银川市2016-2022年手足口病柯萨奇病毒A6型分离株VP1基因特征分析

目的 分析银川市2016-2022年引起手足口病的柯萨奇病毒A6型(CV-A6)VP1的基因特征,为手足口病的防治工作提供有效的参考依据。方法 收集2016-2022年银川市手足口病所有CV-A6核酸呈阳性的标本进行病毒分离培养,应用一步法聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增其VP1区完整基因核酸片段进行核苷酸序列测定,利用测序结果进行系统发育树构建、同源性分析及氨基酸突变位点分析。结果 2016-2022年银川市共分离到手足口病CV-A6型毒株90株,测序后成功获得CV-A6 VP1区全长序列的毒株83株。完整VP1区基因均由915个核苷酸组成,编码305个氨基酸。系统发育分析显示,2016-2022年银川市83株CV-A6分离株均属于D3基因亚型的D3a分支;同源性分析表明,银川市83株CV-A6分离株与原型株Gdula株(AY421764-USA-1949)之间核苷酸相似性为82.1%~84.1%,氨基酸相似性为76.2%~80.5%,遗传距离较远;银川市83株CV-A6分离株与原型株Gdula株的VP1区氨基酸序列比较发现32个氨基酸位点出现变异。结论 2016-2022年银川市手足口病83株CV-A6分离株均属于D3基因亚型的D3a分支。加强对CV-A6的持续监测及基因特征分析,对科学防控CV-A6引起的手足口病及其疫苗研发具有重要意义。

柯萨奇病毒A组6型中国株的分子进化和时空传播分析

柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)是手足口病的主要病原体,可引起非典型手足口病和中枢神经系统疾病,对儿童造成严重的疾病负担,尚无上市的疫苗和抗病毒药物.基于3288条CV-A6中国株VP1序列,利用Nextstrain平台的augur病原体生物信息分析包,构建了CV-A6的时间尺度分子进化树,确定了进化分支和分支突变,分析了分支突变与抗原表位之间的联系.进一步分析了CV-A6中国株各分支在中国七大地理区域的时空分布和优势分支,绘制了主要分支的时空传播路线.结果发现,CV-A6中国株主要分为B、C和D三个进化分支以及D2、D3a和D3b三个子分支,抗原表位处的突变形成了新的进化分支,促进了病毒的流行.华南和华东是CV-A6中国株的主要起源地,华南和华东相互输出、华东输出全国是中国株的主要传播模式.对CV-A6中国株的分子进化和时空传播分析,为CV-A6引起的手足口病等疫情的监测、预警和防控提供了重要支持.

黑龙江地区G6P[5]型牛轮状病毒分离鉴定及遗传进化分析

牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛急性病毒性胃肠炎的主要病原体之一。为调查黑龙江省牛群BRV的基因型及其遗传进化多样性,利用恒河猴胚肾细胞(MA-104)对BRV阳性粪便样本进行病毒分离,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测、间接免疫荧光鉴定和电镜观察方法对分离毒株进行鉴定;进一步通过Illumina二代测序技术获得分离毒株全基因组,对其进行序列分析,并构建VP4、VP7进化树。结果显示,MA-104细胞盲传至第5代出现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),传至第8代稳定出现CPE,分离毒株经RT-PCR检测、间接免疫荧光鉴定为BRV阳性,电镜观察结果显示在细胞培养物中观察到呈典型车轮状的无囊膜病毒粒子,符合BRV形态特征,表明成功分离得到一株BRV,将其命名为BRV HLJ-J7;全基因组测序分析显示基因型为G6-P[5]-I2-R2-C2-M2-A11-N2-T6-E2-H3型;遗传进化分析结果显示,VP4基因与中国分离毒株Y3亲缘关系最近,同源性为98.2%;VP7基因与中国分离毒株LN19-4亲缘关系最近,同源性为98.8%。研究成功分离到一株G6P[5]型BRV,为黑龙江省BRV遗传进化及分子流行病学的研究奠定基础。

一株野鸭源禽副黏病毒6型的基因组特征分析

为了解我国野生水禽中禽副黏病毒6型(APMV-6)的生物学特性,对2020年分离的1株野鸭源APMV-6(Wild duck/Shandong/W683/2020)进行了基因组测序及序列分析。结果显示:该APMV-6分离株基因组为单股负链RNA,基因组长度为16230 nt,基因组结构为3'-N-P-M-F-SH-HN-L-5',3'前导序列和5'尾随序列长度分别为55、54 nt,各基因间隔序列长度不等(2~63 nt);与APMV-1疫苗株La Sota的R值为0.167,抗原性存在较大差异;F蛋白裂解位点为^(104)IREPR↓L^(109),具有典型低致病性APMV分子特征。同源性分析发现,与台湾分离株(MZ802803)同源性最高(96.0%),与其他血清型APMV同源性仅为63.1%~70.2%,与我国雁形目APMV-6分离株(MZ802803)位于同一分支。本研究为进一步了解我国野鸟源APMV-6基因组和生物学特性奠定了基础。

2013-2022年江苏省柯萨奇病毒A6型全基因组序列特征分析

目的 研究江苏省2013-2022年分离到的柯萨奇病毒A6型(CV-A6)全基因组序列特征及对全基因组各编码区进行遗传进化分析,以期从分子流行病学特征的角度解释CV-A6取代肠道病毒A71和柯萨奇病毒A16成为江苏省引起手足口病(HFMD)主要病原的原因。方法 选取2013-2022年间江苏省地区流行的35株CV-A6毒株进行全基因组测序,采用DNASTAR、MEGA7.0和Similarity plots3.5.1等软件对获取的全基因组序列进行比对、相似性分析、系统进化分析和基因重组分析,对P1编码区和3D区主要氨基酸变异位点进行分析。结果 35株CV-A6江苏毒株的全基因组核苷酸和氨基酸序列相似性分别为87.5%~99.6%和97.0%~99.8%,与CV-A6原型株Gdula/USA/1949的全基因组核苷酸序列相似性仅为80.3%~81.0%,氨基酸序列相似性为94.7%~95.3%。基于VP1序列的系统进化树结果显示,2013-2022年江苏省有34株CV-A6分离毒株分属于D3a基因亚型,1株分属于D2基因亚型;基于3D区进化树划分不同重组模式,2013-2022年江苏省流行的CV-A6出现过4个重组进化分支:RF-A、RF-L、RF-K和RF-C型。重组分析结果显示:江苏省流行的CV-A6毒株与CV-A6原型株Gdula/USA/1949在结构蛋白序列上具有较高的相似性。而在非结构蛋白和非编码区则与其他EV-A原型株序列相似性更高。而氨基酸突变位点分析结果显示,与原型株Gdula/USA/1949相比,P1区和3D区多个氨基酸位点变异频繁,可能会使得衣壳蛋白的结构、潜在的受体结合位点产生变化。结论 通过对2013-2022年江苏省CV-A6的全基因组序列分析,有助于了解江苏省CV-A6基因重组及遗传进化关系,解释了近年来CV-A6成为手足口病的主要病原体的可能原因,对CV-A6的防控工作提供了基础资料。

人类疱疹病毒6型和人乳头瘤病毒在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义

目的探讨人类疱疹病毒6型(HHV-6)和人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义。方法选择86例疑似宫颈癌患者,检测其HHV-6与HPV表达情况。以阴道镜病理活检结果为金标准,分析HPV-DNA与HHV-6DNA检测诊断宫颈癌的一致性。比较HPV-DNA与HHV-6 DNA检测对宫颈癌的诊断效能。结果86例疑似宫颈癌患者经阴道镜病理活检确诊71例。κ检验分析结果显示,HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌与阴道镜病理活检结果存在高度一致性(P<0.05)。HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌的灵敏度(91.55%vs.88.73%)、特异度(86.67%vs.80.00%)与准确度(90.70%vs.87.21%)比较均无统计学差异(P>0.05)。结论HHV-6与HPV在宫颈癌患者宫颈组织中多呈现阳性表达,对宫颈癌患者行HHV-6与HPV检测可提高疾病筛查准确率。

山东省滨州市不同年龄女性HPV高危型感染率及E6/E7 mRNA表达情况分析

目的探讨山东省滨州市不同年龄妇女人乳头瘤病毒(HPV)高危型感染率及HPV E6/E7 mRNA表达情况。方法选取2022年1-10月在该院妇产科就诊行HPV-DNA分型检测的女性患者10887例。按年龄分组(<30岁组2180例,30~<40岁组3222例,40~<50岁组3438例,≥50岁组2047例)并统计HPV-DNA分型检测结果。在入选患者中分层随机选取HPV-DNA 16型阳性女性患者250例,各年龄组50例,统计其HPV E6/E7 mRNA检测结果,比较不同年龄组女性患者HPV-DNA分型及HPV E6/E7 mRNA表达的差异。结果10887例女性患者中阳性1666例,感染率为15.3%,其中高危型阳性1393例,占83.6%(1393/1666),低危型感染273例,占16.4%(273/1666)。HPV高危型阳性分布排前5位者依次为HPV 16、52、58、33、18型。不同年龄组女性患者感染率不同,HPV感染年龄分布曲线呈“V”形。不同年龄HPV-DNA 16型阳性女性患者HPV E6/E7 mRNA阳性率不同,40~<50岁组、≥50岁组女性患者HPV E6/E7 mRNA阳性率均高于30~<40岁组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV-58型E6/E7 mRNA阳性率、拷贝值均高于HPV 16、18、52型,差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV高危型混合感染与单一感染E6/E7 mRNA表达存在差异。结论通过开展HPV-DNA筛查工作及研究了解本地区HPV亚型的分布具有非常重要的价值。年轻妇女和围绝经期及以上妇女HPV感染风险较高。随年龄增加HPV 16型感染人群中HPV E6/E7 mRN阳性率逐渐升高,即发生宫颈病变的风险增加。不同HPV高危型感染E6/E7 mRNA阳性率、拷贝值均存在差异,且HPV高危型混合感染者E6/E7 mRNA阳性率、拷贝值均高于单一感染者。

滤泡辅助性T细胞在柯萨奇病毒A6型手足口病患儿外周血中的表达及作用

目的探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh)在柯萨奇病毒A6型手足口病(HFMD)患儿外周血中的表达水平及作用。方法采集2022年6月至2023年8月杭州市儿童医院收治的A6型HFMD患儿33例作为HFMD组,选择同期体检健康儿童26例作为健康人对照组,利用流式细胞术检测HFMD患儿和体检健康儿童外周血中的Tfh频数,分析并比较二者之间的关系。结果HFMD组和健康人对照组CXCR5^(+)CD4^(+)细胞占CD4^(+)T淋巴细胞的频数分别为3.95(2.31,6.21)%和1.44(0,94,2.43)%,两组之间差异有统计学意义(P<0.001)。HFMD组中ICOS^(+)CXCR5^(+)CD4^(+)和PD-1^(+)CXCR5^(+)CD4^(+)Tfh细胞频数分别为1.44(0.81,2.86)%和1.64(0.65,4.05)%,而在健康人对照组分别为0.84(0.27,1.46)%和0.47(0.13,1.12)%,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);且两者均与CXCR5^(+)CD4^(+)细胞水平呈显著正相关(P均<0.05)。结论Tfh细胞在柯萨奇病毒A6型肠道病毒感染引起的HFMD患儿免疫反应中具有重要的作用。

鸡源性禽流感病毒H6N2在人源肺组织细胞中的复制

目的:评估鸡源性H6N2亚型禽流感病毒在MDCK、A549和离体人肺中的复制效率,探讨该病毒跨种间屏障感染人的潜能。方法:选取2株鸡源性H6N2禽流感病毒A/CK/HZ/260/2017、A/CK/DG/651/2019,基因测序并分析该2株病毒全基因组的核苷酸同源性及遗传进化,固相直接结合法分析分析病毒的受体结合特异性,应用MDCK、A549和人肺组织评估病毒的复制。结果:鸡源性H6N2病毒基因来源于欧亚谱系,HA、NA均属于GD-SZBJ-like分支,内部基因主要由两个H6N2病毒进化分支的重配进化而来,包括GD-SZBJ-like分支和G1291-like分支,属低致病性禽流感病毒,仅结合禽型受体SAα-2,3Gal,HA的受体结合域未发现向有利于结合人型受体突变。病毒均可在MDCK和A549细胞中复制,离体人肺组织病毒分离培养阳性,免疫组化检测病毒抗原显示,A/CK/HZ/260/2017病毒株在人肺组织和部分细支气管出现流感病毒核蛋白阳性,A/CK/DG/651/2019病毒株在在人肺组织出现流感病毒核蛋白阳性。结论:鸡源性H6N2亚型禽流感病毒仍属低致病性禽流感病毒,仅识别与结合禽型受体,但病毒可不经适应直接在哺乳动物和人下呼吸道进行有效复制,提示鸡源性H6N2禽流感病毒具有跨种属感染人的潜能。

猪细小病毒6型ORF 2基因的截短表达及多克隆抗体制备

【目的】原核截短表达猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6,PPV6)ORF 2基因,并制备PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白多克隆抗体,为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板,PCR扩增获得ORF 2截短基因片段,将其克隆至原核表达载体pET30a(+)中构建重组质粒pET30a-PPV6-ORF2。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化后重组蛋白。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,采用Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和间接ELISA鉴定免疫兔血清特异性。【结果】成功构建了pET30a-PPV6-ORF2重组表达载体,原核截短表达了PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白;SDS-PAGE结果显示,重组PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白大小约为40 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,该蛋白可与PPV6阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性;Western blotting间接与ELISA结果显示,纯化后免疫兔血清与PPV6全病毒蛋白发生特异性反应,抗体效价为1∶25600;IFA鉴定结果表明,PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白兔源多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究成功原核截短表达了PPV6 ORF 2基因并制备了兔抗PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白多克隆抗体,为PPV6血清学检测方法的建立和PPV6 VP1蛋白的进一步研究提供了参考。

高危型HPV阳性患者血清中HDAC6和Hsp90联合检测在宫颈癌前病变诊断中的临床意义

目的探究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)阳性患者血清中组蛋白脱乙酰酶6(HDAC6)和热休克蛋白90(Hsp90)联合检测在宫颈癌前病变诊断中的临床意义。方法纳入2020年6月至2021年6月在山东第一医科大学附属济南妇幼保健院接受治疗的166例HR-HPV阳性患者作为研究对象,根据阴道镜检查和活检结果将研究对象分为实验组[高级别鳞状上皮内病变(HSIL)56例、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)30例]、对照组(子宫颈良性病变患者80例)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测患者血清HDAC6、Hsp90水平;采用Logistic多因素回归分析HR-HPV患者发生宫颈癌前病变的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清HDAC6、Hsp90对HR-HPV患者发生宫颈癌前病变的诊断价值。结果相较于对照组,实验组吸烟、有盆腔炎病史及性传播疾病感染史患者占比和白细胞、中性粒细胞、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、HDAC6、Hsp90水平显著升高(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示,性传播疾病感染史及IL-6、IL-1β、TNF-α、CRP、HDAC6、Hsp90水平均是HR-HPV阳性患者发生宫颈癌前病变的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清HDAC6、Hsp90水平及二者联合预测HR-HPV阳性患者发生宫颈癌前病变的曲线下面积(AUC)分别为0.759、0.774、0.870,其中联合预测的AUC显著高于二者单独预测的AUC(Z=2.361、2.042,P<0.05)。HSIL患者IL-6、IL-1β、TNF-α、CRP、HDAC6、Hsp90水平显著高于LSIL患者(P<0.05)。结论血清HDAC6、Hsp90在HR-HPV阳性发生宫颈癌前病变患者中水平升高,均是HR-HPV阳性患者发生宫颈癌前病变的独立危险因素,有望成为HR-HPV阳性患者发生宫颈癌前病变的诊断因子。

2013～2014年杭州地区手足口病柯萨奇病毒A6型和A10型VP1基因特征分析

目的了解2013-2014年杭州地区手足口病病原谱的分布,并对其病原基因特征进行分析。方法采集2013年3月至2014年4月手足口病患儿标本1 340例,提取病毒核酸,通过逆转录和PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对柯萨奇病毒A6型（CA-A6）和A10型（CA-A10）VP1全长序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树。结果1 340例手足口病患儿标本中,肠道病毒检出阳性率为81.43%（1 090/1 340）。其中,CV-A6阳性率为41.04%,取代EV-71（14.48%）成为杭州地区检出阳性率最高的肠道病毒;CV-A10检出率（8.51%）也高于CV-A16（3.81%）,列于第三位。同源性比对及系统进化分析显示,2013-2014年的25株CV-A6病毒核苷酸同源性为89.0%-99.7%,主要分布于G、H基因亚型;15株CV-A10病毒核苷酸同源性为95.3%-99.9%,分布于F、G基因亚型。结论 2013-2014年杭州地区儿童手足口病的主要病原体发生重大变化,CV-A6病毒成为最主要病原,CV-A10病毒也存在潜在威胁,需加强对其他肠道病毒的持续监测和分子特征分析。

柯萨奇病毒A6型VP1蛋白的生物信息学分析

目的：预测柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CVA6）的衣壳蛋白VP1的基本理化性质、结构功能及线性B细胞表位。方法：应用Bioedit软件、Sub Loc、Target P和生物信息学资源门户Ex PASy中的多种在线工具对CVA6 VP1的氨基酸序列进行分析。结果：CVA6 VP1为一亲水性蛋白,其相对分子量为33.6 k D,等电点为7.92,含有24个可能的磷酸化位点,没有信号肽、跨膜区和可能的脂酰化位点;其二级结构中以无规则卷曲居多,有48.52%的氨基酸残基暴露于溶液界面;该分子内存在多个潜在的线性B细胞表位,其中的155～165位氨基酸残基区域的抗原指数最高。结论：成功预测到CVA6 VP1的基本理化性质、结构功能特征及可能的线性B细胞表位,为该蛋白的进一步研究及疫苗和免疫诊断试剂的研制打下基础。

湖北2013年部分柯萨奇A16型肠道病毒VP1基因分子特征分析

目的全面研究和了解2013年湖北省柯萨奇A16型的VP1基因特征,分析CVA16型病毒在我省的基因型别及分子进化分析。方法对2013年湖北省21株CVA16病毒流行株进行VP1区全长基因序列测定,并对核苷酸及氨基酸序列进行同源性比较及系统进化分析。结果2013年湖北省21株CVA16型病毒流行株的VP1区核苷酸序列全长均为891bp,VP1区核苷酸和蛋白氨基酸序列同源性分别为90.0%～100.0%和96.3%～100.0%。VP1区基因系统进化分析表明,湖北CVA16流行株主要位于ligeage1和3分支上,分属于B1a和B1b基因亚型。结论 2013年湖北省21株CVA16型流行株主要为B1b基因亚型,其次为B1a基因亚型,在同一地区有两种基因亚型的CVA 16病毒同时存在,在不同的地区存在同一种亚型的CVA16病毒。

2011-2016年上海地区手足口病病原谱及柯萨奇病毒A组6型不同基因型感染细胞的差异研究

本文旨在分析2011—2016年上海地区手足口病病原谱的构成和主要病原体流行规律,为手足口病的疫情防控和重症预警提供参考。采集2011—2016年哨点医院临床诊断为手足口病的患儿标本,首先进行肠道病毒通用型核酸和分型检测,其次对2012—2016年核酸检测为柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CA6)阳性样本进行基因型重组检测,分离重组型和非重组型CA6株,比较两者生物学特性。结果显示,2011—2012年秋季上海地区手足口病主要致病原为肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)和CA16;2012年秋季起CA6成为主要病原体;2013—2014年重组型CA6(recombinant CA6,R CA6)占一定比例;2015—2016年非重组型CA6(non-recombinant CA6,NR CA6)成为优势流行株。R CA6和NR CA6代表株在RD细胞中增殖良好,在KB、MRC-5和HEp-2细胞中未见明显增殖。比较R CA6与NR CA6代表株接种于RD细胞后细胞活性下降的动态变化,未见显著差异。本研究证实,CA6为近年来上海地区手足口病的主要病原体,R CA6和NR CA6的构成比逐年变化,提示持续监测手足口病主要病原体并了解其生物学特性,对上海地区手足口病的防控预警及疫苗研发具有重要意义。

柯萨奇病毒A组6型与肠道病毒71型感染所致的手足口病临床特点比较

目的探讨柯萨奇病毒A组6型（CA6）和肠道病毒71型（EV71）感染所致手足口病（HFMD）的临床特点。方法回顾性分析2013年9月至2014年8月在重庆医科大学附属儿童医院住院的HFMD患儿的临床资料,纳入病原学确诊为EV71和CA6感染的病例,分为EV71组和CA6组,分析两组的临床特点、流行特征和预后。结果共确诊HFMD住院患儿887例,其中EV71组438例（49.4%）,CA6组43例（4.8%）。1EV71组和CA6组平均年龄分别为（17.6±8.7）和（27.2±18.2）月龄,差异有统计学意义（P〈0.001）。2两组流行时间不同,CA6组以1~3月所占比例最大,EV71组主要集中于4~7月。3发热、神经系统受累症状（呕吐、惊跳及肢体抖动）在CA6组发生率明显低于EV71组（P均〈0.05）,且意识障碍仅见于EV71组。4CA6和EV71组主要表现为手足疱疹、口腔疱疹和臀部皮疹,CA6组还更表现为躯干、四肢和口周皮疹。CA6组疱疹比例（23/43,53.5%）明显高于EV71组（49/438,11.2%）（P〈0.001）。5CA6组均痊愈,并完成随访;EV71组428例（97.7%）痊愈,1例（0.2%）死亡,347/437例（79.4%）完成随访。CA6组后期脱甲和脱屑的发生率均较EV71组明显增高（P均〈0.001）。CA6组均无后遗症;EV71组肢体瘫痪8/437例（1.8%）,癫1/437例（0.2%）。结论EV71和CA6感染所致的HFMD好发于不同季节,与EV71感染相比,CA6感染患儿年龄偏小,皮疹广泛,形态多样,脱甲及脱屑发生率高,神经系统受累较轻,预后较好。

柯萨奇病毒B3诱导的病毒性心肌炎C57BL/6J小鼠模型的建立

目的：建立由柯萨奇病毒B3（CVB3）Nancy株诱导的病毒性心肌炎（VMC）C57BL/6J小鼠模型。方法：4周龄、6周龄C57BL/6J小鼠各50只,每个年龄组随机选取15只作为对照（腹腔注射PBS）,剩余35只腹腔接种含CVB3 Nancy株的病毒悬液（1×10^5PFU/只）,于感染后第14天取心脏,行HE染色和CD3、CD45免疫组化染色,进行病理学评价,检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,并做心肌组织中病毒滴度检测,采用Western blot法检测磷酸化AKT、Ik Bα、GSK3β的表达。结果：4周龄小鼠造模过程中有19只（54.3%）死亡;与对照小鼠比较,模型小鼠心肌呈现弥漫性炎性细胞浸润和片状心肌细胞变性坏死,CD3、CD45阳性细胞弥漫浸润于心肌间质,血清IL-1β、TNF-α水平明显升高（P〈0.05）,心肌组织中磷酸化AKT、Ik Bα、GSK3β表达增高（P〈0.05）。6周龄小鼠造模过程中有3只（8.6%）死亡,模型小鼠心肌组织中炎症反应轻于4周龄模型小鼠（P〈0.05）。结论：成功建立了VMC的C57BL/6J小鼠模型,4周龄C57BL/6J小鼠更适用于模型的建立。

福州地区2012年柯萨奇A6型肠道病毒分子特征分析

目的对2012年福州地区分离的其他肠道病毒CVA6进行分子鉴定，并对其VP1部分序列进化分析。方法肛拭子标本采用RD细胞进行病毒分离，通过RT—PCR对分离株的VP1部分序列进行扩增、克隆和测序；经过Blast程序比对来确定病毒的基因型；通过Mega4．0软件对不同病毒株VP1部分序列的差异进行比较。结果从10份其他肠道病毒患者的肛拭子标本中分离到6株CVA6病毒。测序结果显示，该6株CVA6病毒核苷酸序列具有高度一致性，但与福州周边国家或地区CVA6的核苷酸一致性为91．8％～97．3％。结论2012年福州市HFMD的病源除Ev71和CVA16外，还包含CVA6病毒。序列分析表明，因此，应加强对手足口病例中其他肠道病原体的检测，并掌握其流行以及病毒遗传进化特征，为HFMD的防控提供科学依据。

柯萨奇A6型病毒致重症手足口病危险因素分析

目的探讨柯萨奇A6型病毒(CVA6)感染所致重症手足口病的危险因素。方法采用1∶1匹配的病例对照研究方法,收集深圳市宝安人民医院2015年5月-2016年11月实验室确诊的CVA6感染所致重症和轻症手足口病例各101例,采用向后逐步回归的多因素logistic回归方法筛选影响因素。结果出现丘疹、患儿经常咬玩具、照看人文化程度高中以下和发热最高体温≥39℃为CVA6感染所致重症的危险因素,母乳喂养和发病诊断时间间隔较短为保护因素。结论及早诊断和母乳喂养可降低CVA6所致重症手足口病风险,丘疹和高热可作为手足口病重症早期识别指征。

2型糖尿病与柯萨奇B组病毒感染及IL-6、TNF-α的相关性

目的探讨2型糖尿病(T2DM)与柯萨奇B组病毒感染关系,分析T2DM并柯萨奇B(CoxB)组病毒感染患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平意义。方法随机收集40例T2DM及38例健康对照组,检测CoxBIgM、CoxB中和抗体,测定IL-6、TNF-α、空腹胰岛素(FINS)、血糖(BG),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),比较上述指标在糖尿病患者与正常人群之间、T2DM并柯萨奇B组病毒感染与无柯萨奇B组病毒感染的T2DM的差异,分析TNF-α、IL-6与胰岛素抵抗的关系。结果T2DM患者中CoxBIgM、CoxB中和抗体明显高于对照组;T2DM并CoxB感染患者BG、HOMA-IR、TNF-α、IL-6明显高于无CoxB感染的T2DM。结论CoxB感染在T2DM的发生发展有一定作用,可能与TNF-α、IL-6作用相关。