33%)、污染率最低(为6.67%);柯氏无梗囊霉孢子在水琼脂培养基萌发,最佳pH为6.0;在独脚金内酯(GR24)质量浓度450 pg/L、精胺(SPM)质量浓度40 mg/L时,柯氏无梗囊霉孢子萌发效果最好,萌发率分别为61.67%、58.33%。成功建立了烟草Va116毛状根-柯氏无梗囊霉双重培养体系,产生了新生孢子,使柯氏无梗囊霉完成了整个生命周期,并记录了根外菌丝和根内菌丝的形态特征、泡囊结构的形成。

黄海大头鳕胚胎发育过程

驯化野生大头鳕（Gadus macrocephalus Tilesius）作为亲鱼,通过自然受精和人工授精两种方法获得受精卵,自然受精卵通过虹吸法收集。受精卵孵化条件为水温6~8℃,盐度32~33,pH7.8~8.2,微充气。在奥林巴斯SZ61解剖镜下对大头鳕的胚胎发育进行了观察,并使用CCD图像传感器拍照,描述了各发育时期的发育时序和形态特征。大头鳕受精卵为圆球形端黄卵,弱黏性,无油球,卵膜上具龟裂结构,卵子直径0.95~1.12mm,n=30,卵黄均匀透明。类似于大部分硬骨鱼类,其胚胎发育可分为胚盘形成期、卵裂期、桑椹期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官发生期、尾芽期、肌肉效应期。在水温6~8℃,盐度32~33的条件下,受精卵历时约336h完成胚胎发育过程,孵化出膜。在大头鳕胚胎发育过程中,具有4个不同于其他硬骨鱼类的地方：（1）发现早期分裂球具有不规则现象;（2）很多胚胎发育过程不出现柯氏囊,有柯氏囊的胚胎仅占10%左右,且出现晚,消失快;（3）胚胎孵化为仔鱼与发育进程关联性不大,孵化的仔鱼有3种主要形态;（4）胚胎各个时期都有较高死亡率,以原肠期最为严重。

黑棘鲷胚胎发育过程及特殊结构观察

驯化野生黑棘鲷(Acanthopagrus schlegelii)作为亲鱼,自然受精,通过溢水法收集发育同步的受精卵。受精卵孵化条件为水温(21.0±0.5)℃,盐度32～33,pH7.8～8.2,微充气。在奥林巴斯SZ61解剖镜下对黑棘鲷的胚胎发育进行观察,并使用CCD图像传感器拍照,描述了各发育时期的发育时序和形态特征。黑棘鲷受精卵为圆球形端黄卵,单油球,卵膜薄、局部具龟裂结构,卵子直径0.84～0.98 mm,n=30,卵黄均匀透明。其胚胎发育可分为胚盘形成期、卵裂期、桑椹期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官发生期、尾芽期、肌肉效应期。在水温(21.0±0.5)℃,盐度32～33的条件下,受精卵历时32 h完成孵化。在黑棘鲷胚胎发育过程中,发现部分卵子具两个油球,卵黄囊膜较脆弱,心脏附近具有类似于柯氏囊的囊泡存在。另外,高温(25℃)在大大缩短孵化时间的同时,增加了胚胎的畸形率和死亡率。

海水青鳉胚胎发育的观察

为了解模式生物种海水青鳉(Oryzias melastigma)的胚胎发育特征,作者培育30日龄的海水青鳉,收集自然受精卵,在水温26~28℃、盐度27~28条件下,静水孵化。利用奥林巴斯SZ61解剖镜对海水青鳉胚胎发育进行了观察研究。结果表明:海水青鳉受精卵为圆球形端黄卵,多油球,沉性,卵膜上具有绒毛膜和纤维丝。和多数硬骨相似,胚胎发育的过程大致可以分为7个期:胚盘形成期、细胞分裂期、囊胚期、原肠期、器官形成期、肌肉效应期和孵化期。并发现海水青鳉胚胎发育有其特征:早期分裂具有不规则现象;仔鱼以尾部破膜先出的方式孵化;柯氏囊出现在原口关闭前,少数个体具有两个柯氏囊。