柱前衍生化-HPLC法分析不同产地厚朴叶多糖的单糖组成

建立了1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-高效液相色谱法(HPLC)同时测定厚朴叶多糖中的6种单糖含量的方法。采用Phenomenex(4.6 mm×250 mm,4μm)为色谱柱,流动相为0.2%磷酸溶液-乙腈(体积比为82∶18),流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为35℃。结果显示,基于HPLC法所建立的单糖检测方法,6种单糖成分在各自线性范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9994),平均加标回收率为97.17%~100.22%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.67%~2.82%。16批不同产地厚朴叶单糖组成相似,主要是由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成。主成分分析结果显示,湖北和重庆样品间的单糖组成得到明显区分。该试验所建立的方法操作简便,重复性和准确度高,适用于厚朴叶多糖中单糖成分的含量测定。

衍生化条件的优化及不同产地青蒿中青蒿素含量的柱前衍生化-HPLC法测定

Derivation conditions of pre-column derivation-HPLC method used for determinating artemisinin content were compared and selected,and artemisinin content in above-ground part of Artemisia annua L.from seventeen locations was compared by optimal pre-column derivation-HPLC method.The optimal derivation condition is selected via comparing of 0.2% NaOH solution addition(3,4,5,6 and 7 mL),derivation temperature(30 ℃,35 ℃,40 ℃,45 ℃ and 50 ℃) and derivation time(0,2,5,10,20,40 and 60 min) during derivation process.The optimal derivation condition is adding 5 mL 0.2% NaOH solution,then insulating in 40 ℃ water bath for 10 min.Differences of artemisinin content in A.annua from seventeen locations are obvious,the general trend is that artemisinin content decreases gradually with location from south to north,in which artemisinin content in A.annua from Youyang of Chongqing is the highest with a value of 7.08 mg·g-1.The method is simple and accurate with good reproducibility,and can be used to determinate artemisinin content in medicinal material of A.annua.

PMP柱前衍生化-HPLC法分析玛咖多糖的单糖组成

应用水提醇沉法获得玛咖多糖,苯酚-硫酸法测定玛咖多糖含量,PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生法对酸水解的玛咖多糖衍生化,HPLC法分析其单糖组成。结果表明,PMP柱前衍生化-HPLC法精密度、稳定性和重现性实验的相对标准偏差均小于3%,线性实验结果显示在1.50~650.00μg/m L浓度范围内各单糖的相关系数均大于0.999 1,加样回收实验各单糖的回收率均在98.83%~102.82%之间,确定玛咖多糖的单糖组成及摩尔比为m(D-甘露糖):m(葡萄糖):m(D-半乳糖):m(阿拉伯糖)=1:196:6:6。该方法分析玛咖多糖单糖组成简单易行,结果稳定可靠。

柱前衍生化-HPLC法测定市售3种胶类药材中L-羟脯氨酸和胶原蛋白的含量

目的:建立测定胶类药材中L-羟脯氨酸(L-Hyp)和胶原蛋白含量的方法,并比较对照药材与市售药材中两种成分的含量。方法:采用柱前衍生化法进行前处理,并采用高效液相色谱法测定样品中L-Hyp的含量:色谱柱为Kromasil C18,流动相为[乙腈-0.1 mol/L醋酸钠缓冲液(p H 6.5,7∶93,V/V)]-[乙腈-水(4∶1,V/V)](梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为43℃,进样量为20μL;再通过折算系数计算样品中胶原蛋白的含量。结果:L-Hyp检测质量浓度线性范围为2.5~40μg/m L(r=0.999 9);定量限为0.20μg/m L,检测限为0.05μg/m L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<4.0%;加样回收率为96.03%~102.07%(RSD=2.20%,n=9)。28批市售药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量有一定差异,其中13批市售阿胶药材与阿胶对照药材中两种成分的含量较为接近,而5批龟甲胶和7批鹿角胶药材中两种成分的含量高于其对照药材。结论:该方法准确、可靠,适用于测定胶类药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量。

柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度

目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠血药浓度。方法血清用环己烷提取,以环已烷羧酸为内标,2-溴苯乙酮为衍生化试剂,用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度。采用Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(82∶18);检测波长为248 nm;流速为1.0 ml.min-1;柱温:30℃。结果血清中丙戊酸钠线性范围为12.5～150mg.L-1,平均回收率98.74%,日内RSD<5%。结论该法快速、灵敏、准确,适用于临床常规监测需要。

柱前衍生化-HPLC法测定复方新斯的明眼用凝胶中牛磺酸的含量

目的:建立复方新斯的明眼用凝胶中牛磺酸的含量测定方法。方法:样品液经2,4-二硝基氟苯柱前衍生化后,采用高效液相色谱法。色谱柱为Eclipse XDB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(30∶70),检测波长为360 nm。结果:牛磺酸的线性范围为4.92～98.40μg·ml^(-1)(r=0.9999,n=5)。平均回收率为96.95%,RSD为1.16%(n=9)。结论:本方法简便快速、专属性好、重复性好。

PMP柱前衍生化-HPLC法分析不同生长年限黄芪中6种单糖的含量

目的:分析并比较不同生长年限黄芪中6种单糖的含量。方法:取来自3个产地的2~4年生黄芪药材,经水提醇沉、Sevage除蛋白后制得黄芪多糖;将上述多糖经三氟乙酸水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后,采用高效液相色谱法测定其中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等6种单糖的含量。以Symmetry C18为色谱柱,以磷酸盐缓冲液(pH6.8)-乙腈(84∶16,V/V)为流动相,流速为1.0 m L/min,检测波长为245 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果:黄芪多糖中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的含量分别为0.50~0.94、0.76~1.60、3.35~7.86、87.33~275.77、1.95~8.96、2.35~14.04 mg/g,2、3、4年生黄芪中上述单糖的总含量分别为98.26~139.92、173.81~295.71、122.37~182.41 mg/g。3年生黄芪中葡萄糖的含量与2、4年生黄芪有显著差异(162.71~275.77 mg/g vs.87.33~107.70、111.54~167.26 mg/g,P<0.05)。结论:2、3、4年生黄芪中均检出上述6种单糖,其中葡萄糖含量最高,且3年生黄芪中葡萄糖含量显著高于2、4年生黄芪。

柱前衍生化-HPLC法测定文冠果种仁油中脂肪酸含量

目的:建立文冠果种仁油中脂肪酸含量的HPLC测定法。方法:以ω-溴苯乙酮为衍生化试剂,三乙醇胺为相转移催化剂,采用BDSC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),检测波长235nm,以甲醇:乙腈:水(58:27:15)为流动相等度洗脱,柱温30℃,流速1.0mL·min-1,一次性分离五种脂肪酸,建立文冠果种仁油中脂肪酸含量的测定方法。结果:亚麻酸的线性范围为9.54～63.6μg,相关系数为0.9990,加样回收率为102.2%、RSD为2.78%(n=9)。结论:本方法重现性好,测量准确,可作为文冠果种仁油中脂肪酸含量测定的定量方法,用于文冠果种仁油的质量控制。

基于PMP柱前衍生化-HPLC法的淫羊藿多糖的单糖指纹图谱研究

建立了淫羊藿多糖酸水解的柱前衍生化单糖HPLC指纹图谱方法。淫羊藿多糖经2.0 mol/L盐酸水解,再经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化处理后,用HPLC法测定其单糖组成。采用YMC-Pack ODS-A柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm。采用2012年版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》,建立了40批淫羊藿样品的共有指纹图谱,确立了10个共有峰,通过与对照品比对,指认了8个共有峰,分别为D-甘露糖、D-葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖。通过相似度结合正交偏最小二乘法,对7批巫山淫羊藿进行分析。结果显示,相似度小于0.9,并得到4个差异性单糖成分。建立的指纹图谱方法简单、易操作,可为淫羊藿药材的质量评价提供参考。

柱前衍生化液质联用法测定氯乙酰氯试剂中的乙酰氯和二氯乙酰氯

建立了柱前衍生化超高效液相色谱-三重四级杆联用(UPLC-MS/MS)法同时测定酰化试剂氯乙酰氯中的杂质乙酰氯和二氯乙酰氯的含量。以苯胺作衍生化试剂,采用Poroshell 120 Aq-C18(150 mm×2.1 mm, 2.7μm)为色谱柱,0.1%(V/V)甲酸水和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。在电喷雾离子源(ESI),正离子监测下,采用多反应监测扫描(MRM)模式。乙酰氯和二氯乙酰氯分别在0.5~50 ng/mL和5~500 ng/mL范围内线性关系良好(R^(2)≥0.998 6),定量限为0.5和5 ng/mL,检出限为0.2和2 ng/mL;回收率(n=3)为90.8%~103.1%和92.5%~108.7%,RSD为1.4%~6.6%和0.9%~3.8%。衍生化产物室温放置24 h内稳定。方法准确可靠,简便高效,可用于氯乙酰氯中乙酰氯和二氯乙酰氯的同时检测。

柱前手性衍生化-HPLC法测定科立内酯二醇对映异构体含量

基于柱前手性衍生化-HPLC法,以联苯-4-甲酰氯为衍生化试剂,采用硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯手性色谱柱(AS-H,4.6 mm×250 mm,5μm),以正己烷-无水乙醇(V∶V=80∶20)为流动相,流速1 mL/min,柱温30℃,检测波长275 nm,外标法计算科立内酯二醇对映异构体超量值。结果显示,科立内酯二醇对映异构体衍生物分离度为2.8,(+)-科立内酯二醇衍生物在2.07~41.40μg/mL、(-)-科立内酯二醇衍生物在1.95~39.06μg/mL范围有良好线性关系(R2=0.9991、R2=0.9991)。(+)-科立内酯二醇衍生物低、中、高浓度平均加样回收率(RSD)分别为99.36%(0.51%)、99.24%(0.89%)、100.24%(0.65%);(-)-科立内酯二醇衍生物低、中、高浓度平均加样回收率(RSD)为99.74%(0.89%)、100.02%(0.31%)、98.81%(0.63%)。方法简便、快速,能准确测定科立内酯二醇对映异构体超量值,为前列腺素药物手性中间体提供新的分离和检测方法。

柱前衍生—高效液相色谱荧光检测法测定乳制品中6种母乳寡糖

目的:建立一种普及性强、灵敏度高,并能同时测定乳制品中6种母乳寡糖的高效液相色谱—荧光检测分析方法。方法:样品经冰醋酸沉淀,滤纸过滤后,经2-氨基苯甲酰胺溶液衍生,离心后经有机滤膜过滤,用AdvanceBio Glycan Map色谱柱分离,以乙腈-50 mmol/L甲酸铵溶液(pH 4.4)为流动相,梯度洗脱分离,并使用荧光检测器检测。结果:6种母乳寡糖在1.00~400.0 mg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数均>0.999,方法检出限为4.1~10.9 mg/kg,回收率为71.3%~90.2%,日内相对标准偏差(RSD)为1.0%~6.3%,日间相对标准偏差<10.0%。结论:该方法简单、快捷,可有效降低衍生峰的干扰,适用于乳制品中3′-岩藻糖基乳糖、2′-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、3′-唾液乳糖和6′-唾液乳糖6种母乳寡糖的日常检测。

完全酸水解-PMP柱前衍生化法分析甘草蜜炙前后多糖含量变化

目的建立完全水解-柱前衍生化HPLC法测定甘草多糖含量方法,比较甘草蜜炙前后多糖含量的变化。方法以甘草多糖为研究对象,通过平行实验优选多糖提取、完全酸水解条件、衍生化条件、色谱分析条件,建立完全酸水解-PMP柱前衍生化分析测定甘草多糖中鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖含量的方法,并进一步结合含量校正因子计算多糖含量。结果3批生甘草饮片炮制前多糖平均含量为(58.6±9.0)mg/g,蜜炙后饮片中平均含量为(79.3±8.5)mg/g,其炮制后多糖的平均含量提升了35.3%。结论该方法准确可行,是对生、炙甘草质量评价方法的重要补充,同时也可对其他中药多糖的含量表征提供参考。

三七中十八种游离氨基酸的柱前衍生化-HPLC法测定

建立了柱前衍生化-HPLC法同时测定三七中的18种游离氨基酸。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,采用C_(18)色谱柱,以乙腈-0.05 mol/L乙酸钠缓冲液为流动相,梯度洗脱,检测波长254 nm。结果显示三七根中的游离氨基酸以精氨酸、丙氨酸和脯氨酸为主,约占18种游离氨基酸总量的80%。18种氨基酸的平均回收率为96.5%～103.4%,RSD均小于3%。

异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度

目的：建立一种异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱同时测定人血浆中10种氨基酸的方法。方法：以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,Venusil-AA柱为分析柱,柱温40℃,采用二元梯度洗脱,254 nm波长处检测。结果：氨基酸血浆浓度在15.6-250μmol/L时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸血浆浓度的线性相关系数,均大于0.99;10种氨基酸的加样回收率在96.3%-103.4%;日间和日内变异系数均在4.8%以下。应用该方法对小儿血浆中氨基酸含量进行了测定,取得了满意的结果。结论：该法简便、稳定,并且分离效果好,可用于人血浆中氨基酸浓度的检测。

柱前手性衍生化-HPLC法测定普瑞巴林的光学纯度

目的：建立柱前手性衍生化-HPLC法测定普瑞巴林的光学纯度。方法：以N^2-（5-氟-2，4-二硝基苯基）-L-丙氨酰胺为手性衍生化试剂，对普瑞巴林S／R对映体进行衍生化，生成具有紫外吸收的一对非对映体衍生化产物（λmax=339nm），经C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），0．5％三乙胺溶液（用磷酸调节pH至3．0）-乙腈（55：45）为流动相进行分离，测定普瑞巴林的光学纯度。结果：所形成的普瑞巴林非对映体衍生化产物稳定且分离良好，R-异构体浓度在0．20～2．02μg／mL范围内与其衍生化产物峰面积呈良好的线性关系（r=0．9996），加样回收率为96．3％，最低检测浓度为0．02μg/mL。结论：所建立方法快速、灵敏、重复性好，可用于普瑞马林光学纯度的检查。

AQC柱前衍生化RP-HPLC法测定大蒜中蒜氨酸含量

建立了一种快速、可靠的检测大蒜中蒜氨酸(alliin)的方法。采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)试剂,在pH8.5的缓冲液中对大蒜中蒜氨酸进行柱前衍生,使用Waters Symetry C18分析柱(150mm×3.9mm,5μm),以pH5.5的0.02mol/L磷酸二氢钾-乙腈(75:25,V/V)为流动相,流速为0.8ml/min,激发波长为250nm,发射波长为395nm时荧光检测。蒜氨酸在1～16mg/L范围内浓度与峰面积线性关系良好,线性相关系数为0.99,检测限为1mg/L,回收率>95%。

柱前衍生化RP-HPLC法测定L-叔亮氨酸含量

以2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖异硫氰酸酯（GITC）为手性衍生化试剂，建立一种反相高效液相色谱测定L-叔亮氨酸的方法．以GITC为衍生化试剂对L-叔亮氨酸进行衍生化，优化衍’生化试剂用量和衍’生化时间等反应条件．使用岛津C18色谱柱（25Omm×4．6mm，5μm）分离衍生化产物，流动相为V（甲醇）：V（磷酸盐）-58：42的缓冲溶液（pH=2．8），流速为O．6mL／min，检测波长为254nm，柱温3O℃，进样量1O肛L，结果表明叔亮氨酸两个对映异构体的衍生化产物分离良好，在O．2～1．Ommo1／L范围内呈现良好的线性关系（r=O．9996）．该方法准确可靠，重现性好，适用于L一叔亮氨酸的含量测定．

利伐沙班中肼的柱前衍生化-HPLC法测定

建立了柱前衍生化高效液相色谱法测定利伐沙班中的肼。以苯甲醛为衍生化试剂,正庚烷为萃取溶剂,使用Dionex Acclaim 120 C18色谱柱,流动相为乙腈∶二乙胺四乙酸二钠缓冲液（0.3 mg/ml）（70∶30）,检测波长305 nm。肼在0.05~0.50μg/ml浓度范围内线性关系良好,平均回收率为98.3%,RSD为4.25%,检测限为4.5 ng/ml。

柱前衍生化-HPLC法测定大蒜中甾体皂苷的含量

目的：建立测定大蒜中甾体皂苷含量的方法。方法：以对硝基苯甲酰氯为衍生化剂对大蒜中甾体皂苷进行柱前衍生化,采用高效液相色谱法测定其含量。色谱柱为Shimadzu VP-ODS,流动相为乙腈-水（80∶20,V/V）,流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样量为20μl。结果：菝葜皂苷检测质量浓度线性范围为0-1.25 mg/ml（r=0.9990）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2%;加样回收率为93.1%-96.8%（RSD=1.56%,n=6）。结论：该方法操作简便、稳定、重复性好,可用于大蒜中甾体皂苷含量的测定。