在线二维柱切换-高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度

目的:建立测定人血清中多索茶碱浓度的方法。方法:采用在线二维柱切换-高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度,一维色谱柱为Waters C_(18),中间柱为SC2,一维、二维柱流动相均为甲醇-水(70∶30,V/V),检测波长为273 nm,柱温为40℃,进样量为10μL。结果:多索茶碱在0.5~50.00μg/m L质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),检测限为0.01μg/m L,定量限为0.5μg/m L,日内、日间精密度的RSD分别为1.51%~1.89%和1.52%~1.92%(n=5),准确度为97.91%~104.19%(n=5),提取回收率为91.63%~93.44%(RSD<2.00%,n=3),基质效应RSD≤3.01%(n=6),稳定性的RSD<5.00%(n=6)。3例患者静脉输注多索茶碱葡萄糖注射液(0.3 g/d)达稳态后,次日给药前静脉血清中多索茶碱的浓度为3.23、3.35、3.68μg/m L,RSD为2.28%、2.34%、2.14%(n=5)。结论:该方法简便、快速、准确,适用于临床多索茶碱的血药浓度检测。

柱切换-高效液相色谱法测定抗病毒口服液中非法添加利巴韦林

提出了由双泵单阀的驱动系统和双柱（预处理柱和分析柱）切换的分析系统所组成的色谱分析流程并应用于测定抗病毒口服液中非法添加物利巴韦林。样品离心后取上清液直接进样子C18预处理柱，水作为预处理流动相；用0.3g·L^-1磷酸二氢钠溶液（分析流动相）将保留在预处理柱上的药物冲入Kromasil C18分析柱（250mm×4．6mm，5μm）进行测定。方法集样品净化和色谱分析一次连续进行，测定条件下无干扰。检测波长205．6nm，药物的质量浓度在0．4～40．0mg·L^-1范围内呈线性（r=0．9992），检出限（S／N=3）为0．08mg·L^-1,加标回收率分别为98．32％，98．45％。99．45％。

柱切换-高效液相色谱法与均相酶免法检测艾司西酞普兰血药浓度的比较研究

目的:比较柱切换-HPLC和均相酶免法快速测定艾司西酞普兰血药浓度结果的准确性。方法:建立柱切换HPLC法和均相酶免法测定艾司西酞普兰的血药浓度的方法,并对两种方法进行方法学验证。收集本院住院患者60例病例,两种方法同时监测同一批患者的艾司西酞普兰血药浓度。结果:柱切换-高效液相色谱法与均相酶免法进行线性回归,回归方程为:y=0.9219x+0.0501(n=60,r=0.8999)。两种方法比较的结果进行T检验,同一患者测定结果无显著性差异(p>0.05)。结论:柱切换HPLC和均相酶免法均可测定艾司西酞普兰血药浓度,但是均相酶免法测定复杂,成本高,柱切换HPLC法具有灵敏度高、简单、方便、且显著降低检测成本等优点,可适用于医院检验科和临床药学的应用。

柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量及营养价值评价

建立柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量,采用氨基酸比值系数法评价其营养价值。采用盐酸水解法制得巴戟天氨基酸供试品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺为柱前衍生化试剂,采用高效液相色谱法,使用Ultimate Amino Acid色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)以0.1 mol/L无水乙酸钠-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长为254 nm,测定氨基酸含量;通过氨基酸比值、氨基酸比值系数、氨基酸比值系数分等评价其营养价值,并采用系统聚类和主成分分析对其进行分类分析。结果表明,15种氨基酸线性关系良好,相关系数r≥0.9996。16份巴戟天氨基酸总含量为17.87~102.15 mg/g,均检测到15种氨基酸,其中包含6种必需氨基酸,占总氨基酸含量的14.15%~32.06%;8种药用氨基酸,占总氨基酸含量的45.20%~56.31%。限制氨基酸为苏氨酸和亮氨酸,氨基酸比值系数分为33.87~61.31。不同巴戟天样品氨基酸组成相关性显著;主成分分析提取2个主成分,累计方差贡献率为97.085%,可将16批巴戟天分为三类。该实验测定方法简单有效,可同时分离测定15种氨基酸,精密度与重复性良好,有较高的药用价值,可为巴戟天的品质分析和资源开发利用提供参考。

柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中16种氨基酸的含量

提出了2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中甘氨酸、亮氨酸、组氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、异亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸等16种氨基酸含量的方法。取化妆品样品5 g置于50 mL离心管中,加入5 mL水,超声10 min,加热煮沸15 min,冷却后加入15 mL 35 g·L^(−1)磺基水杨酸溶液,以转速10500 r·min^(−1)离心20 min。取全部上清液,用35 g·L^(−1)磺基水杨酸溶液定容至25 mL。取1 mL样品溶液,加入0.5 mol·L^(−1)碳酸氢钠溶液(pH 9.0)1 mL和1%(体积分数)DNFB衍生溶液1 mL,混匀,于60℃加热10 min,冷却后用0.01 mol·L^(−1)磷酸二氢钾溶液(pH 7.0)定容至5 mL,所得溶液中16种氨基酸经X Bridge C_(18)色谱柱分离,以不同体积比的含1%(体积分数)N,N-二甲基甲酰胺的0.05 mol·L^(−1)乙酸钠缓冲液(pH 6.5)-体积比1∶1的乙腈-水混合溶液为流动相进行梯度洗脱,在360 nm处检测。结果表明:16种氨基酸标准曲线的线性范围均为0.004~40.0 mg·L^(−1),检出限(3S/N)为0.1~0.2 mg·kg^(−1);对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为89.0%~105%,测定值的相对标准偏差(n=7)均不大于10%。方法用于11种市售化妆品分析,检出的氨基酸成分多为组氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸。

柱切换-反相高效液相色谱法测定血浆中沙丁胺醇浓度

目的 采用柱切换对反相高效液相色谱法测定血浆中沙丁胺醇浓度的方法进行改进。方法 采用Ultrasphere CN色谱柱 ( 2 5 0× 4.6m m,5μm )和 Krom asil C1 8( 2 0× 4m m,5μm )预处理柱 ,分析和预处理柱均以p H 2 .8、0 .0 2 5 mol/L磷酸盐缓冲液∶乙腈∶甲醇 ( 95∶ 4∶ 1)为流动相 ,吗啡作内标。血浆样品加入含二苯基硼酸 - 2 -氨基乙脂的缓冲液 ( p H 9.0 )后 ,用含四辛基溴化铵的氯仿萃取 ,再用 0 .0 8m ol/L醋酸 3 0 0μl反萃 ,取酸液10 0μl进样 ,预处理柱 0 .7～ 1.5 m in流出组份进入分析柱分析 ,2 2 4nm波长下检测 ,按内标法定量。结果 标准曲线线性范围为 0 .5～ 3 2μg/L ,最低定量限为 0 .5μg/L ,沙丁胺醇和内标的保留时间分别为 6.7min和 7.6m in,日内 RSD小于 5 % ,日间 RSD小于 8% ,萃取回收率大于 80 % ,方法回收率在 96%～ 10 7%。结论 本法具有快速简便 ,灵敏准确等特点 ,适用于沙丁胺醇血药浓度测定及药代动力学。

柱切换-荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中特布他林浓度

采用柱切换技术 荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中特布他林 (TB)浓度。使用LunaC8( 2 )和KromasilC18为分析柱 ( 1 5 0mm× 4.6mm ,5 μm)和预处理柱 ( 2 5mm× 4.6mm ,5 μm) ,流动相分别为pH 3 0 ,0 .0 3 3mol/L磷酸盐缓冲液∶甲醇∶乙腈 ( 92∶7∶1 )和水∶甲醇∶乙腈 ( 97∶2∶1 ) ,流速均为 1 .0ml/L。血浆样品经乙腈沉淀蛋白后进样 ,切换时间为 3 .2～ 4.2min。荧光检测 ,λex为 2 80nm ,λem为 3 0 9nm。以沙丁胺醇作内标 ,按内标法定量。标准曲线线性范围为 0 .8～ 3 2 μg/L ;最低定量限为 0 .8μg/L;TB和内标的保留时间分别为 8.7和 9.3min;日内RSD小于 4% ,日间RSD小于 9% ,方法回收率在 93 %～ 1 1 2 %。

柱切换技术-高效液相色谱法快速检测大鼠血浆中的普萘洛尔对映体

建立了快速检测大鼠血浆中普萘洛尔对映体浓度的柱切换-高效液相色谱法。将自制限进填料柱作为预处理柱,通过直接进样方式,使普萘洛尔对映体在预处理柱上保留,同时除去血浆中的蛋白质等大分子;再通过柱切换技术,使普萘洛尔对映体在键合型纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiralcel OD-RH)分析柱上得到手性拆分。通过条件优化,确定切换前预处理流动相为硼酸盐缓冲液(pH 8.5)-甲醇(95∶5,v/v),流速为1.0mL/min;切换后分析流动相为异丙醇-乙醇-0.2 mmo l/L硼酸盐缓冲液(pH 8.5)(30∶30∶40,v/v/v),流速为0.8mL/min;切换时间为3 min;柱温为25℃;检测波长为293 nm。普萘洛尔两对映体在25～500 mg/L的质量浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.999 5),3个加标水平(50、100、250 mg/L)的平均回收率为97.89%～101.56%,日内和日间精密度均小于5%。该方法简便、快速、灵敏、准确,适于血浆样本中手性药物的药代动力学研究。

柱切换-高效液相色谱法快速监测癫痫患者卡马西平血药浓度

目的:建立快速监测癫痫患者血清中卡马西平血药浓度的柱切换-高效液相色谱法。方法:通过直接进样方式,利用自制限进填料作为预处理柱,除去血清中蛋白质等大分子杂质,卡马西平保留在预处理柱上;再通过柱切换技术,使卡马西平在分析柱上得到分析检测。通过条件优化,确定切换前预处理流动相为甲醇-水(5∶95),流速为1.2 mL·min-1;切换后分析流动相为甲醇-水(70∶30),流速为1.0 mL·min-1;切换时间为3 min;柱温:25℃;检测波长:240 nm。结果:卡马西平在0.05～20μg·mL-1范围内具有良好的线性关系(r=0.9994),3个浓度水平(2、8、12μg·mL-1)的平均回收率分别为100.5%、100.8%、99.3%,日内和日间精密度均小于5%。结论:本方法快速、简便、灵敏、准确,适用于癫痫患者日常临床血药浓度监测。

柱切换-高效液相色谱法与荧光偏振免疫法快速监测苯巴比妥血药浓度的比较

目的:比较柱切换-高效液相色谱法和荧光偏振免疫法快速监测卡马西平血药浓度的结果相关性,评价柱切换-高效液相色谱法用于苯巴比妥治疗药物监测的可行性。方法:收集兰州军区兰州总医院门诊共52例癫痫患者血样,在同一天内分别用柱切换-高效液相色谱法和荧光偏振免疫法同时测定苯巴比妥血药浓度。以柱切换-高效液相色谱法测定值(X),荧光偏振免疫法测定值(Y)进行相关回归分析和配对t检验。结果:柱切换-高效液相色谱法和荧光偏振免疫法测定值之间相关性良好,回归方程为:Y=0.995 3 X+0.046 2(n=52,r=0.999 0);测定值两者之间差异无显著性(P>0.05)。结论:柱切换-高效液相色谱法灵敏、简单、方便、可靠,且显著降低监测成本,可适用于广大医院临床血药浓度的常规监测。

柱前衍生-高效液相色谱法测定冰乙酸中微量乙酸酐

建立柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)联合紫外检测分析方法测定冰乙酸中微量乙酸酐的含量。样品采用吗啡啉为柱前衍生剂,色谱柱为Atlantis T3(250 mm×4.6 mm, 5μm),以磷酸水溶液(pH 3.0)-甲醇(体积比为95∶5)为流动相,流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为210 nm。乙酸酐的质量浓度在2.60~25.97μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.999 9,检出限为0.8μg/mL,定量限为3μg/mL。平均样品加标回收率为92.8%~99.2%,测定结果的相对标准偏差为0.9%~2.3%(n=6)。该方法可用于冰乙酸中微量乙酸酐的含量测定。

高效液相色谱法测定化妆品中苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯和4-羟基苯甲酸丙酯

目的建立化妆品中苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯和4-羟基苯甲酸丙酯的高效液相色谱测定法。方法样品经甲醇超声提取,0.45μm聚四氟乙烯滤膜过滤,使用ZORBAX SB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,甲醇、乙腈和0.02 mol/L乙酸铵(pH=4.0)为流动相梯度洗脱,通过二极管阵列检测器进行检测。结果苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯和4-羟基苯甲酸丙酯分别在242~20000 mg/kg、14.6~4000 mg/kg和6.6~4000 mg/kg范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,回收率为90.4%~104%,日内、日间精密度小于9.2%,方法应用于化妆品中防腐剂含量测定能力验证实验并获得满意结果。结论该方法简便、快速、准确、稳定,适用于同时定量测定化妆品中的苯氧乙醇、4-羟基苯甲酸甲酯和4-羟基苯甲酸丙酯含量。

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果采用C_(18)色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C_(18)色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。

高效液相色谱法测定舒筋活血片中香附烯酮和α-香附酮的含量

建立HPLC法测定舒筋活血片中香附烯酮和α-香附酮的含量。采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(65∶35)作为流动相,流速为1.0 mL/min;检测波长为254 nm;柱温30℃;进样体积5μL。结果显示,香附烯酮在0.422~2.530μg范围内线性关系良好,相关系数为1.000,α-香附酮在0.161~0.964μg范围内线性关系良好,相关系数为1.000;香附烯酮和α-香附酮的精密度、稳定性(24 h)、重复性实验的RSD均小于2.0%(n=6),香附烯酮平均回收率为101.9%,RSD为1.8%,α-香附酮平均回收率为102.7%,RSD为1.6%。该检测方法专属性好,准确度高,简单易行,能够为舒筋活血片的质量控制及评价提供技术支撑。

高效液相色谱法测定2,3,5,6-四氟苯酚中的有关物质

建立高效液相色谱法测定2,3,5,6-四氟苯酚中的有关物质。分析3批样品,结果显示:2,3,5,6-四氟苯酚与对羟基四氟苯甲酸、五氟苯甲酸的分离效果好。对羟基四氟苯甲酸的检测限和定量限分别为0.0312、 0.0625μg/mL,五氟苯甲酸的检测限和定量限分别为0.0797、 0.1992μg/mL。对羟基四氟苯甲酸和五氟苯甲酸的平均回收率分别为103.6%~107.5%、104.3%~107.9%。结果表明:对羟基四氟苯甲酸、五氟苯甲酸、最大未知单个杂质和总杂质的量均符合《中国药典》(2020版)规定。

在线二维柱切换-超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量

建立了二维柱切换-超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚含量的方法。一维色谱柱为Thermo Accucore XL C_（18）（250 mm×2.1 mm,4μm）,二维色谱柱为DIONEX Acclaim phenyl-1（150 mm×4.6 mm,3μm）,一维分析流动相为乙腈-水,梯度洗脱,二维分析流动相为乙腈-水,等度洗脱,14.5 min进行阀切换;检测波长：0~14.5 min为240 nm,14.5~30 min为275 nm,流速：0.5 m L/min,柱温：30℃。30 min即可完成明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量测定,并有效地将莫诺苷同分异构体分离。莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的线性范围分别为7.6~377 mg/L,9.2~459 mg/L,8.4~419 mg/L和8.2~409 mg/L,相关系数为0.9999,加样回收率为98.3%~100.2%。本方法快捷高效,可对控制明目地黄丸质量提供参考。

四-(对甲基苯基)-卟啉柱前衍生固相萃取富集高效液相色谱法测定烟草中痕量铅、镉、汞

研究了用四 (对甲基苯基 ) 卟啉柱前衍生、固相萃取富集、高效液相色谱法测定烟草中痕量Pb、Cd、Hg的方法。烟草样品用微波消化后 ,用四 (对甲基苯基 ) 卟啉 (T4MPP)柱前衍生 ,用WatersSep Park C1 8固相萃取微柱萃取富集Pb、Cd、Hg的T4MPP络合物 ,富集倍数为 5 0倍 ;然后用甲醇 (内含 0 .0 1mol L四氢吡咯 醋酸缓冲盐 (pH =1 0 ) )和四氢呋喃 (内含 0 .0 1mol L四氢吡咯 醋酸缓冲盐 (pH =1 0 ) )梯度洗脱为流动相 ,WatersXterraTMRP1 8(3 .9(1 5 0 )色谱柱为固定相分离 ,用二极管矩阵检测器检测 ;Pb、Cd、Hg的含量在 1～ 1 2 0 μg L范围内与峰面积呈线性关系 ,根据信噪比 (S N =3 ) ,方法检测限为 :Pd 0 .3 μg L、Cd 0 .5 μg L和Hg0 .3 μg L ,方法相对标准偏差为 2 .6%～ 4 .1 % ,标准回收率为 91 %～1 0 7% ,该方法用于测定烟草中的Pb、Cd、Hg。

柱切换高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬对映体浓度

建立了柱切换高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬对映体浓度的方法。以对溴苯甲酸为内标，样品经醋酸钠缓冲液酸化后，用V（正己烷）：V（异丙醇）=95：5萃取。以Chiralcel OJ-H柱（Daicel Chemicals，250mm×4．6mm，5μm）为分析柱，UltimateTM SiO柱（50mm×4．6mm，5μm）为预处理柱；流动相为V（正己烷）：V（异丙醇）：V（三氟醋酸）=96．5：3．5：0．1，流速为0．5mL／min；预处理流动相为V（正己烷）：V（异丙醇）=99．5：1，流速为1mL／min；柱切换时间为1．70-4．09min；紫外检测波长为230nm。布洛芬消旋体和s-（＋）-布洛芬标准曲线线性范围分别为0．21－20mg／L和0．10－10mg／L；日内RSD小于6．5％，日间RSD小于6．1％；方法回收率为93．3％－107．1％，萃取回收率为80．0％－86．6％。本法简便、准确，重现性好，可用于布洛芬对映体人体药代动力学研究。

柱前衍生-反相高效液相色谱法检测富硒米曲霉中有机硒形态

建立高效液相色谱法测定富硒米曲霉中有机硒形态的分析方法。采用6 mol/L HCl溶液,50℃水解富硒米曲霉48 h,提取样品中的有机硒,4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯柱前衍生,C18反相色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）分离,以乙腈-水（1∶1,V/V）和p H 6.8乙酸-乙酸钠缓冲液为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长：240 nm,测得富硒米曲霉中有机硒化合物主要是硒代胱氨酸,检出限（RSN=3）为0.680 mg/L,定量限（RSN=10）为2.244 mg/L,线性范围为5.0~100 mg/L,加标回收率为94.8%~105.8%,硒代胱氨酸的含量为1.25 mg/g。本方法简单、灵敏、重复性好,可适用于富硒米曲霉及相关产品中有机硒形态的检测分析。

柱前衍生-高效液相色谱法测定大熊猫血清中18种游离氨基酸

建立了大熊猫血清中18种游离氨基酸的反相高效液相色谱分析方法。血清样品经HPO3沉淀蛋白后,在弱碱性条件（pH 9.0）下游离氨基酸与2,4-二硝基氯苯在90℃水浴中避光反应1.5 h,生成具有紫外吸收的衍生物,用反相C18柱分离,紫外检测器检测,内标法定量。18种氨基酸的工作曲线的相关系数范围为0.9951～0.9999;相对标准偏差为1.4%～4.7%;检出限为0.20～7.72μg/mL;加标回收率为65.9%～118%。