AQC柱前衍生高效液相色谱方法测定康复新液中游离氨基酸和总肽的含量

目的应用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生化技术,建立康复新液中游离氨基酸和总肽的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法,并以总肽含量为指标对市售样品进行检测。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5 C18色谱柱);60%乙腈(A)-0.14 mol·L^(-1)三水合乙酸钠溶液,用磷酸调节pH值至5.0(B)为流动相,梯度洗脱;柱温:39℃;流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:248 nm。结果14种氨基酸均能达到良好的分离效果;门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸分别在2.0~99.7、3.4~168.5、2.8~139.6、4.0~201.4、4.8~238.1、6.7~336.9、3.3~167.5、9.7~487.3、4.1~202.5、4.4~221.6、5.4~270.5、3.3~166.8、4.8~240.8、4.7~236.6μg·mL^(-1)范围内呈现良好的线性关系(r=0.9995~1.0000);游离氨基酸的平均加样回收率(n=6)为86.8%~108.1%,RSD为2.8%~4.4%,总肽酸水解氨基酸的平均加样回收率(n=6)为83.2%~102.7%,RSD为0.1%~3.1%;仪器精密度、重复性、稳定性实验的RSD均小于5.0%。结论该方法与现行质量标准的紫外分光光度法比较,二者测定的总氨基酸含量结果基本一致,但前者的专属性、重现性更优;以具有生物活性的总肽为质控指标,针对性更强,可为康复新液的质量评价提供更科学、合理的方法。

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定扶正补血食疗方胶原蛋白含量

目的基于RP-HPLC法对扶正补血食疗方中胶原蛋白含量进行测定,并通过正交试验优选出扶正补血食疗方中胶原蛋白的最佳提取方法。方法于2021年12月至2022年1月将样品以6 mol/L盐酸于110℃水解24 h,利用AQC试剂进行衍生,采用Diamonsil-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以流动相A:无水乙酸钠11.48 g,三乙胺1.72 g,EDTA 1 mg,溶于1 L水中,用磷酸调pH为4.95;流动相B:乙腈水溶液(体积分数60%),梯度洗脱;柱温37℃;检测波长254 nm;流速1 mL/min;进样量10μL。以羟脯氨酸含量为评价指标,考察煎煮时间、料水比、煎煮温度对胶原蛋白含量的影响,优化其制备工艺。结果羟脯氨酸在10~500 mg/L浓度范围内线性关系良好(Y=0.0365X+0.5173,R^(2)=0.9991),平均回收率95.11%,相对标准偏差(RSD)为1.12%(n=6)。猪蹄胶原蛋白的最佳提取工艺为:A_(3)B_(1)C_(3),即加热温度为100℃,料水比为1∶8,提取时间为3 h。结论该方法快速准确,稳定可行,可作为扶正补血食疗方中胶原蛋白含量的测定方法,为该产品质量控制及临床应用提供科学依据。

异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法同时测定18种氨基酸

建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定 18种氨基酸的方法。以正亮氨酸为内标物 ,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂 ,用C18色谱柱在柱温 38℃下采用二元梯度洗脱 ,于 2 5 4nm波长处检测。氨基酸质量浓度在 3 5mg/L～ 5 5 6mg/L时 ,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度的线性相关系数 ,除胱氨酸 (0 96 2 )外均大于 0 99;18种氨基酸的加标回收率在 96 0 %～ 10 2 .4 %。信噪比为 2时 ,亮氨酸最低检测限为 0 5mg/L。应用该方法对小牛血去蛋白注射液中的游离氨基酸含量进行了测定 。

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定板蓝根中的氨基酸

建立了板蓝根中指标性成分精氨酸、脯氨酸和谷氨酸的柱前衍生化反相高效液相色谱分析方法.以2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,将氨基酸在碱性条件下衍生化,然后直接进样进行高效液相色谱测定.采用的色谱条件为:色谱柱Sinochrom ODS-BP柱(250 mm×4.6 mm i.d.,5 μm),流动相醋酸钠缓冲溶液(pH 6.4)-乙腈(体积比为850∶150),检测波长360 nm,采用外标法定量.该文同时对谷氨酸、精氨酸和脯氨酸进行定性,并对精氨酸和脯氨酸进行定量.精氨酸和脯氨酸的进样量分别为0.627～5.016 μg和0.874～7.000 μg时,其峰面积与进样量呈良好的线性关系(r分别为0.999 6和0.999 5).精氨酸和脯氨酸的平均回收率分别为98.5% (相对标准偏差(RSD)为2.5% (n=8))和98.4% (RSD为2.3% (n=8)).对板蓝根样品进行了测定,结果表明,板蓝根中精氨酸的含量最高,脯氨酸次之,谷氨酸含量很少.该法简便、准确、可靠,适用于板蓝根药材的质量控制.

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定大蒜中的蒜氨酸及其有关物质

采用6-氨基喹啉-N-（羟基琥珀酰亚胺基）氨基甲酸酯（AQC）为柱前衍生化试剂,建立了AQC柱前衍生化反相高效液相色谱法用于测定大蒜中的蒜氨酸及其有关物质的含量。该衍生化反应可瞬间完成,衍生化产物稳定。采用的色谱条件为：KromasilC18柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相A为0.1%乙酸铵（含0.03%乙酸）,流动相B为水-乙腈（体积比为40∶60）,线性梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为248nm。蒜氨酸在1.1719-1500μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9998）,日内、日间测定的精密度良好（相对标准偏差（RSD）为1.8%,n=5）,添加回收率为99.1%（RSD=1.9%,n=5）,最小检出浓度为0.15μg/mL。该方法准确、方便、快速。

麻黄碱对映异构体的柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法拆分

建立了一种用柱前手性衍生化 -反相高效液相色谱法分析麻黄碱对映异构体的方法;以( -)_氯甲酸薄荷醇酯作为手性衍生化试剂 ,( -)_麻黄碱与( +)_麻黄碱衍生化后生成一对非对映异构体,选用HypersilC18柱 ,以乙腈 -水 -乙酸 -三乙胺 (体积比29∶20∶0.2∶0.01)为流动相 ,在254nm下检测,色谱流分经电喷雾离子阱多级质谱分析验证;非对映异构体色谱峰的保留时间分别为17.1min和18.3min ,分离度为1.6;该法操作简单、快速、重现性好 ,可用于药品质量控制和对映体选择性药物动力学研究。

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定狗血清中格列美脲浓度

目的:建立测定狗血清中格列美脲浓度的柱前衍生化反相高效液相色谱法。方法:血清样品用二氯甲烷萃取后挥干,以1-氟-2,4-二硝基苯(DNBF)试剂衍生化,氮气挥干,用流动相(含1％冰醋酸)溶解残渣进样;色谱柱为Hypersil BDS C_(18)柱(150mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(75:30),流速0.8 mL·min^(-1),检测波长350nm。结果:血清中格列美脲浓度在0.028～0.648μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 8);高、中、低3种浓度萃取回收率为75.9％～83.2％;方法回收率在96.5％～109.3％之间;高、中、低3种浓度日内精密度RSD分别为1.5％,2.3％,6.3％,日间精密度RSD分别为2.9％,7.4％,14.8％。结论:本法简便、易行、灵敏度高,衍生化反应速度适中,适用于格列美脲血药浓度测定及药代动力学研究。

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定蝉蜕中3种氨基酸含量

目的建立柱前衍生化反相高效液相色谱法测定蝉蜕中天冬氨酸、酪氨酸和缬氨酸3种氨基酸含量的方法。方法采用酸水解法制备氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯柱前衍生化后进行高效液相色谱分析。采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm),梯度洗脱,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),流速1.0 mL/min,柱温为43℃,检测波长254nm,进样量20μL。结果氨基酸衍生溶液在36h内保持稳定,3种氨基酸在线性范围内峰面积与浓度的相关系数均大于0.999 0,加样回收率(n=6)分别为95.62%、101.26%和100.00%。结论所建立的检测方法稳定可靠,精密度和重复性良好,可用于蝉蜕中天冬氨酸、酪氨酸、缬氨酸含量测定。

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定硫酸小诺霉素的含量

目的:建立测定硫酸小诺霉素含量的柱前衍生化反相高效液相色谱法。方法:色谱柱:KromasilC18柱（4.6mm×150mm,5μ）;流动相:水-冰醋酸-甲醇（30:5:65）配制的0.02mol/L的庚烷磺酸钠溶液;检测波长:330nm。结果:线性范围为0.0976-0.9760mg/ml（r=0.9999）,重复性试验的相对标准偏差RSD为1.0％（n=6）。结论:本法专属性强、准确、灵敏,可以作为硫酸小诺霉素含量测定的首选方法。

柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖

目的:建立柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中的单糖。方法:采用20%TFA 水解rhFSH,释放单糖,用邻氨基苯甲酸衍生化,采用反相高效液相色谱法测定。色谱柱为 Jupiter C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相 A 为含0.15%正丁胺、0.25%磷酸、0.5%四氢呋喃的水溶液,流动相 B 为流动相 A 与乙腈比例为1:1的溶液,梯度洗脱,流速0.85 mL·min^(-1);柱温30 ℃;荧光检测器:激发波长为230 nm,发射波长为425 nm。结果:葡萄糖胺、半乳糖、甘露糖、岩藻糖进样量分别在0.39～3.94 nmol(r=0.9994),0.29～5.85 nmol(r=0.9998),0.24～4.90 nmol(r=0.9998),0.05～1.03nmol(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率(n=9)分别为104.1%,104.2%,104.2%,98.0%;RSD 分别为9.3%,1.8%,0.61%,6.0%。结论:该方法灵敏,专属性强,重复性好,可定量测定重组人促卵泡激素中的单糖。

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中牛磺酸的含量及其药动学研究

建立一种测定大鼠血浆中牛磺酸含量的柱前衍生化-高效液相色谱法,并将其应用于牛磺酸在大鼠体内的药动学研究。采用柱前衍生化高效液相色谱法,以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂,以KH2PO3缓冲液(pH7.0):乙腈∶水(70∶15∶15,v/v)为流动相,经C18色谱柱(250mm×4.6mm×5μm)分离,柱温30℃,流速1.0m L/min,进样量为20μL,牛磺酸衍生物的紫外检测波长为360 nm,并以DAS2.0计算其药动学参数。大鼠血浆中牛磺酸在1.29~1 287.5μg/m L质量浓度范围内线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限1.29μg/m L,主要药动学参数t1/2为(3.747±1.430)h,Cmax为(949.573±192.967)μg/m L,Tmax为(1.000±0.000)h,AUC0-t为(2 862.168±565.917)(mg/L)/h。该法简单、经济、灵敏,适用于牛磺酸血药浓度测定及药动学研究。

柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化反相高效液相色谱(HPLC)法,建立了9种常见单糖的分离模式,并成功地用于当归多糖的单糖组成分析,具有良好的重复性。结果表明,当归多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7种单糖组成,其摩尔比为0.57∶1.00∶0.13∶3·06∶8.16∶7.17∶12.69。该HPLC方法是简单、快速、灵敏、方便的分析技术,可用于当归多糖的质量控制。

AQC柱前衍生反相高效液相色谱法测定土壤中氨基酸

以2-氨基丁酸为内标物,6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯（AQC）为柱前衍生试剂,用XTerra C18 柱,1.8 mmol/L甲酸铵溶液（pH=3.0）和乙腈为流动相,采用梯度洗脱,光电二极管（PDA）检测器在248 nm波长处检测,建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定土壤中17种氨基酸的分析方法.方法重现性好,精密度高,氨基酸浓度在25～600 μmol/L范围内,线性相关系数均大于0.99;各氨基酸检出限≤0.5 pmol .并且在该色谱条件下,获得了灵敏度较高,彼此分离良好的17种AQC衍生氨基酸的LC-MS 质谱总离子流图,为今后土壤氨基酸的深入研究提供了更加有利的手段.

柱前衍生反相高效液相色谱法测定小麦中氨基酸含量

以肌氨酸为内标物,邻苯二甲醛-9-芴甲基氯甲酸酯为柱前衍生剂,用ODS色谱柱在柱温40℃下,采用二元梯度洗脱,DAD检测器在338 nm波长处检测,建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定小麦籽粒中17种氨基酸的方法.氨基酸浓度在5～800 μmol/L范围内,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸浓度的线性相关系数均大于0.996;17种氨基酸的加标回收率在97.5%～103.1%范围内.应用本方法对小麦籽粒中氨基酸含量进行测定,取得了较理想的结果.同时,本法还可应用于糙米和玉米等粮食中氨基酸含量的测定.

柱前衍生-反相高效液相色谱法检测富硒米曲霉中有机硒形态

建立高效液相色谱法测定富硒米曲霉中有机硒形态的分析方法。采用6 mol/L HCl溶液,50℃水解富硒米曲霉48 h,提取样品中的有机硒,4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯柱前衍生,C18反相色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）分离,以乙腈-水（1∶1,V/V）和p H 6.8乙酸-乙酸钠缓冲液为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长：240 nm,测得富硒米曲霉中有机硒化合物主要是硒代胱氨酸,检出限（RSN=3）为0.680 mg/L,定量限（RSN=10）为2.244 mg/L,线性范围为5.0~100 mg/L,加标回收率为94.8%~105.8%,硒代胱氨酸的含量为1.25 mg/g。本方法简单、灵敏、重复性好,可适用于富硒米曲霉及相关产品中有机硒形态的检测分析。

柱前衍生化高效液相色谱法测定固定剂量复方抗结核制剂中盐酸乙胺丁醇的含量和溶出度

建立了快速、灵敏和准确的柱前衍生化高效液相色谱测定固定剂量复方抗结核制剂中盐酸乙胺丁醇的含量和溶出度的方法。在无水环境下,盐酸乙胺丁醇与苯乙基异氰酸酯发生柱前衍生化反应的最佳反应的物质的量比为1∶6,检测波长为215nm。该法成功地用于由4种药物组成的复方抗结核制剂中盐酸乙胺丁醇的含量和溶出度的测定。

柱前衍生反相高效液相色谱法测定西洋参中游离氨基酸

目的:建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定西洋参中17种游离氨基酸的分析方法。方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,用Venusil-AA氨基酸分析专用柱(5μm,4.6mm×250mm),醋酸钠缓冲溶液(pH6.5)-乙腈溶液和80%乙腈水溶液为流动相,采用梯度洗脱,紫外检测器在254nm波长处检测。结果:氨基酸浓度在0.5～0.0125μmol范围内,线性相关系数均大于0.99。17种氨基酸的平均回收率在96.5%～102.3%。结论:西洋参根中的游离氨基酸主要以精氨酸为主,占游离氨基酸总量50%以上,这一结果为进一步研究西洋参的化学成分和药理作用提供了前提条件。

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定硫酸新霉素的含量

目的建立测定硫酸新霉素含量的柱前衍生化反相高效液相色谱法。方法采用SHIMADZU VP-ODS（5μm，4．6mm×150mm）色谱柱，以甲醇-水（40：60）（含0．2mol／L醋酸和0．013mol／L庚烷磺酸钠）为流动相，检测波长为380nm.结果新霉素在10．00—65．97μg／mL范围内线性关系良好（r=0．9989），方法精密度RSD=1．1％。结论此法简便、快速，可作为硫酸新霉素质量控制方法。

柱前衍生化高效液相色谱法测定鳖甲生、制品中氨基酸的含量

目的：建立柱前衍生化高效液相色谱法分析鳖甲生、制品中氨基酸的组成和含量。方法：采用酸水解法制备鳖甲生、制品的氨基酸样品溶液,以邻苯二甲醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,梯度洗脱。结果：18种氨基酸在38 min内得到较好分离,在一定浓度范围内线性关系良好（r≥0.9991）,鳖甲生、制品中检出的16种氨基酸的平均加样回收率在90.43%~110.69%之间,RSD在0.76%~5.89%之间（n=6）。结论：该方法分离效果较好,可用于测定鳖甲生、制品的氨基酸含量。

邻苯二甲醛柱前衍生化时间对反相高效液相色谱法测定稻米氨基酸含量的影响

目的确定反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定稻米氨基酸含量最适柱前衍生化时间。方法以氨基酸标准品以及稻米氨基酸提取物为对象,对柱前衍生化时间与氨基酸检测结果之间的关系进行研究。结果邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)和3-巯基丙酸与氨基酸的衍生化反应进行到15 min时,氨基酸的峰面积达到最大值,不同OPA-氨基酸衍生化产物的稳定性存在很大的差异。在15~300min的衍生化反应中,酪氨酸和苯丙氨酸衍生物的峰面积保持在非常稳定的水平上;而侧链含有羟基的丝氨酸和苏氨酸对衍生化时间特别敏感,衍生化时间超过15min后,其衍生物的峰面积开始快速下降;当衍生化时间在15~60min之内时,15种氨基酸中,只有酪氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和丙氨酸9种氨基酸的衍生物峰的面积下降幅度小于5%。结论柱前衍生化时间对稻米氨基酸衍生物峰面积的检测值较为敏感,衍生化时间控制在15 min之内能有效减小实验误差。