芯片毛细管电泳-NDA柱前衍生荧光检测多巴胺及组胺

本文以汞灯为激发光源,利用自组装的高灵敏芯片毛细管电泳荧光光子计数器检测系统,NDA柱前衍生检测神经递质多巴胺和组胺.优化了NDA衍生多巴胺、组胺以及衍生后分离与检测的条件.本法多巴胺和组胺的检出限(S/N=3)分别为2.5×10-7mol/L、1.4×10-6mol/L.组胺和多巴胺可在45 s内分离和检测.

柱前荧光衍生-高效液相色谱法测定尿中雌二醇

建立了对硝基苯甲酰氯柱前荧光衍生 高效液相色谱法测定尿中 1 7α 和 1 7β 雌二醇的方法。尿样经盐酸水解、固相萃取柱浓缩、净化分离后 ,在无水条件下与对硝基苯甲酰氯反应生成荧光产物 ,再用高效液相色谱 荧光检测器测定。流动相为乙腈 水 (5 5∶45 )。线性范围为 7.0× 1 0 - 3～ 1 0mg L ,检出限均为 7.0× 1 0 - 3mg L,相对标准差分别为 0 .93 %～ 1 .5 %和 0 .88%～ 1 .3 %。平均回收率分别为 83 .5 %和 88.2 %。

人血清中环境雌激素的柱前荧光衍生-高效液相色谱测定法

目的建立对硝基苯甲酰氯柱前荧光衍生-高效液相色谱法同时测定人血清中环境雌激素双酚A、壬基酚、17α-乙炔基雌二醇以及内源性雌激素雌三醇、17α-雌二醇和17β-雌二醇的方法。方法血清样品经乙腈沉淀蛋白后，用乙醚萃取游离态雌激素，N2气流挥干、在无水条件下，雌激素与对硝基苯甲酰氯反应生成荧光产物，用高效液相色谱法定量。结果该法线性范围上限可达1．0×10^4μg／L，检测限为2．7～8．3μg／L，加标回收率范围为72．6％～98．6％。方法精密度为1．29％～4．52％。结论应用该法对10份血清样进行了测定，结果满意，该方法有应用推广价值。

固相萃取-分散液液微萃取-柱前衍生法测定水样中痕量雌激素

建立了碳纳米管的固相萃取-分散液液微萃取-柱前荧光衍生化(SPE-DLLME-PFD)测定水体中痕量雌三醇(E3)、双酚A(BPA)、17α-乙炔基雌二醇(EE2)及17β-雌二醇(E2)的高效液相色谱方法。采用中心复合设计和响应曲面法分析并优化SPE、DLLME及PLD条件,最佳条件为210 mL水样以2.0 mL/min的流速过固相萃取柱(碳纳米管量30 mg),甲醇洗脱,氮气浓缩并定容至0.6 mL(分散剂),将100μL C6MIM[PF6]与分散剂的混合液注入到NaCl含量为25%的2.0 mL去离子水中,离心,移取20μL下层有机相于样品瓶中,与4.0 mg衍生剂混合,在40℃水浴中衍生25 min;用0.1 mL甲醇溶解过量的衍生剂颗粒,取20μL进样分析。在优化条件下。4种雌激素的线性范围为0.05～5.00μg/L,相关系数R2=0.9966～0.9999;检出限介于0.13～6.33 ng/L(S/N=3)之间。不同加标浓度条件下,雌激素的加标回收率在83.1%～122.4%范围内(RSD=1.7%～9.6%)。在实际水样中E3和BPA检出率较高。与其它方法相比,本方法虽然萃取时间长、水样量大、步骤多,但具有检出限低、操作简便、环境友好等优点。

柱前衍生反相高效液相色谱法测定血清中9种胆汁酸

建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱(RP HPLC)测定血清中9种胆汁酸的方法。以4 溴甲基 7 甲氧基香豆素(BMC)为衍生剂,用WatersNovaC18色谱柱分离,采用甲醇/乙腈和水梯度洗脱,荧光检测,9种胆汁酸在5～40μmol/L范围内具有良好线性,r为0.9988～0.9998。回收率为85.40%～100.45%,检出限为1～2μmol/L。该法灵敏、特效、重复性好,可用于临床血清中微量胆汁酸的测定。

柱前衍生化高效液相色谱法测定莲子心中去甲乌药碱含量

以9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(Fmoc-OSu)为荧光衍生化试剂,建立了柱前荧光衍生化反相高效液相色谱法分析去甲乌药碱的高灵敏分析方法.在硼酸缓冲溶液(pH=8.5)中,去甲乌药碱与Fmoc-OSu在温和的反应条件下反应生成具有荧光性的去甲乌药碱衍生物.采用UltimateR○XB-C18(5μm,150mm×4.6mm i.d.)色谱柱,用乙腈-水(体积分数比为85∶15)等溶液强度洗脱,以λ=265nm为激发波长,λ=315nm为发射波长,对去甲乌药碱衍生物进行了检测.实验结果显示:去甲乌药碱在0.05～20μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 8),其最低检出限(S/N=3)为5.0ng/mL,加标回收率为94.1%～105.9%,RSD为2.74%(n=5).本方法灵敏度高、选择性好、准确度高,能够满足含去甲乌药碱中药材的质量控制.

氟虫腈亚砜荧光衍生化、HPLC-FLD检测方法的建立及应用

建立了氟虫腈代谢物-氟虫腈亚砜的柱前荧光衍生化方法,并将其应用于鸡蛋中的残留检测。优化后的柱前荧光衍生化反应主要条件如下:催化缩合剂为EDC/DMAP;反应溶剂为二氯甲烷;氟虫腈亚砜与荧光衍生试剂的用量比为1:8;45℃水浴中反应75 min。衍生产物为N-(3-氰基-1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-4-((三氟甲基)硫代)-1H-吡唑-5-基)-4-(2-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)-1H-菲并[9,10-d]咪唑-1-基)丁酰胺(DX1),具有很高的荧光强度。衍生化产物DX1的高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)的主要条件如下:C_(18)色谱柱;等度洗脱;流动相:乙腈/水(80/20,v/v);流速:1.0 mL/min;λex=310 nm,λem=404 nm;进样量20μL;柱温40℃。在上述检测条件下,氟虫腈亚砜HPLC-FLD检测方法的检测限为0.033μg/L,定量限为0.092μg/L。在此基础上,建立了鸡蛋残留氟虫腈亚砜提取和检测的HPLC-FLD方法,检测限和定量限分别达到了0.052和0.132μg/kg,精密度、稳定性和重现性在保留时间和峰面积上的RSD分别小于0.04%和2.7%,上机检测可在20 min内完成。该方法具有较好的灵敏度、精确性和可靠性,可应用于鸡蛋中残留氟虫腈亚砜的检测。

柱前衍生高效液相色谱检测美金刚中美金刚胺的含量

目的:建立一种柱前衍生高效液相色谱荧光检测法分析美金刚中美金刚胺的含量,为易倍申的质量控制提供简单灵敏的新方法。方法:制备新的荧光试剂2-萘氧基乙酰氯作衍生试剂,色谱柱为DVOTOC18,流动相采用甲醇-四氢呋喃-水(75∶10∶15)含0.01%三乙胺,激发波长226nm,发射波长349 nm。结果:衍生化反应在1 min内完成,衍生物24h内稳定;美金刚胺检测浓度的线性范围为0.1～0.8 mg.mL-1(r2=0.999 6),平均加样回收率为96.82%,日内RSD为1.46%(n=5),日间RSD为1.89%(n=5),最低检测限1.0ng.mL-1(S/N≥3)。结论:本方法操作简便,结果准确可靠、重现性好,衍生化反应迅速、稳定性好,可用于制剂含量的测定。

麦冬多糖单次静脉注射在大鼠体内组织分布

目的建立柱前荧光衍生-高效凝胶色谱(HPGPC)法测定大鼠组织样品中麦冬多糖的方法,并研究麦冬多糖在大鼠体内的分布特点和规律。方法将SD大鼠单次静脉注射麦冬多糖50mg·kg-1后,于5,10,30,60min取各组织,用HPGPC法测定药物浓度。结果大鼠心、肝、脾、肺、胃、肾、脑的AUC分别为3.270,2.031,2.303,6.178,4.963,214.571,0.613μg·h·mL-1。结论绝大多数药物聚集在肾脏,并以尿的形式排泄,其他组织中含药量分布顺序从高到低依次为肺、胃、心、脾、肝、脑。

乌拉尔甘草叶中氨基酸的反相高效液相色谱快速测定

用邻苯二甲醛柱前荧光衍生梯度洗脱的方法分析了乌拉尔甘草叶中14种氨基酸的含量,为利用甘草叶作为饲料提供了科学参考;该法操作简单 ,衍生反应迅速 ,灵敏度高 。

固相萃取-高效液相色谱法测定芹菜茎叶中的环境雌激素

利用超声波振荡提取芹菜汁液,固相萃取、浓缩、净化目标化合物,对-硝基苯甲酰氯柱前衍生,高效液相色谱法荧光测定雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇、双酚A和4-壬基酚的含量.结果表明:6种雌激素检测的线性范围为6.3～10 000μg/L,相关系数均大于0.999 5,最低检出量为3.7～6.3μg/L,样品加标平均回收率在89.60%～97.13%之间,相对标准偏差均小于2.9%.说明该方法适于芹菜中外源性环境雌激素和内源性雌激素的测定.

基于SPE-HPLC的芹菜中环境雌激素检测

[目的]建立芹菜茎叶中6种环境雌激素(雌酮、17β-雌二醇、雌三醇1、7α-乙炔基雌二醇、双酚A和4-壬基酚)的高效液相色谱检测方法。[方法]样品切碎榨汁后,用超声波振荡提取,固相萃取小柱浓缩净化,对硝基苯甲酰氯柱前衍生,高效液相色谱法荧光测定。[结果]6种环境雌激素的线性范围为8.3～1 000.0μg/L,相关系数r=0.998 8～0.999 9,最低检出限量为3.7～8.3μg/L。样品加标平均回收率在89.60%～97.13%,相对标准偏差RSD均小于2.9%。[结论]该研究建立的方法同时测定芹菜茎叶中的6种环境雌激素,结果满意。

油菜蜂花粉超临界提取物HPLC-FLD分析及体外清除自由基活性研究

本实验通过柱前荧光衍生HPLC-FLD对油菜蜂花粉超临界提取物(Rape bee pollen supercritical fluid extract,PSFE)中的主要成分进行了定性及定量分析,并采用超氧阴离子自由基(O-·2)体系、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)体系和羟基自由基(·OH)体系考察了PSFE提取物的体外清除自由基活性。结果表明,PSFE中含有丰富的游离脂肪酸,其中饱和脂肪酸占总游离脂肪酸的58%,不饱和脂肪酸占42%,尤其是不饱和脂肪酸C18∶3的含量最高,达到了10933.69μg/g。同时,PSFE对O-·2、DPPH·和·OH这三种典型的自由基均具有不同程度的清除作用,其中对DPPH·的清除能力高于阳性对照物L-抗坏血酸,并且随浓度的增大清除效果更显著,最高可达60.29%;而对O-·2和·OH的清除效果在实验浓度范围内最高可分别为11.99%和7.59%,比阳性对照物低。

溴氰菊酯对γ-GCS活力和谷胱甘肽含量影响

目的探讨溴氰菊酯(DM)对PC12细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活力和谷胱甘肽(GSH)含量的影响。方法用0、1、10、100μmol/L DM处理PC12细胞6或12 h后用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性;用0、10、100μmol/L DM处理PC12细胞6或12 h后,超速离心分离细胞胞质碎片,邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱(HPLC)荧光法检测组织中γ-GCS酶活力和GSH含量。结果 100μmol/L DM处理细胞6、12 h的细胞存活率为(0.862±0.053)、(0.746±0.101),均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.001);与对照组γ-GCS酶活力(1.78±0.26)pmol/106细胞.min比较,10、100μmol/L DM处理细胞6 h组γ-GCS酶活力为(1.66±0.20)、(1.73±0.09)pmol/106细胞.min,差异均无统计学意义;与对照组GSH含量(10.18±0.23)pmol/106细胞比较,10、100μmol/L DM处理细胞6 h GSH含量为(10.19±1.18)、(10.26±0.29)pmol/106细胞,差异均无统计学意义;与对照组γ-GCS酶活力(1.94±0.19)pmol/106细胞.min和GSH含量(9.57±0.39)pmol/106细胞比较,10μmol/L DM处理细胞12 h组γ-GCS酶活力(1.73±0.21)pmol/106细胞.min和GSH含量(9.72±0.41)pmol/106细胞差异均无统计学意义,100μmol/L DM处理细胞12 h组γ-GCS酶活力(1.62±0.09)pmol/106细胞.min差异有统计学意义(P=0.006)。结论较高浓度的DM处理细胞较长时间才抑制γ-GCS酶活力,可能与DM的细胞毒性作用有关。

高效液相色谱法测定生物脱硫系统中的含硫化合物

生物脱硫是利用微生物脱除气体和石油中的含硫化合物,具有操作条件温和、工艺流程简单、脱硫效率高、能量消耗低和环境污染少等优点。但是,当前仍然缺乏简单高效的分析方法来定量分析生物脱硫过程中的含硫化合物。针对这个问题,建立了柱前荧光衍生高效液相色谱法同时测定生物脱硫溶液中的亚硫酸盐、硫代硫酸盐和硫化物的分析方法。该分析方法中含硫化合物的标准曲线具有良好的线性关系,亚硫酸盐、硫代硫酸盐和硫化物相关系数分别为0.99946、0.99967和0.99965,其检测限分别为0.0006μmol/L、0.0007μmol/L和0.0011μmol/L;含硫化合物的加标回收率范围分别为98.17%–101.92%、100.90%–102.60%和101.11%–104.22%;并具有良好的重复性和稳定性。实验证明,该分析方法预处理简单、分析快速、结果准确,可用于同时测定不同生物脱硫系统中的含硫化合物。