柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量及营养价值评价

建立柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量,采用氨基酸比值系数法评价其营养价值。采用盐酸水解法制得巴戟天氨基酸供试品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺为柱前衍生化试剂,采用高效液相色谱法,使用Ultimate Amino Acid色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)以0.1 mol/L无水乙酸钠-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长为254 nm,测定氨基酸含量;通过氨基酸比值、氨基酸比值系数、氨基酸比值系数分等评价其营养价值,并采用系统聚类和主成分分析对其进行分类分析。结果表明,15种氨基酸线性关系良好,相关系数r≥0.9996。16份巴戟天氨基酸总含量为17.87~102.15 mg/g,均检测到15种氨基酸,其中包含6种必需氨基酸,占总氨基酸含量的14.15%~32.06%;8种药用氨基酸,占总氨基酸含量的45.20%~56.31%。限制氨基酸为苏氨酸和亮氨酸,氨基酸比值系数分为33.87~61.31。不同巴戟天样品氨基酸组成相关性显著;主成分分析提取2个主成分,累计方差贡献率为97.085%,可将16批巴戟天分为三类。该实验测定方法简单有效,可同时分离测定15种氨基酸,精密度与重复性良好,有较高的药用价值,可为巴戟天的品质分析和资源开发利用提供参考。

柱前衍生-高效液相色谱-串联质谱法测定鲜茶叶中的春雷霉素

目的建立柱前衍生高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定鲜茶叶中春雷霉素的检测方法。方法样品经甲醇/水溶液提取,MCX SPE阳离子交换柱(mixed-mode cation exchanger SPE column)净化,9-氯甲酸芴甲酯[9-fluorenylmethyloxycarbonyl(Fmoc)chloride,Fmoc-Cl]衍生后测定,内标法定量。结果目标化合物在0.31~20.00μg/L范围内,线性关系良好,相关系数大于0.998(r^(2))。鲜茶叶中春雷霉素的检出限(limit of detection,LOD)、定量限(limit of quantification,LOQ)分别为2.0μg/kg和5.0μg/kg。在LOQ、2×LOQ和10×LOQ水平上加标,平均回收率为95.2%~104.0%,相对标准偏差为7.4%~13.3%。结论基于Fmoc-Cl衍生化的测定法,能有效提高检测的灵敏度、降低基质的干扰;将西马特罗作为内标使用,可以提供更为准确的检测结果,该方法满足鲜茶叶中春雷霉素的监测。

柱前衍生-高效液相色谱法测定鱼类中组胺

建立测定鱼类中组胺含量的柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)联合紫外检测分析方法。样品均质后先用三氯乙酸水溶液震荡超声提取,再用丹磺酰氯衍生,采用HPLC-紫外检测器在254 nm处对组胺衍生物进行检测,以色谱峰面积外标法定量。组胺的质量浓度在1.0~50.0μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9997,方法检出限为7.2μg/kg,定量限为24μg/kg。样品加标回收率为96.8%~99.2%,测定结果的相对标准偏差为1.6%~3.7%(n=6)。该方法快速准确、灵敏度高、重复性好,可用于鱼类产品中组胺的定量分析。

柱前衍生-高效液相色谱法检测魔芋飞粉中的神经酰胺

建立了一种柱前衍生-高效液相色谱测定魔芋飞粉中神经酰胺的方法。将神经酰胺与氢氧化钾乙醇溶液在高温条件下进行脱酰基反应,再与9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)衍生化试剂反应,高效液相色谱分离后,采用紫外或荧光检测器检测。考察并确定了脱酰基以及衍生化反应的最佳条件,在110℃条件下用0.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液对神经酰胺标品或样品处理1.5 h,然后用10 mg/mL的FOMC-Cl对其进行在线衍生。采用Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm)分离,甲醇/水/磷酸(体积比10/90/0.05)-甲醇为流动相进行梯度洗脱,荧光检测器的激发波长和吸收波长分别为266 nm和305 nm;紫外检测器波长为262 nm。在神经酰胺浓度为20~500μg/mL范围内方法的线性关系良好,其中紫外检测器检测的相关系数(R^(2))为0.9978,荧光检测器检测的R2为0.9978,回收率为97.3%~103.6%,相对标准偏差<1.64%。所建立方法采用紫外和荧光检测器测定目标物的检测限分别为0.48μg/mL和0.0082μg/mL,定量限分别为1.6μg/mL和0.027μg/mL。

柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中的甜蜜素

白酒中甜蜜素(化学名为环己基氨基磺酸钠)是我国食品安全监督抽检计划中的重点关注项目,生产企业亟需简单、经济、灵敏度高而且可靠的检测方法。本研究建立了柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中甜蜜素的方法。在酸性条件下,通过脱磺酸基反应将样品中的环己基氨基磺酸钠转化为氨基化合物,然后加入400 g/L的氢氧化钠溶液中和样品处理液,再加入邻苯二甲醛衍生试剂与样品溶液中的氨基化合物进行反应,产生具有荧光信号的吲哚取代衍生物。以反相C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相进行等度洗脱,荧光检测器检测,外标法定量。结果表明,甜蜜素在0.1~2.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,其相关系数(r^(2))大于0.999。基于白酒样品,在0.1~1.0 mg/kg含量范围内进行3个浓度水平的加标回收试验(n=6),平均回收率为90.7%~100.9%,相对标准偏差为3.5%~5.6%,方法的检出限为0.03 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg。应用本方法对市售9种白酒样品进行检测,结果与GB 5009.97-2016(第三法)液相色谱-串联质谱法所得结果一致。本方法具有成本低、灵敏度高、专属性强、定量结果准确的特点,适用于大批量白酒中甜蜜素的定量检测,可为生产企业或相关机构进行白酒中甜蜜素的日常监测提供有力的技术支持。

苎麻水解液中单糖类组分的柱前衍生-高效液相色谱法检测

为加速苎麻纤维的合理开发和应用,建立了一套苎麻单糖类组成的分析方法。利用三氟乙酸水解苎麻,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生水解产物,采用C18色谱分析柱和紫外检测器检测苎麻水解产物中的单糖类组成。结果表明：苎麻水解率可达90%,水解产物包括葡萄糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、甘露糖、半乳糖、木糖等已知组分及少量未知组分,其中葡萄糖为主要组分,占已知单糖类总量的83.86%-86.54%;各单糖类组分的标准曲线线性相关系数为0.999 6-0.999 9,精密度均在2.02%以下,加样回收率为96.53%-102.76%。该方法能满足仪器检测要求,适用于分析苎麻水解产物中的单糖类组分。

柱前衍生-高效液相色谱法测定钢及合金中钨和钼

以tiron作为柱前衍生试剂,用含3mmol·L-1pH 3.8的HOAc-NaOAc,40mmol·L-1TBA-Br和2mmol·L-1tiron的甲醇-水溶液(53+47)作流动相,在C18柱上,于15min内实现了WO42-、MoO42-的分离测定。钨和钼的检出限分别为5.98和3.20ng·ml-1。方法快速,选择性好,用于钢及合金中高含量钨和钼的测定,结果与标准值相符。

柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中游离甲醛

采用柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中的游离甲醛。根据样品基质类型及配方的不同,采用两种方法进行提取。样品中的游离甲醛与五氟苯肼快速反应后,用有机溶剂萃取转移,经高效液相色谱测定,外标法进行定量,阳性样品用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱进行确证。采用INERTSIL ODS-SP色谱柱（25 cm×0.46 cm×5μm）,流动相A为甲醇,流动相B为体积分数0.2%的磷酸水溶液,流速1.0 m L/min,检测波长为255 nm,柱温40℃。方法在50-2 000μg/g的质量比范围内线性关系良好,相关系数（r）〉0.999。平均加样回收率为87.2%-108.2%,最低检出质量比为30μg/g。该方法快速简便,可用于化妆品中游离甲醛的定量分析。

大鼠血浆中痕量氨基酸的柱前衍生-高效液相色谱串联质谱测定

以1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)作为柱前荧光衍生试剂,在Hypersil BDS C18(4.6mm×200mm,5μm)反相色谱柱上,荧光检测波长为390nm(激发波长为333nm),采用梯度洗脱实现了20种氨基酸标准品衍生物的分离检测。20种组分的线性范围为51.6fmol^105.6pmol,线性回归系数均大于0.9995;检出限为6.3~177.6fmol(S/N=3∶1)。经柱后串联质谱电喷雾电离源(ESISource)实现了各组分的质谱鉴定,并以酪氨酸(Tyr)衍生物为例进行了质谱裂解机理解析。对A、B、C三组(A:安静对照组;B:运动力竭即刻组;C:力竭恢复12h组)24只大鼠血浆中氨基酸的定量测定结果表明,运动力竭即刻较安静状态大鼠血浆氨基酸含量明显增加;力竭恢复12h后血浆氨基酸水平基本恢复到运动前状态。方法的灵敏度高、重现性好,为大鼠血浆中氨基酸的测定提供了一种新方法。

柱前衍生-高效液相色谱法测定大熊猫血清中18种游离氨基酸

建立了大熊猫血清中18种游离氨基酸的反相高效液相色谱分析方法。血清样品经HPO3沉淀蛋白后,在弱碱性条件（pH 9.0）下游离氨基酸与2,4-二硝基氯苯在90℃水浴中避光反应1.5 h,生成具有紫外吸收的衍生物,用反相C18柱分离,紫外检测器检测,内标法定量。18种氨基酸的工作曲线的相关系数范围为0.9951～0.9999;相对标准偏差为1.4%～4.7%;检出限为0.20～7.72μg/mL;加标回收率为65.9%～118%。

分散液液微萃取-柱前衍生-高效液相色谱法测定水样中双酚A

建立了分散液液微萃取-柱前衍生-高效液相色谱法测定水样中双酚A的分析方法。通过交互正交试验和混合型优化实验设计对影响因素(萃取剂体积、分散剂类型及其体积、水样体积、pH值及离子强度)进行了优化。优化后的分散液液微萃取条件为:60μL萃取剂,0.4mL分散剂(甲醇),pH4.0;优化后的柱前衍生化条件:0.1mL2.0g/L衍生剂(对硝基苯甲酰氯)、衍生化时间30min;方法的线性范围:0.002～0.2mg/L(r=0.9997),检出限0.007μg/L(S/N=3);不同浓度双酚A的萃取率为59.0%～63.0%,相对标准偏差(RSD)2.5%～9.2%(n=5);水样中双酚A的加标率为86.5%～107.1%,RSD为4.0%～11.9%(n=5),其它雌激素(雌酮、雌二醇、雌三醇和17α-乙炔基雌二醇)对双酚A的测定无干扰。本方法可以对水环境中的痕量BPA进行检测,具有操作简便、快速等优点。

深海鱼油中脂肪酸的柱前衍生-高效液相色谱串联质谱分析

用1-2-(对甲苯磺酸酯)乙基-2-苯基咪唑4,5-f9,10-菲(TSEPIP)作为柱前荧光衍生试剂,在EclipseXDB-C8(4.6×150mm,5μm,Agilent)反相色谱柱上,采用梯度洗脱在检测波长为380nm(激发波长为260nm)的条件下,实现了阿拉斯加深海鱼油中饱和脂肪酸含量的外标法定量测定。26种饱和脂肪酸的线性范围是200.0pmol～48.83fmol,线性相关系数均大于0.9996,检测限为3.824～47.13fmol(信噪比为3:1测得,S/N3:1)。经柱后串联质谱大气压化学电离源(APCI)正离子模式实现了各种饱和与不饱和脂肪酸衍生物的质谱鉴定,进而通过峰面积归一化法得出了所有饱和与不饱和脂肪酸的相对含量。结果表明,深海鱼油主要含有C12～C22的脂肪酸,共鉴定出25种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸含量占69.71%(峰面积百分比,下同),特别是具有重要生理作用的多不饱和脂肪酸,如C20:5:5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(5,8,11,14,17-eicosapentaenoicacid,EPA,16.62%),C22:6:2,5,8,11,14,17-二十二碳六烯酸(2,5,8,11,14,17-docosahexenoicacid,DHA,12.31%)。

柱前衍生-高效液相色谱法快速测定膨化食品中的甜蜜素

建立了一种柱前衍生-高效液相色谱法快速测定膨化食品中甜蜜素的方法.用水直接提取膨化食品中的甜蜜素,在强酸环境中用次氯酸钠衍生处理,生成具有较强紫外吸收的N,N-二氯环己胺,通过HPLC,在C18柱上用V(乙腈):V(水)=70:30为流动相,在314 nm处,外标法定量.在1～100 μg/mL范围内线性良好.在0.1,0.2和0.4 mg/g 3个添加水平下回收率95.4%～118.8%之间,RSD%在0.96%～4.2%之间.

柱前衍生-高效液相色谱法测定生物检材中的氟乙酸钠

以α-溴苯乙酮酯为衍生化试剂,合成了α-氟乙酸苯乙酮酯（APFA）化合物,并以其为标准,建立了柱前衍生-高效液相色谱法测定生物检材中氟乙酸钠的方法.样品中的氟乙酸钠经酸化,丙酮-水（体积比4∶1）萃取,与α-溴苯乙酮衍生化后进行HPLC分析.色谱条件为：Hypersil ODS柱,乙腈-水（体积比50∶50）为流动相,紫外检测波长为254 nm.α-氟乙酸苯乙酮酯在1×10^-5～1×10^-2 mol/L的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数为0.999 4,生物样品空白添加实验的回收率为86%～93%,检出限为6.0 μmol/L（S/N=3）,相对标准偏差（RSD）小于3%.该方法灵敏度高、重复性好,适用于生物检材中氟乙酸钠的测定.

柱前衍生-高效液相色谱分离测定及质谱鉴定脂肪胺

采用新型荧光衍生试剂2-（2-苯基-1-氢-菲[9,10-d]咪唑）-乙酸（PPIA）进行柱前衍生,经荧光检测实现了脂肪胺的高效液相色谱（HPLC）分离测定及柱后质谱鉴定.60℃下在乙腈溶剂中用N-乙基-N′-[ （3-二甲氨基） 丙基 ]碳二亚胺盐酸盐（EDC）做缩合剂,衍生反应15 min可获得稳定的荧光产物.脂肪胺衍生物荧光检测波长为380 nm（激发波长为260 nm）.在Eclipse XDB-C8 色谱柱上,采用梯度洗脱对12种脂肪胺衍生物进行了优化分离,测定了造纸厂废水、大鼠端脑和酸奶中脂肪胺的含量.经柱后在线质谱大气压化学电离源（APCI Source）正离子模式实现了各种脂肪胺衍生物的质谱鉴定,借助对活性中间体的质谱解析确定了衍生反应的反应机理.该方法具有良好的重现性和回收率,多数脂肪胺的线性回归系数大于0.9996;检出限为3.1～18 fmol （S/N＝3∶ 1）.

柱前衍生-高效液相色谱法测定保健食品中16种氨基酸的含量

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定保健食品中16种氨基酸的含量。方法优化GB/T5009.124-2003的前处理方法,样品经稀释或置于顶空瓶中直接酸水解;并采用OPA/FMOC柱前衍生法,色谱柱为Thermo ODS Hypersil,以醋酸钠缓冲液（含三乙胺、四氢呋喃）和醋酸钠缓冲液（含乙腈、甲醇）为流动相进行梯度洗脱,在338 nm和262 nm检测波长下进行高效液相色谱法检测。结果 16种氨基酸在4-250μg/mL范围内呈现良好线性关系,在10μg/mL水平下加标回收率为85.8%-115.2%,RSD为0.1%-9.1%（n=6）,检出限在0.2-4.6 ng范围内。结论本方法操作简便、灵敏度高,可应用于实际样品的测定。

柱前衍生-高效液相色谱法比较使君子果实与种仁炮制前后使君子氨酸的含量

目的:建立柱前衍生-高效液相色谱法测定使君子中驱虫活性成分使君子氨酸含量的方法,并比较果实与种仁炮制前后使君子氨酸的含量差异。方法:采用2,4-二硝基氯苯对使君子氨酸进行衍生,Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),0.2%磷酸盐水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温为30℃,检测波长为360 nm,进样量为10μL。结果:使君子氨酸在3.2~420.0μg/mL范围内呈现良好线性关系(r=0.999 7),使君子氨酸的平均加样回收率为101.95%(RSD=2.21%,n=9)。15批市售使君子药材不同入药部位及炮制前后的使君子氨酸含量结果显示果实中的使君子氨酸含量均低于种仁,加热炮制后使君子氨酸含量呈下降趋势。结论:该检测方法简便、快速、准确,为完善使君子的质量评价标准提供了参考,也为其入药部位及制法的合理选用提供了依据。

柱前衍生-高效液相色谱法测定大蒜中蒜氨酸

目的建立了柱前衍生化高效液相色谱法测定大蒜中蒜氨酸的方法。方法衍生化试剂为邻苯二甲醛（OPA），采用Waters Symetry C18色谱柱（150mm×3．9mm），以0．05mol／LpH7．0的磷酸缓冲液-乙腈（70：30）为流动相，体积流量0．8mL／min，检测波长337nm。结果蒜氨酸在0．01～0．20mg／mL与峰面积线性关系良好，r=0．99，检测限为0．01mg／mL。平均回收率为93．9％，RSD为2.1（n=5）。结论本方法检测快速，定量准确，可用于大蒜中蒜氨酸的定量测定。

柱前衍生-高效液相色谱法测定岩藻多糖的单糖及糖醛酸含量

建立了一种同时测定岩藻多糖7种单糖及2种糖醛酸含量的柱前衍生-高效液相色谱检测方法。岩藻多糖用三氟乙酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,并采用配有紫外检测器的反相高效液相色谱仪在250nm波长下进行测定,实现了7种单糖和2种糖醛酸的良好分离。7种单糖和2种糖醛酸在1～50μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r>0.998,回收率在86%～105%之间,相对标准偏差均<10%。甘露糖和岩藻糖检出限分别为0.5μg/mL和2.0μg/mL,其余单糖和糖醛酸检出限为1.0μg/mL。该方法重现性好,能够快速地对多糖样品进行组成分析。

碘柱前衍生-高效液相色谱法快速测定粮食中黄曲霉毒素

建立了一种快速检测粮食中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的碘柱前衍生-高效液相色谱法。样品用甲醇＋水（55＋45）提取,提取液用三氯甲烷萃取,萃取液经真空干燥后,加入适量碘衍生剂衍生,衍生后进行色谱分析。四种黄曲霉毒素测定在7 min内完成,检出限均在pg水平。花生和玉米重复性实验（n=8）相对标准偏差（RSD%）分别为4.2%-4.9%和3.2%-6.7%;样品回收率分别为83.5%-97.3%和89.4%-97.6%。