柯萨奇B3m病毒致小鼠急性心肌损伤的双向凝胶电泳分析

目的建立双向凝胶电泳体系分析柯萨奇B3m病毒(CVB3m)致小鼠急性心肌损伤过程中的蛋白质组差异,探讨CVB3m致心肌损伤的机制。方法分别提取感染CVB3m第0,4,8及21天的BALB/C鼠心肌组织总蛋白,采取固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,用Image Master软件进行图像分析。结果心肌组织总蛋白平均抽提浓度为13.9 g/L;获得正常小鼠和急性CVB3m感染鼠不同感染时期(第4,8和21天)心肌组织双向电泳凝胶图谱,图像分析4块胶平均蛋白点数为(792±32)个,匹配率为61.25%±6.25%。随机选定不同感染时期的8个差异表达的蛋白质点,得到了表观相对分子质量和表观等电点等一系列数据。结论获得了CVB3m致小鼠急性心肌损伤的双向凝胶电泳图谱,建立了该模型的蛋白质双向凝胶电泳数据库,有利于该病毒引起小鼠心肌损伤机制的进一步研究。

柯萨奇B3m病毒致T-2毒素染毒鼠心肌损伤的病理观察

目的 观察 T- 2毒素染毒小鼠感染柯萨奇 B3m病毒 (CVB3m)后心肌损伤的特点。方法 BAL B/C小鼠随机分成 4组 ,病毒组腹腔接种病毒液 ;毒素 +病毒组接种病毒前 T- 2毒素隔日灌胃 ,3周后腹腔接种与病毒组同等剂量的病毒液 ;毒素组单纯 T- 2毒素隔日灌胃 ;对照组生理盐水灌胃 ,腹腔接种 16 4 0营养液。观察各组小鼠心肌光镜、普通电镜、酶学电镜改变及心肌病毒核酸持续感染情况。结果 毒素 +病毒组心肌损伤明显重于病毒组和毒素组 ,病灶纤维化明显 ,可见结缔组织增生、瘢痕形成。线粒体空泡变明显 ,酶活性产物严重脱失。结论 T- 2毒素染毒小鼠感染 CVB3m后 ,心肌病变加重 。

低硒、柯萨奇B3m病毒感染与冰泳对BALB/c小鼠全血GSH-Px影响的析因分析

目的:运用2×2×2析因设计研究硒、柯萨奇B3m病毒(CVB3m)与冰泳三种因素对BALB/c小鼠全血谷胱甘肽转移酶(GSH-Px)的影响,探讨3种因素之间是否存在交互作用。方法:将BALB/c小鼠按照三因素两水平[硒(低硒、常硒);CVB3m(感染、未感染);冰泳(给予、未给予)]随机分成8组,每组各10只,用国产低硒食用酵母合成低硒饲料喂养断奶后BALB/c雄性小鼠,5周后腹腔接种CVB3m103TCD500.1ml,建立低硒心肌损伤模型,7天后处死,处死前给予冰泳处理,测定全血GSH-Px活性。结果:低硒组全血GSH-Px活性低于常硒组(F=67.81,P<0.001);感染CVB3m组小鼠全血GSH-Px活性低于未感染组(F=25.04,P<0.001);二者存在交互作用(F=4.51,P=0.0371)。结论:硒与CVB3m存在交互作用,低硒病毒感染组GSH-Px活性低于其他组。

黄芩、柴胡及其配伍提取物体外抗柯萨奇B3m病毒及对细胞活性的影响

目的:观察黄芩、柴胡及其配伍提取物体外抗柯萨奇B3m病毒(CVB3m)及对细胞活性的影响。方法:采用微量细胞培养法,以细胞病变法和MTT法判定细胞活性,观察黄芩、柴胡及其配伍提取物以及黄芩两种不同提取制剂体外抗CVB3m病毒和对细胞活性的影响,确定各组药物的抑制病毒指数和药物对细胞的预防和治疗保护率。结果:黄芩提取物浓度为1.563mg·mL-1时,抑制病毒指数大于2,而柴胡组和配伍组的抑病毒指数均小于2;3组药物都具有不同程度的预防保护作用,而柴胡组和配伍组的预防保护作用尤为明显,其预防保护率明显高于黄芩组,有显著性差异(P<0.05);在病毒感染后,3组药物对细胞均具有不同程度的治疗保护作用,黄芩组和配伍组表现明显高于柴胡组,差异具有显著性(P<0.05)。结论:黄芩提取物具有明显的直接灭活病毒作用;3组药物都具有不同程度的预防保护作用和治疗保护作用,柴胡组和配伍组预防给药保护细胞作用明显;黄芩提取物和配伍提取物组的治疗保护作用明显;配伍组具有预防和治疗保护双重作用,但没有表现出配伍后作用增强的优势。

益心康对柯萨奇B_(3m)病毒性心肌炎小鼠作用的实验研究

目的 :实验观察中药复方益心康 ,对实验性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞保护作用和对心肌细胞内病毒复制的抑制作用。方法 :诱导Balb/c小鼠形成病毒性心肌炎模型 ,分别予益心康、病毒唑稀释液、生理盐水灌胃。测每个小鼠血清磷酸肌酸激酶 (CK)及其同功酶MB(CK -MB) ,测心肌细胞感染CVB3mRNA量。结果 :中药治疗组小鼠的血清CK和CK -MB明显低于其它两个治疗组。中药治疗组小鼠的心肌细胞含有的病毒RNA量明显少于其它两个治疗组。结论 :益心康对柯萨奇B3m病毒性心肌炎小鼠有保护作用 ,并抑制柯萨奇病毒B3m在心肌细胞中的复制。

柯萨奇B_(3m)病毒感染新生乳鼠致急性病毒性心肌炎模型的研究

目的 探讨制备柯萨奇B3m病毒感染Balb/C新生乳鼠急性病毒性心肌炎模型的实验途径。方法 对柯萨奇B3m亲心肌株病毒进行增毒 ,滴定TCID5 0后感染Balb/C新生乳鼠。CVB3m病毒感染组 3窝共 2 1只 ,对照组 3窝共 2 0只。感染组每只乳鼠腹腔内接种 10 0 0TCID5 0CVB3m病毒液 0 0 4ml,对照组每只乳鼠腹腔内接种 16 40维持液 0 0 4ml。观察感染乳鼠的发病及心肌病理变化。结果 感染组乳鼠在感染CVB3m后 48～ 72h发病 ,心肌病理变化以多形核细胞、单核细胞和巨噬细胞浸润为主要特征 ,心肌小血管壁内皮细胞受损 ,心肌细胞变性、肿胀 ;对照组乳鼠未见发病。结论 柯萨奇B3m病毒是急性心肌炎的重要病原体 ,其毒力及接种量与发病密切相关 。

柯萨奇B_(3m)病毒致低硒鼠心肌病变检出率与病毒中和抗体效价的关系

5周龄BALB/C雄性鼠经低硒、常硒合成饲料喂养5周后,腹腔注射CoxsackieB_(3m)病毒(CVB_(3m))1000TCD_(50)0.1ml,对照组注射1640营养液0.1ml,7天后处死,取心脏常规切片,HE染色光镜下检查心肌病变。取血清测定CVB_(3m)病毒中和抗体效价。结果表明:低硒鼠感染CVB_(3m)病毒组(Ⅰ组)及常硒鼠感染CVB_(3m)病毒组(Ⅱ组)对照组(Ⅲ组),心肌病变检出率分别为75％、35％、,Ⅲ组末见病变。x^2检验(Ⅰ组)病变检出率显著高于Ⅱ组(P<0.05)。血清中CVB_(3m)病毒中和抗体效价Ⅰ组为1:256,Ⅱ组为1:1024,Ⅰ组中和抗价显著低于Ⅱ组。提示Ⅰ组心脏病变检出率显著高于Ⅱ组,且病变重。除其他因素外,低硒鼠感染病毒后体内产生病毒中和抗体效价降低,导致Ⅰ组鼠体内清除病毒能力下降,有一定的关系。

白细胞介素-12干预小鼠柯萨奇B_(3m)病毒性心肌炎的研究

目的 探讨外源性白细胞介素 12 (IL 12 )在病毒性心肌炎中的作用。方法 以柯萨奇B3m诱导的BALB/C心肌炎小鼠为研究对象 ,早期给予IL 12进行干预 ,测定心脏组织中病毒滴度 ,作心肌病理学检查 ,记录并比较小鼠生存率。结果 治疗组较未治疗组小鼠心脏组织中病毒滴度下降 ,心肌损害减轻 ,生存率提高。结论 细胞免疫在心肌炎发病过程中起重要作用 ,病毒性心肌炎早期使用IL 12 ,可减轻心肌损害 ,提高感染动物的生存率 ,从而能改善预后 。

小柴胡汤及其分解剂对柯萨奇B_3m病毒感染乳鼠心肌保护及细胞免疫调节作用的研究

目的 :观察小柴胡汤及其分解剂Ⅰ号和分解剂Ⅱ号对心肌细胞的保护和对机体的免疫调节作用。方法 :以柯萨奇病毒B3亲心肌株 (CVB3m)腹腔注射诱导Balb/c乳鼠心肌炎模型 ,分别予以小柴胡汤、分解剂Ⅰ号及分解剂Ⅱ号 ,经灌胃后 ,于不同时间进行各组的NK细胞活性、T细胞亚群及心肌病理组织学检查。结果 :(1)小柴胡汤和分解剂Ⅱ号在病毒性心肌炎急性期均能明显提高NK细胞活性 ,有调节T细胞亚群功能 ,与病毒对照组比较有显著性差异 (P <0 0 5)。而分解剂Ⅰ号此作用不明显。 (2 ) 3种治疗药物对心肌免疫损伤均有明显保护作用 ,小柴胡汤作用明显优于分解Ⅰ号和分解剂Ⅱ号 (P <0 0 5)。而分解剂Ⅰ号和分解剂Ⅱ号比较未见显著性差异 (P >0 0 5)。结论 :小柴胡汤和分解剂Ⅱ号对病毒性心肌炎NK细胞活性和T细胞亚群具有双向调节作用 ,3种治疗药物对心肌的免疫损伤均有明显保护作用。

不同提取方法的黄芩制剂体外抗柯萨奇病毒B_(3m)和保护细胞作用的比较研究

目的研究采用两种不同的提取方法得到两种黄芩制剂,探讨其抗病毒和保护细胞的作用机制。方法采用微量细胞培养法,观察细胞病变和MTT法检测细胞活性。结果根据上述两种检测方法,两组药物的预防保护率无显著性差异(P>0·05);两组药物均有明显的保护病毒感染后细胞作用,而黄芩粗提物组在1/2TD0浓度时治疗保护率明显高于黄芩精提物组,有显著性差异(P<0·05)。HPLC测定黄芩粗提物组具有色谱峰数量多,而黄芩精提物组的色谱峰明显少于黄芩粗提物组;黄芩粗提物中黄芩苷为质量分数2·691%,而黄芩精提物中黄芩苷中质量分数为3·826%。药物浓度在最大无毒浓度(TD0)时,黄芩粗提物中黄芩苷为0·042g·L-1;而黄芩精提物中黄芩苷为0·048g·L-1。两组药物中TD0时黄芩苷含量相似。结论黄芩精提物直接灭活病毒作用不明显,黄芩粗提物制剂中除黄芩精提物主要成分之外的其他成分可能具有直接灭活病毒作用。黄芩粗提物和精提物两种制剂均具有明显治疗作用,黄芩精提物主要成分黄芩苷可能起到重要作用,除黄芩精提物主要成分黄芩苷外的其他黄酮类成分也可能发挥了作用。

通脉口服液对柯萨奇病毒抑制作用及对小鼠急性CVB_(3m)心肌炎治疗作用的实验研究

目的探讨通脉口服液对柯萨奇病毒感染的小鼠心肌炎模型的治疗作用和抑制病毒效果。方法用通脉口服液和病毒唑注射液分别于模型小鼠(CVB3m所致Balb/c小鼠心肌炎)连续给药7d,第8日取心肌和血标本;观察病死率、心肌炎发病率和心肌病理以及心肌组织与血的病毒滴度。结果通脉口服液能明显降低心肌炎模型小鼠心肌中的病毒滴度,其中高剂量组的作用强度明显大于低剂量组和病毒唑对照组;通脉口服液可以明显降低模型小鼠心肌炎的病死率(高剂量与低剂量),明显减少心肌组织病理积分(高剂量)。结论通脉口服液对心肌炎具有较明显的治疗作用,可以明显减轻病毒对心肌细胞直接损害。

抗生素S_(632)A_3在体外抗柯萨奇病毒B_(3m)株作用的研究

目的 :体外测定抗生素S632A3 抗柯萨奇病毒B3m 株的作用 ,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据。方法 :用不同稀释度的抗生素S632A3 抑制柯萨奇病毒B3m 株对Vero细胞的感染作用 ,48h后观察细胞病变效应 ,并用MTT法测定细胞活性。结果 :抗生素S632A3 能明显抑制柯萨奇病毒对Vero细胞的致病变作用 ,使细胞存活率升高。结论 :该药物有较显著的抗柯萨奇病毒B3m 株的作用 ,且对细胞的毒性低 ,但该药物对柯萨奇病毒B3m 株无预防作用 ,是一种具有潜在开发前景的药物。

甲基强的松龙对柯萨奇病毒B_(3m)体外作用的研究

目的 探讨甲基强的松龙体外在无免疫因素影响下与柯萨奇病毒B3m(CVB3m)作用情况。方法 首先测定甲基强的松龙对Hela细胞的毒性 ,并以微量法及全量法从最大无毒浓度开始 2倍系列稀释后作用于感染CVB3m的Hela细胞 ,并收集各稀释度上清液进行病毒半数感染量 (TCID50 )重新滴定。结果 ①甲基强的松龙高浓度 (>1.2 5mg/ml)对Hela细胞有毒性作用 ,最大无毒浓度为 1.2 5mg/ml;②低浓度甲基强的松龙可促进细胞生长 ,且在 1.2 5mg/ml、0 .6 2 5mg/ml有限制病毒复制作用 ,其细胞病变及培养上清液的TC1D50 均低于病毒对照孔 ,抑制倍数分别为 2 4 9和 31.8倍。结论 甲基强的松龙本身无直接促进病毒增殖作用 ,低浓度反而保护细胞 ,并可借助体内免疫系统 ,发挥免疫抑制作用 ,在柯萨奇病毒感染时 ,适时。

肉桂油治疗小鼠CVB_(3m)病毒性心肌炎的实验研究

目的:研究肉桂油(OC)对柯萨奇病毒B3m(CVB3m)诱发性小鼠病毒性心肌炎(VMC)的治疗作用.方法:0.1mLCVB3mip建立BALB/c小鼠VMC模型.正常对照组同法接种0.1mL不含病毒的Eagle液,与感染病毒小鼠隔离饲养.于接种病毒72h后给药,OC治疗组(49.1,36.7,26.5mg/kg肉桂油,ig)、阳性药物组(50mg/kg黄芪注射液,ip)、模型组与正常对照组(2500mg/kg生理盐水,ig),连续给药1wk.观察指标:累计死亡率与中位生存时间;接种病毒后10d心肌组织光、电镜组织病理学检查;心肌匀浆MDA含量、SOD活性;血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)含量;21d心肌组织光镜病理检查.结果:OC49.1和36.7mg/kg治疗组可降低小鼠死亡率,延长中位生存时间,降低急性期血清中CK,CKMB含量以及心肌中MDA含量,提高SOD活性;减轻急性期、亚急性期小鼠心肌组织的坏死与钙化,与模型组比较差异显著(P<0.05).结论:OC具有治疗柯萨奇病毒B3m诱发性小鼠VMC的作用.

中药对病毒性扩张型心肌病小鼠心肌ICAM-1的影响

目的:通过观察益气养阴、活血化瘀方对病毒性扩张型心肌病小鼠心肌ICAM-1表达水平的影响。方法:210只Balb/c小鼠随机分为4组。通过反复多次腹腔注射柯萨奇B3m病毒,建立病毒性扩张型心肌病小鼠模型。中药低剂量组、中药高剂量组用益气养阴、活血化瘀方治疗。于实验终点观测各组小鼠心肌病理形态学改变、死亡率、体重、心脏质量指数变化,SABC法检测小鼠心肌ICAM-1表达水平。结果:中药低剂量组、中药高剂量组小鼠心肌ICAM-1表达水平显著低于模型组(P<0.01),且心肌病理改变亦较模型组轻微。结论:益气养阴、活血化瘀方可下调病毒性扩张型心肌病小鼠心肌ICAM-1表达水平,减轻炎性细胞损伤和自身免疫损伤。

益气养阴 活血化瘀方对病毒性扩张型心肌病小鼠心肌ICAM-1表达水平的影响

目的:通过观察益气养阴、活血化瘀方对病毒性扩张型心肌病小鼠心肌ICAM-1表达水平的影响,探讨其治疗病毒性扩张型心肌病的作用机理。方法:210只Balb/c小鼠随机分为4组,空白组30只,模型组、中药低剂量组和中药高剂量组各60只。通过反复多次腹腔注射柯萨奇B3m病毒,建立病毒性扩张型心肌病小鼠模型。中药低剂量组、中药高剂量组用益气养阴、活血化瘀方治疗。于实验终点观测各组小鼠心肌病理形态学改变、死亡率、体重、心脏质量指数变化,SABC法检测小鼠心肌ICAM-1表达水平。结果:中药低剂量组、中药高剂量组小鼠心肌ICAM-1表达水平显著低于模型组(P<0.01),且心肌病理改变亦较模型组轻微。结论:益气养阴、活血化瘀方可下调病毒性扩张型心肌病小鼠心肌ICAM-1表达水平,减轻炎性细胞损伤和自身免疫损伤。

归黄颗粒对病毒性心肌炎小鼠的心肌保护作用

目的 :探讨归黄颗粒对实验性病毒性心肌炎的防治作用。方法 :腹腔注射柯萨奇B3m亲心肌病毒株造成Balb/C乳鼠心肌炎模型 ,观察小鼠症状和死亡率、心肌病理变化、血清酶学等指标。结果 :归黄颗粒可降低心肌炎小鼠的死亡率 ;降低心肌感染病毒的滴度及组织病理损伤积分 ;抑制CVB3m感染后所致的LDH活性异常升高 ,并可使CK的水平降低。结论

扩张型心肌病与病毒持续感染关系的实验研究

目的 通过建立扩张型心肌病动物模型观察其与病毒持续感染的关系。方法 采用柯萨奇Ｂ３ｍ病毒分次小剂量多次接种Ｂａｌｂ／ｃ雄性小鼠制作扩张型心肌病动物模型，对不同时期小鼠的心脏进行大体观察、图象分析及组织学的光镜和电镜检查。结果 成功地建立了扩张型心肌病动物模型。在１０只（２１．７４％）接种病毒２７０ｄ和３００ｄ的病毒感染组小鼠心脏的表面分布着许多灰白色点；部分小鼠的心室内有附壁血栓，心室腔内可见钙化灶。１８０ｄ小鼠的心脏扩大，室间隔及局部室壁增厚；２７０ｄ和３００ｄ后的小鼠心脏扩大，心房、心室腔增大，心室游离壁及室间隔变薄，符合扩张型心肌病的表现。光镜、电镜检查发现类似扩张型心肌病早期的病理变化。结论 在实验小鼠扩张型心肌病的发病过程中柯萨奇Ｂ病毒持续感染起着关键性的作用。