OPA在线柱前衍生化HPLC-FLD法测定人血浆中硫酸阿米卡星的浓度

目的建立一种新的在线柱前衍生化HPLC-FLD法测定血浆中的阿米卡星。方法血浆样品碱化后用乙腈沉淀蛋白,上清液用OPA程序在线衍生化后进样分析。色谱柱：Agilent XDB-C18（5μm,4.6mm×150mm）;流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠（70∶30,pH=3.67）;荧光检测：λex=342nm,λem=440nm;流速：1.0mL/min;柱温：40℃;样品盘温度10℃;进样量：10μL;衍生化时间：1min。结果该法测定血浆中阿米卡星定量下限为1 mg/L,线性范围在1~50 mg/L（r=0.9993）;日内、日间RSD小于11%,绝对回收率大于90%,相对回收率大于95%。结论本法准确、灵敏、易于操作,可用于阿米卡星的血药浓度测定及药动学研究。

OPA柱前在线衍生HPLC法检测L-丙氨酸异丙酯盐酸盐中有关物质

建立了邻苯二甲醛(OPA)柱前在线衍生HPLC法测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1)中的有关物质(杂质B~G)。色谱柱采用ODS-2 Hypersil柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相A为0.02 mol/L乙酸钠缓冲液∶乙腈(90∶10),B为0.1 mol/L乙酸钠缓冲液∶甲醇∶乙腈(20∶40∶40),梯度洗脱。检测波长为338 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为40℃,进样量为10μl。结果显示,1与各杂质间分离度良好。杂质B~G的定量限分别为0.02、0.2、0.2、0.4、0.4、0.6μg/ml,检测限分别为0.015、0.1、0.1、0.2、0.2、0.3μg/ml。杂质B~G在相应浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 4),平均回收率(n=9)为97.43%~111.88%,RSD均<5%。建立的方法准确、可靠、灵敏,可用于1中有关物质的测定。

HPLC法在线衍生测定中华绒螯蟹中17种氨基酸含量

建立了中华绒螯蟹中17种氨基酸同时测定的反相高效液相色谱法。样品用HCl溶液在110℃水解24 h,水解液用NaOH溶液中和,以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂,采用3,3’-2硫代-2丙酸(DTDPA)将水解液中半胱氨酸氧化为S-2-羧乙基硫代半胱氨酸(Cys-MPA),实现对半胱氨酸的保护。采用AdvanceBio AAA氨基酸专用色谱柱进行分离,以Na_(2)B_(4)O_(7)、Na_(2)HPO_(4)缓冲液与乙腈、甲醇为流动相,在线衍生进样、梯度洗脱,紫外检测器检测,外标法定量。结果表明:17种氨基酸在1~200μg/mL的范围内与各自峰面积呈良好的线性关系,其线性相关系数(R^(2))在0.9973~1.0000之间,检测限为0.12~0.30μg/mL;在2.30,4.60,6.90 mg/g 3个加标浓度下的平均加标回收率在82.6%~115.2%之间,相对标准偏差(RSDs)为0.7%~4.8%。该方法实现了同时对中华绒螯蟹中半胱氨酸以及其他一级、二级氨基酸的准确定量。