汕头市人群柯萨奇病毒A_(24)变种的血清学抗体调查

[目的 ]观察人群中柯萨奇病毒A2 4(CA2 4V)变种的感染情况。[方法 ]采用中和试验测定人群血清抗体 ,血清作1∶10稀释 ,病毒用 10 0TCID50 在微量培养板上进行。CA2 4V与血清等量混合 ,3 7℃结合 1h接种细胞 ,观察细胞病变。 [结果 ]CA2 4V血清中和抗体阳性率和抗体几何平均滴度 (GMT)分别为 3 7 4%、8 3 9,以 15～ 5 9岁年龄组最高 (5 0 9%、8 82 ) ,7～ 14岁组最低 (19 7%、6 5 1) ;≤ 2岁组和≥ 60岁组女性阳性率比男性高 ,差异有显著性 (P <0 0 5、P <0 0 1)。[结论 ]中和抗体水平可反映人群受CA2 4V感染状态 ,青壮年及老年人的抗体阳性率高 。

柯萨奇病毒A24变种的血清抗体检测

目的 观察急性出血性结膜炎（ＡＨＣ）流行后人群中柯萨奇病毒Ａ２４ 变种（ＣＡ２４ ｖ） 感染情况（或状态）。方法 采用中和试验测定人群中血清抗体：血清作１∶１０ 稀释，病毒用１００ＴＣＩＤ５０ 在微量培养板上进行。ＣＡ２４ ｖ 病毒与血清等量混合，３７℃结合１ 小时，接种细胞，观察细胞病变。结果 ＡＨＣ流行后城市居民ＣＡ２４ ｖ 血清中和抗体阳性率为４９－６７％ ，其中１９～２５ 岁年龄组约占６９－４９％ ，统计学上有显著性（ Ｐ＜ ０－０１） 。结论 ＡＨＣ流行后人群的抗体水平，反映人群受ＣＡ２４ ｖ 感染状态、抗体阳性率与年龄有关。

肠道病毒70型和柯萨奇病毒A24型变异株细胞受体的研究

肠道病毒70型(Ev70)和柯萨奇病毒A24型变异株(CA24v)是急性出血性结膜炎(AHC)的病原体,故称为AHC病毒。这两种病毒在临床上引起同一种疾病,人们猜测这两种病毒间必有某种关系。

低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其机制

目的探讨低剂量5-Fu与腺病毒表达的IL24联用对HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法采用PCR、酶切、连接等方法构建pAd-IL24腺病毒表达载体,Western blot检测IL24蛋白水平表达情况。CCK8法确定5-Fu联用剂量,检测与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞的抑制效果,并计算联合指数。流式细胞术检测不同腺病毒感染复数及不同5-Fu浓度下绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞的比例。流式细胞术检测5-Fu作用前后HepG2细胞表面柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)的表达变化。结果成功构建腺病毒表达载体pAd-IL24。确定5-Fu联用剂量为1μg/ml和2μg/ml,Ad-IL24与低剂量5-Fu联用可以协同抑制HepG2肝癌细胞生长,联合指数分别为0.75和0.64。低剂量5-Fu作用于HepG2后使其表面CAR水平显著增加(P<0.01)。结论低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞系的抑制有协同作用,可能与5-Fu上调HepG2表面CAR水平相关。

山东省急性出血性结膜炎病原学鉴定及其柯萨奇A24病毒基因特征分析

为明确2010年引起山东省青岛市、临沂市急性出血性结膜炎(Acute hemorrhagic conjunctivitis,AHC)流行的病原,采集26例患者的眼结膜拭子标本,分别采用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)和细胞培养方法进行检测。Real time-PCR结果显示,17份标本柯萨奇病毒A组24型(Coxsackievirus A24,CVA24)阳性,阳性率为65.39%,肠道病毒70型(Enterovirus 70,EV70)和腺病毒均为阴性;使用Hep-2细胞共分离到10株病毒,通过VP1区基因扩增及核苷酸序列测定,10株病毒均鉴定为CVA24,同源性分析显示其核苷酸和氨基酸同源性分别为99.3%～100.0%和99.5%～100.0%,在系统进化树上聚集成一簇,本次分离的毒株与山东省急性弛缓性麻痹(AFP)病例中分离到的毒株序列差异较大,分别属于5个不同的进化分支。提示CVA24可能为引起两地AHC流行的病原,且属于同一传播链。

反义寡聚核苷酸抗柯萨奇A24病毒感染的研究

目的针对柯萨奇病毒A组24型(coxsackievirus A24,CVA24)基因组特殊功能区设计系列反义寡聚核苷酸序列,通过实验观察特异性反义核酸对病毒感染细胞的抑制作用。同时进行抗病毒作用的量效评价。方法通过抑制空斑形成实验、病毒致细胞病变作用及免疫印迹等实验,了解反义核酸抑制及阻断CVA24病毒感染细胞的能力,及经反义核酸抑制后病毒结构蛋白在感染细胞中的表达状况,并对抗病毒效果较好的反义核酸进行量效关系测定。结果从本实验所设计的8条反义核酸中,筛选出5条能较好抑制CVA24的反义核酸序列,分别为SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568。当病毒感染量为1 MOI时,5μmol/L的上述反义核酸的病毒活性抑制率均在50%以上。经过量效关系分析显示,0.3μmol/L的SCA568已经对细胞产生较强的保护作用,对病毒空斑形成抑制程度达80%;在2.5μmol/L的SCA568保护下,病毒空斑抑制率达到90%以上,是几条反义核酸中抗病毒效果最好的一条。SCA568对病毒早期结构蛋白的表达有较强的抑制作用。而抗病毒效果稍差的SCA723,随浓度的增加也表现出一定程度对病毒蛋白表达的抑制作用。结论本实验所筛选的5条反义核酸SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568能较好地抑制CVA24活性,为进一步研究反义核酸治疗和预防CVA24感染、防止CVA24引起的流行性出血性结膜炎的暴发流行打下基础。

柯萨奇腺病毒受体抑制膀胱肿瘤细胞T24体外迁移的实验研究

我们通过构建重组柯萨奇腺病毒受体（CAR）的逆转录病毒载体，将CAR转导入膀胱肿瘤细胞T24中，建立了稳定表达株，利用体外迁移实验检测CAR高表达对于膀胱肿瘤细胞迁移能力的影响。

柯萨奇病毒A24型变异株VP1基因变异分析

目的:从分子水平探讨2002年-2008年柯萨奇病毒A24型变异株(Coxsackie virus type A24 vari-ant,CoxA 24v)VP1基因变异情况。方法:在GenBank基因库上下载26株2002年-2008年引起AHC的CoxA 24v病毒株VP1基因核苷酸和氨基酸全序列,分析各株之间核苷酸和氨基酸序列差异;并与CoxA24原型株Joseph株核苷酸和氨基酸序列进行比较。结果:各株之间VP1基因核苷酸全序列的同源性为94.3%～100%,氨基酸全序列的同源性为97.7%～100%;与Joseph株比较,核苷酸全序列的同源性为76.4%～77.9%,氨基酸全序列的同源性为90.5%～91.8%。结论:2002年-2008年CoxA 24v病毒株VP1基因在核苷酸水平上存在着一定的变异,在氨基酸层面上也存在变异,但变异幅度相对较小。

江西省2010年柯萨奇病毒A组24型变异株的全基因组序列分析

急性出血性结膜炎(Acute hemorrhagic conjunctivitis,AHC)是目前人类最常见的眼病之一,柯萨奇病毒A组24型变异株(Coxsackievirus A24 variant,CV-A24v)是近年来报道引起该病的主要病原体。本研究选取10株来自江西省2010年AHC暴发疫情的CV-A24v,采用特异性引物扩增并测定其全基因组序列。对该10条CV-A24v的全基因组序列进行系统发育分析以及重组分析,计算本研究测定的江西10条以及GenBank中所有22条CV-A24v的全基因组序列的氨基酸置换熵值,并预测其正向选择位点。结果表明,在江西10条CV-A24v基因组序列中未检测到重组。基于全基因组序列构建的最大似然树表明江西10株CV-A24v属于GIV基因型,且分处于两条传播链。对上述32条CV-A24v序列的氨基酸置换熵值计算,共得到25个易突变位点(熵值>0.6),易突变概率最高的区段为2A区。基于Datamonkey中FUBAR和FEL模型分析,发现位于结构蛋白VP2区的234位氨基酸为两种模型共同获得的CV-A24v的正向选择位点。本研究分析了江西10株CV-A24v的全基因组序列特征,为CV-A24v引起的AHC防控工作提供了基础资料。

急性出血性结膜炎爆发中柯萨基病毒A_(24)变种的分离与鉴定

1988年7—11月湖北沙市出现了一次急性出血性结膜炎(红眼病)的爆发流行,市区发病率为7％,累计患者不少于1.7万人。用Hela细胞从38例典型红眼病患者眼拭中分离出病毒28株(74％),理化试验与电镜观察提示为肠道病毒,根据其生物学特性与特异性中和实验证明为柯萨基A组24型变种(CA24V)。检测的两个毒株中一株对乳鼠有致病性,而另一株无致病性。流行后红眼病48名患者恢复期血清CA24V特异性中和抗体阳性率(以≥1:4为阳性计)为81.2％,非红眼病对照血清阳性率为14.6％,差异极显著(P<0.01),结合流行病学与临床特征,认定是CA24V引起的AHC爆发流行。

病毒性脑炎患者Borna病病毒P24基因片段的检测

目的探讨Borna病病毒(BDV)感染与人类病毒性脑炎的关系。方法采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ nRT PCR)检测了59例临床诊断的原因未明的病毒性脑炎及112名健康人外周血单个核细胞(PBMC)中BDVP24基因片段。结果59例原因未明的病毒性脑炎患者中有3例PBMC中检出BDVP24基因片段,而112名健康对照均未检出。病毒性脑炎患者BDV阳性率(5.08%)高于健康对照,差异有统计学意义(P<0.05),且BDVP24基因片段检测阳性病例的脑脊液中其他常见致脑炎病毒(单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、柯萨奇病毒和巨细胞病毒)检查均为阴性。结论中国的部分病毒性脑炎患者中存在BDV感染,BDV感染与病毒性脑炎的发病可能有关。

2002年福建省急性出血性结膜炎病原分离和鉴定

[目的 ]查明 2 0 0 2年我省急性出血性结膜炎 (AHC)流行的病原。[方法 ]采集福州和漳州市临床诊断为AHC的患者眼拭子 5 7份、双份血清 7份。分别用Hep 2和Vero细胞对标本进行病原分离 ;用免疫血清微量中和试验对分离出的毒株进行鉴定 ;用诊断血清鉴定的 4株病毒 ,对 7例患者的双份血清进行中和抗体效价测定。[结果 ]从 5 7份眼拭子标本中分离出 47株 (阳性率 82 5 %) ;经诊断血清微量中和试验鉴定 ,均为柯萨奇病毒A2 4变异株 (CA2 4v) ;7例患者双份血清经微量中和试验测定 ,中和抗体均呈≥ 4倍增长。[结论 ]CA2 4v是引起 2 0 0

杭州市急性出血性结膜炎的柯萨奇病毒分离鉴定及其VP1序列分析

目的:2010年杭州市发生了两起急性出血性结膜炎(Acute Hemorrhagic Conjunctivitis,AHC)疫情,为鉴定引起疫情的致病病原体。方法:采集了9份眼结膜拭子标本,使用实时荧光PCR或RT-PCR法分别检测临床标本中腺病毒、人肠道病毒70型(Human Enterovirus 70,HEV70)和柯萨奇病毒A组24型变种(CoxsackievirusA24 variant,CVA24v)的基因。使用Hep-2细胞和RD细胞分离病毒。对分离到的CVA24v毒株进行全长VP1区扩增和核苷酸序列测定和分析。结果:实时荧光PCR或RT-PCR法检测临床标本,其中有6份检测结果为CVA24v阳性,阳性率为66.7%,而腺病毒和HEV70检测结果均为阴性。使用Hep-2细胞共分离到5株病毒,通过分子定型均鉴定为CVA24v。进化树图显示,两起疫情是由两个病毒传播链引起的。结论:本研究成功地分离到5株CVA24v毒株,为今后杭州市AHC的防治及研究奠定了一定的基础。

绥江县2007年急性出血性结膜炎暴发流行病学调查

目的了解昭通市绥江县急性出血性结膜炎(简称AHC)流行的原因。方法用描述流行病学方法对在AHC流行时的个案调查表进行分析,采集部分AHC病人眼拭子标本,进行病毒分离。结果2007年8—9月共发病2336例。罹患率1464.75/10万,通过直接或间接接触传播发病以农民为主,占发病总数的46.36%;其次是学生,占31.94%。从采集的10份眼拭子标本中分离柯萨奇病毒A24变种5株。结论绥江县AHC流行是由柯萨奇病毒A24变异株引起,今后要加强疫情监测及健康教育力度,尤其是农民、学生AHC卫生知识宣传,防止疫情再次暴发。

中药蒸气治疗“红眼病”60例的观察

目的 解除“红眼病”对人们的生活、工作带来的不便 ,减少传染源。方法 用中药蒸气治疗“红眼病”60例 ,每天治疗 2次 ,上下午各一次 ,每次 15分钟。结果 42例患者治疗 4次后痊愈 ,18例患者治疗 7次后痊愈 ,治愈率 10 0 %。结论 中药蒸气治疗“红眼病”能够有效的控制症状 ,缩短病程 ,解除病人痛苦 。

急性出血性结膜炎诊治要点

1.概述急性出血性结膜炎（acute hemorrhagic conjunctivitis）也称为流行性出血性结膜炎,俗称＂红眼病＂,主要由肠道病毒70型、柯萨奇病毒A24变种引起。患者是该病的主要传染源,其眼部分泌物及泪液均含有病毒。发病后2周内传染性最强。该病主要是通过接触被患者眼部分泌物污染的手、

浙江省2002-2010年急性出血性结膜炎暴发疫情病原体CA24v的全基因组序列分析

目的分析2002--2010年浙江省急性出血性结膜炎（AHC）暴发疫情病原柯萨奇病毒A组24型变种（CA24v）流行株的全基因组序列与遗传特性。方法选取浙江省不同年份的CA24v流行株，采用RT-PCR扩增基因序列，并与国内外流行株进行全基因组及VPl、3C区序列比较分析。结果浙江省2002年和2010年CA24v全序列为7456～7458bp，编码含2214个氨基酸残基的多聚蛋白，2010年的Zhejiang／08／10较2002年的毒株在5’端非编码区的第97、119位各存在一个T碱基插入，Zhejiang／08／10与2002年以来的分离株各区段氨基酸同源性为94．7％～100．0％，与近60年来CA24流行代表株全序列中各区段氨基酸的平均差异率以2A区与3A区最大，分别达8．4％和7．3％，3D区最小，仅为1．9％。1987年与2002年以来的CA24v毒株在全序列上共存在38个和20个氨基酸的稳定变异。2002--2010年CA24v的组间遗传距离分析表明，3C区较VP1区更为稳定，CA24v的早年流行株Jamaica／10628／87在3D区上可能存在重组，而在近年流行株中未发现该现象。结论CA24v以时间序列为主逐年进化，地域间虽存在差异，但影响较小。自2002年起，由CA24v引起的AHc一直在浙江省本地散在流行。

北京市2010-2013年急性出血性结膜炎的病原学分析

目的 确定北京市急性出血性结膜炎的病原学及流行病学特征.方法 2010-2013年7月至10月在北京地区所有区县监测点收集急性结膜炎患者眼拭子标本,通过RT-PCR分别鉴定柯萨奇病毒A24变种（CVA24v）和肠道病毒70（EV70）.分析急性出血性结膜炎的时间分布、患者性别、年龄及临床症状特征,利用系统发育树分析CA24v的VP1区、3Cpro区基因特征.结果 随机抽取的1144件急性结膜炎样本中,4.5％（52/1144）为CVA24v阳性,未检测到EV70.CVA24v相关急性出血性结膜炎在9月达到高峰.各年龄组发病差异有统计学意义,10-19岁年龄组发病率最高.CA24v和非CA24v急性结膜炎的症状构成比无统计学差异.北京市2007-2012年分离的CA24v株VP1、3Cpro的核苷酸序列同源性分别为95.2％-100％和92.8％-100％.结论 2010-2013年CVA24v是引起北京市急性出血性结膜炎的最主要病原体.

2007年北京市急性出血性结膜炎的病原与分子进化分析

2007年北京市发生了急性出血性结膜炎（Acute Hemorrhagic Conjunctivitis,AHC）疫情。为鉴定引起这次疫情的致病病原体,采集北京市门诊就诊的AHC患者眼结膜拭子标本共57份,使用PCR或RT-PCR法分别检测临床标本中腺病毒、人肠道病毒70型（Human Enterovirus 70,HEV70）和柯萨奇病毒A组24型变种（CoxsackievirusA24 variant,CVA24v）的基因,其中有38份检测结果为CVA24v阳性,阳性率为66.7%,而腺病毒和HEV70检测结果均为阴性,说明引起本次AHC流行的病原体是CVA24v。使用HEp-2细胞共分离到9株病毒,通过分子定型均鉴定为CVA24v,对9株CVA24v进行全长VP1区扩增和核苷酸序列测定和分析后,发现除0744/BJ/CHN/2007株之外,其它8株在全长VP1区核苷酸水平和氨基酸水平上差异都很小,同源性分别大于99.6%和100.0%,而0744/BJ/CHN/2007株与其它8株CVA24v的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.8%~97.2%和99.7%。进化树图显示,2007年北京CVA24v分离株与基因群I中的代表株聚为一簇,代表了基因群I中的第四和第五进化分支,说明本次流行至少存在两个传播链。相对于CVA24v的3C区而言,VP1区是进行分子流行病学研究的更为严谨的靶序列,加强对CVA24v的血清流行病学和分子流行病学监测和研究,了解CVA24v的基因特征和分子进化,对预防和控制CVA24v在中国的流行具有重要意义。