益心康对感染柯萨奇病毒B3的大鼠体外心肌细胞CVB_3 mRNA复制及相关细胞因子的影响

[目的]通过检测益心康药液作用于感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后的乳鼠心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β(TGF-β)表达情况,进一步探讨益心康对病毒性心肌炎的病毒复制及相关细胞因子的作用机制。[方法]使益心康的药液作用于乳鼠心肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的TNF-α及TGF-β的表达水平。[结果]益心康在CVB3感染的病毒性心肌炎的发病及发展过程中有抑制CVB3复制的作用,同时可以减少相关细胞因子TNF-α、TGF-β的分泌。益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)的细胞中的CVB3 mRNA、TNF-α、TGF-β表达水平明显低于病毒感染组(P<0.01),同时低于利巴韦林组(P<0.05),均有统计学意义;D组、E组之间P>0.05,无统计意义。[结论]益心康对柯萨奇病毒感染心肌细胞具有显著保护作用。

mRNA疫苗制备技术在甲型流感病毒疫苗研究中的应用

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、H1N1和H3N2亚型人流感病毒(Influenza virus,IV)均属于甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)。IAV含有多种亚型,毒株变异快,因此IAV疫苗株需要根据当年的优势毒株进行相应的调整,这给疫苗的研制和生产带来巨大挑战。信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)疫苗制备工艺简单、生产时间短且容易规模化生产,在疾病预防方面具有广阔的应用前景。笔者对mRNA疫苗的种类、优化策略和IAV mRNA疫苗的研究现状进行了综述,旨在为IAV mRNA疫苗的研发提供理论参考。

苦瓜素对柯萨奇B_3病毒RNA复制抑制作用的研究

为观察苦瓜素对柯萨奇B3(CVB3)病毒RNA复制的抑制作用 ,采用差示逆转录聚合酶链反应技术 ,定量观察苦瓜素在体内外对RNA复制的影响。结果显示在体外、体内实验中苦瓜素组CVB3 RNA水平明显低于生理盐水对照组 ,P <0 0 0 1。提示苦瓜素具有明显抑制CVB3 RNA复制的作用 。

心肌康抑制小鼠柯萨奇B_3病毒性心肌炎慢性期病毒复制的研究

目的:探讨心肌康治疗小鼠柯萨奇B3 ( CVB3 )病毒性心肌炎( VMC)慢性期的疗效。方法:动物分为VMC组、心肌康组,采用逆转录聚合酶链反应( RT- PCR)技术,定量观察心肌康在体内对RNA复制的影响。结果:心肌康组CVB3 - RNA水平明显低于正常对照组( P<0 .0 1 )。结论:心肌康具有明显抑制CVB3 - RNA复制的作用。

人源抗菌肽LL-37对柯萨奇B3病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠病毒复制及炎症反应的影响

目的探讨人源抗菌肽LL-37对病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠病毒复制和炎症反应的影响及其可能的分子机制。方法将48只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组(Blank)、模型组(VMC)、LL-37低剂量组(LL-37-L)和LL-37高剂量组(LL-37-H),每组12只。除Blank组外,其他组均采用腹腔注射柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)病毒液构建VMC模型小鼠。于抗菌肽LL-37干预第7天后将小鼠处死并取材。采用苏木素伊红染色观察心肌组织病理学变化;全自动生化仪检测血清心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度;50%终点法测定心肌组织CVB3病毒滴度;实时定量聚合酶链反应法检测心肌组织中CVB3 RNA表达水平;酶联免疫吸附试验法检测心肌组织炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度;Western blot法检测心肌组织TLR-4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果与Blank组比较,VMC组小鼠心肌组织出现明显炎性损伤,且心肌病理积分显著增加[(3.18±0.33)分vs(0.00±0.00)分,P<0.05];血清中心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白浓度显著上升;心肌组织中CVB3病毒滴度,CVB3 RNA及IL-1β、IL-6和TNF-α浓度,以及心肌组织中TLR-4、MyD88和p-NF-κB p65等蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与VMC组比较,LL-37-H组小鼠心肌病理积分显著降低[(1.56±0.27)分vs(3.18±0.33)分,P<0.05],并且以上各检测指标均明显降低(P<0.05),而LL-37-L组小鼠以上各指标均无显著性变化(P>0.05)。结论人源抗菌肽LL-37可抑制VMC小鼠心肌组织中CVB3病毒复制和炎症反应,改善心肌损伤,其机制可能与TLR-4/NF-κB通路的抑制有关。

青蒿素抗柯萨奇B组病毒感染的实验观察

目的探讨青蒿素体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)的作用。方法以CVB3感染HeLa细胞为实验模型,采用微量细胞病变抑制法、半定量RT鄄PCR实验和间接免疫荧光实验的方法,观察分析青蒿素对CVB3的直接灭活、阻断吸附和抑制复制的作用,以及青蒿素对CVB3在感染细胞内核酸复制和蛋白表达的影响。结果青蒿素不同程度地阻断病毒吸附和抑制病毒复制,明显抑制CVB3核酸复制与蛋白表达,未发现有直接灭活病毒的作用。结论青蒿素类药物具有体外抗CVB3的作用,其抗病毒机制是通过阻断病毒吸附和抑制病毒复制来完成的。

病毒性心肌炎病程中肿瘤坏死因子α和Fas mRNA表达的变化

目的 观察病毒性心肌炎(VMC)的小鼠模型中肿瘤坏死因子(TNF) -α和Fas mRNA在心肌中表达的动态变化,探讨它们在VMC中的可能作用及其机制。方法 腹腔接种柯萨奇病毒B组3 型(CVB3 )建立VMC小鼠模型。在接种病毒后第7、14 和28 天,采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)检测小鼠心肌中TNF -α和Fas mRNA表达水平,并观察心肌形态学改变的差别。结果 与正常对照组相比,VMC小鼠TNF -α和FasmRNA表达明显增加。TNF- αmRNA表达高峰在接种后第7天,14 d后仍有大量表达,28 d后表达明显减少;Fas mRNA在接种第7天后明显增加, 14 d 后达到高峰, 28 d 后仍有一定量表达。结论 VMC小鼠心肌中TNF -α和Fas mRNA表达明显增加。TNF- α参与炎症反应和心肌损伤,Fas是引起心肌细胞坏死的重要蛋白。

柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌硫氧还蛋白的表达

目的研究硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)在柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌炎模型中表达的变化,探讨Trx在病毒性心肌损伤中的作用。方法建立柯萨奇B3病毒感染鼠心肌炎模型,采用光镜检测心肌形态改变,应用RT鄄PCR技术比较接种病毒后不同时间点(7,14,21d)TrxmRNA表达变化。结果7d时心肌病损严重;14d时部分心肌病损开始修复;21d时心肌修复较完全。接种病毒后21d时,硫氧还蛋白mRNA表达与对照组比较明显上调(P<0.01),7d和14d时同对照组相比表达无显著性差异(P>0.05)。结论在急性柯萨奇B3病毒性心肌炎中,Trx可能被急性炎症刺激素特异地诱导,在疾病的后期TrxmRNA表达上调,促进心肌修复,提示适当剂量的Trx可能对急性柯萨奇B3病毒性心肌炎有潜在治疗作用。

RNA干扰对甲型肝炎病毒的复制抑制作用

目前病毒性肝炎在我国流行相当广泛,据卫生部资料获悉,6种型别的病毒性肝炎中,甲、戊型肝炎每年发病数占全国病毒性肝炎报告发病数的50%;乙型肝炎病毒携带率为9.75%,其中约1.2万人长期携带乙型肝炎病毒。每年死于乙型肝炎相关的肝病人数约28万例。病毒性肝炎至今发病率居全国传染病之首,严重危害人民健康。本专辑选译自《最新医学》2004年第59卷第9期“ウイルスと肝炎”专辑,详细阐述病毒性肝炎的研究状况及最新进展,内容翔实、有较高的参考价值,本专辑由哈尔滨医科大学姚桢教授主译。

CA6型手足口病脑炎患儿血清IL-6、HLA-DR mRNA联合检测的临床意义

目的:探讨血清IL-6、HLA-DR mRNA联合检测在CA6型手足口病脑炎中的临床意义。方法:采用随机抽样的方法选取2018年4月至2018年8月在山东省聊城市人民医院感染科住院治疗的CA6型手足口病脑炎患儿30例,为手足口病脑炎组。纳入同期门诊的CA6型无并发症的手足口病患儿30例,为手足口病组。入组患儿于入院当天或就诊当天抽取静脉血5 ml,手足口病脑炎组入组患儿入院后1或2 d行腰椎穿刺术,收集脑脊液2 ml。应用ELISA法分别检测IL-6在手足口病脑炎组、手足口病组患儿血清中的水平。应用ELISA法检测IL-6在手足口病脑炎组患儿脑脊液中的水平。应用RT-PCR检测各组血清HLA-DR mRNA的水平。结果:手足口病脑炎组与手足口病组患儿血清IL-6、HLA-DR mRNA比较差异均有统计学意义(t分别为9.925、-10.735,均P<0.05)。手足口病脑炎组血清IL-6与脑脊液IL-6,手足口病脑炎组血清IL-6与手足口病脑炎组脑脊液白细胞计数均呈正相关(r分别为0.867、0.770,均P<0.05)。手足口病脑炎组血清HLA-DR mRNA与脑脊液白细胞计数呈负相关(r=-0.700,P<0.05)。利用血清IL-6及HLA-DR mRNA诊断CA6型手足口病脑炎时ROC曲线下面积分别为0.896(95%可信区间为0.794~0.999)、0.980(95%可信区间为0.954~1.006)。结论:血清IL-6在CA6型手足口病脑炎组明显高于手足口病组,HLA-DR mRNA明显低于手足口病组,差异均有统计学意义。CA6型手足口病脑炎患儿血清IL-6与脑脊液 IL-6、WBC均呈正相关,血清HLA-DR mRNA与脑脊液WBC呈负相关。利用血清IL-6、血清HLA-DR mRNA诊断CA6手足口病脑炎时ROC曲线下面积均>0.5。说明应用血清IL-6、HLA-DR mRNA联合检测在CA6型手足口病脑炎的早期诊断具有临床意义,便于临床早治疗以减少不良后果的发生。

冬虫夏草醇提取液对实验性急性病毒性心肌炎的影响

目的:探讨冬虫夏草醇提取物对急性病毒性心肌炎的干预作用。方法:采用柯萨奇B组3型病毒复制病毒性心肌炎小鼠模型,免疫组化染色观察心肌iNOS表达,同时观察光镜下心肌组织学变化。结果:与模型组比较,虫草醇提取物干预组心肌炎症坏死半定量分析显著减轻,心肌iNOS面密度值均显著升高。结论:虫草醇提取物对急性病毒性心肌炎有明显保护作用,其保护机制与诱导心肌iNOS表达,增加NO产生等有关。

靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J复制的研究

试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因，根据它们的保守序列，分别设计合成了4～5对SiRNA，并将其克隆至pSilencer4．1，构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6h后以103TCID50接种ALV—J，利用Real—timeRT—PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。

口蹄疫病毒感染机理的研究进展

介绍了口蹄疫病毒感染过程中的吸附、穿透和脱壳步骤。综述了病毒mRNA的翻译机理以及病毒转录和基因复制的机理。简要描述了病毒粒子的成熟过程,包括病毒RNA正链的装配以及VP0裂解成VP4和VP2的过程。

替代的异源5’非翻译区可以保持2型猪繁殖与呼吸综合征病毒的全部活动功能

基因组5＇非翻译区（untranslated region，UTR）被认为在猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录和蛋白翻译过程中发挥关键作用，然而其主要的作用机制仍不为人知。本试验确定了病毒复制和感染的顺式作用元件，

细胞自噬促进柯萨奇病毒B3复制的研究

本研究探索柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)感染引起的自噬与病毒复制之间的关系。CVB3感染HeLa细胞,并在病毒感染后6 h、8 h和10 h时检测LC3-Ⅰ蛋白、LC3-Ⅱ蛋白和p62蛋白的表达水平。结果显示CVB3病毒感染促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,同时降低p62蛋白的表达。分别将自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamy-cin)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3MA)或溶酶体抑制剂阿洛司他丁(Aloxistatin,E46D)预处理HeLa细胞2 h,CVB3感染药物处理细胞并在病毒感染6 h后收集细胞、检测CVB3病毒VP1蛋白的表达。结果显示雷帕霉素和E64D促使CVB3病毒VP1蛋白表达增加,而3MA降低CVB3病毒VP1蛋白的表达。本研究得出结论 CVB3病毒感染诱导自噬进而促进病毒复制。