2种HPLC-柱后衍生化-荧光检测法测定远志中黄曲霉毒素的比较

对远志中测定黄曲霉毒素的2种柱后衍生化方法(碘衍生化和光化学衍生化)进行分析比较。样品经过免疫亲和柱净化,HPLC-柱后衍生化-荧光检测器检测;采用C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,荧光检测。柱后衍生化系统:(1)碘衍生化法,以甲醇-乙腈-水(25∶20∶55)为流动相;衍生溶液为0.05%碘溶液,流速为0.3 m L·min^(-1),衍生反应温度为70℃;(2)光化学衍生化法,以甲醇-乙腈-水(35∶15∶50)为流动相。碘衍生化方法中,黄曲霉毒素B_(2)、G_(2)在3.8~19 pg范围内线性关系良好,B_(1)在10.4~52 pg范围内线性关系良好,G_(1)在10.8~54 pg范围内线性关系良好;在光化学衍生化方法中,黄曲霉毒素B_(2)、G_(2)在1.9~45.6 pg范围内线性关系良好,B_(1)在5.2~124.8 pg范围内线性关系良好,G_(1)在5.4~129.6 pg范围内线性关系良好,r>0.9999;回收率在85%~105%之间。2种衍生化方法的测定结果比较接近,但是光化学衍生化方法更加灵敏,且操作简单、分析速度快。

庆大霉素C组分和有关物质测定的HPLC-柱后衍生化法与脉冲安培电化学法的比较研究

目的：参考《欧洲药典》的HPLC-脉冲安培电化学法建立高效液相色谱-柱后衍生化法测定庆大霉素C组分含量及其有关物质,同时与电化学法进行比较研究。方法：采用亲水性Hydrosphere C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以含0.7%三氟乙酸及0.025%五氟丙酸的50 mmol·L-1氢氧化钠溶液（pH 2.6）-乙腈（98.5∶1.5）为流动相。衍生化法反应温度30℃,荧光激发波长340 nm,发射波长430 nm。电化学法采用脉冲安培检测器,金电极为工作电极,四电位波形工作模式。结果：两种方法测定的庆大霉素C组分（C1a,C2,C2a和C1）分别在5.82~233.00,6.92~277.00,4.00~160.00和6.23~249.00μg·ml-1的浓度范围内线性关系良好（r均≥0.999 3）,检测限和定量限范围分别为0.92~3.28 ng和1.37~5.19 ng。结论：两种方法的检测结果无明显差异。

高效液相色谱柱后衍生化法测定饲料中盐霉素

对高效液相色谱柱后衍生化测定饲料中盐霉素的方法作验证研究.采用Cl8反相柱,甲醇—冰乙酸—水为流动相,香草醛为衍生剂.方法检测极限为0.5μg/ml,添加回收率为85.6%,变异系数为4.92%.

柱后衍生化高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸颗粒剂的有关物质及含量

目的:建立采用邻苯二甲醛(O-phthaldialdehyde,OPA)作为柱后衍生试剂的HPLC法测定门冬氨酸鸟氨酸颗粒的有关物质与含量。方法:采用色谱柱Synergi Hydro RP,C18(150 mm×3 mm,4μm),流动相A为0.005 mol/L辛烷磺酸钠溶液-高氯酸(100∶0.16),流动相B为0.01 mol/L辛烷磺酸钠溶液-乙腈-高氯酸(50∶50∶0.16),进行梯度洗脱;检测波长为336 nm。结果:门冬氨酸和鸟氨酸在37.5～112.5μg/ml范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系(门冬氨酸r=0.999 8,鸟氨酸r=0.999 9);门冬氨酸回收率为101.2%,RSD为0.92%(n=9),鸟氨酸回收率为101.0%,RSD为0.97%(n=9);门冬氨酸鸟氨酸主成分峰与3种杂质峰分离度均符合要求,门冬氨酸和鸟氨酸最低检出限均为5ng。结论:该方法方便、快速、灵敏度高、重现性好,适用于测定门冬氨酸鸟氨酸颗粒剂中的有关物质及含量。

柱后衍生化HPLC测定人血浆中总的和游离麦考酚酸及其葡糖苷酸代谢物

目的建立HPLC测定人血浆中总的和游离麦考酚酸(MPA)及其代谢物葡糖苷酸结合物(MPAG)含量的方法。方法游离和总的药物含量测定的预处理方法分别采用超滤法和乙腈蛋白沉淀法。色谱条件:KromasilC8(4.6mm×150mm,5μm);柱温:30℃。流动相:乙腈-0.1%三氟醋酸(55:45,pH2.2),流速:1.2mL·min-1。柱后添加0.2mol·L-1NaOH溶液,流速0.15mL·min-1。MPAG采用紫外检测,检测波长为295nm;MPA采用荧光检测,荧光激发波长342nm,发射波长425nm。结果血浆内源性杂质和常用合并用药对样品测定无干扰,MPA,MPAG的总质量浓度分别在0.1-40和10-250mg·L-1,游离质量浓度分别在0.010-1.0和2.5-100mg·L-1内线性关系良好。MPA,MPAG的日内、日间RSD均小于10%,样品提取后在24h内及3次冻融后稳定性良好。结论本方法简便快速、结果准确可靠,可用于MPA和MPAG的药动学研究及常规的血药浓度监测。

柱后衍生化-HPLC法测定硫酸卡那霉素注射液及滴眼液的含量

目的新建硫酸卡那霉素注射液及滴眼液含量的高效液相色谱-柱后衍生化-荧光检测方法。方法色谱柱为ZorbaxEclipsePlusC18(4.6mm×100mm,3.5μm);流动相为pH3.4的缓冲液(取庚烷磺酸钠一水合物4.35g和无水硫酸钠16g,加水溶解并稀释至成1000mL,用冰醋酸调节pH值至3.4±0.1)-甲醇(74:26);柱温为35℃;流速为1mL/min。柱后衍生化试液为邻苯二甲醛溶液;流速为0.3mL/min;衍生化反应温度为45℃;荧光激发波长为340nm,发射波长为455nm。结果卡那霉素A在0.0973～583.8μg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),硫酸卡那霉素注射液和滴眼液的平均回收率分别为99.6%和99.3%,RSD为0.63%和0.66%(n=9)。结论本方法检测灵敏度高,重复性好,简便快速,结果准确可靠,可作为硫酸卡那霉素注射液及滴眼液的含量测定方法。

柱后衍生化-HPLC法检测硫酸新霉素的有关物质

目的建立硫酸新霉素有关物质检查的柱后衍生化-HPLC-荧光检测法,并与新建的HPLC-电化学检测法进行比较。方法色谱柱为COSMOSIL 5C18-PAQ(4.6mm×250mm,3.5um);以pH3.4缓冲液[取庚烷磺酸钠一水合物4.35g和无水硫酸钠16g,加水溶解并稀释至1000mL,用冰醋酸调节pH值至(3.4±0.1)]-乙脂(95.5)为流动相A,pH3.4缓冲液-乙腈(60:40)为流动相B;梯度洗脱;柱温为30℃;流速为1.0mL/min。柱后衍生化试液为邻苯二甲醛溶液[pH值为(10.4±0.1)1:流速为0.3mL/min。电化学检测法采用脉冲安培检测器,金电极为工作电极,四电位波形工作模式。结果柱后衍生化法与电化学检测法均检出24个杂质。柱后衍生化法的检测限和定量限分别为1.1和3.5ng。结论柱后衍生化-HPLC法操作简便,灵敏度高,重复性好,可作为硫酸新霉素有关物质检查的常规方法。

免疫亲和柱净化-碘柱后衍生化-高效液相色谱荧光法检测斑蝥中黄曲霉毒素及其液质确证

目的：建立高效液相色谱-碘柱后衍生化-荧光检测器检测中药材斑蝥中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量,并采用液质联用法进行确证。方法：样品以70%甲醇溶液提取,经免疫亲和柱净化后,利用碘柱后衍生化-HPLC-FLD进行分析测定。并进一步采用LC-MS/MS对阳性样品进行确证。结果：在优化条件下,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分别在0～0.525、0～0.1125、0～0.1875、0～0.1125μg的范围内线性关系良好,r〉0.9996,回收率82.5%～107.3%,RSD〈8.1%。检测了21批样品并通过LC-MS/MS确证,在与对照品相同的保留时间处,样品与对照品有相同的特征离子碎片,排除了样品假阳性的可能。结论：该方法简便快速,灵敏度高,重复性好,适用于斑蝥中黄曲霉毒素的检测。

中空纤维液相微萃取结合高效液相-柱后衍生化法青蒿素含量测定方法的建立

青蒿素（artemisinin,ART）是一种从菊科植物黄花蒿叶里提取出来的具有内过氧桥的倍半萜内酯类化合物,因其抗疟作用效率高、速度快、毒性低,并且与大部分其他类别的抗疟药无交叉抗性等优点,成为目前全球抗疟的主要药物。但因其结构中不含有共轭基团,故不能够直接用紫外色谱进行含量测定。

2种HPLC-柱后衍生化-荧光检测法测定陈皮中黄曲霉毒素的比较

目的:对陈皮中黄曲霉毒素测定的2种柱后衍生化方法(碘衍生化和电化学衍生化)进行比较。方法:样品经过免疫亲和柱净化,HPLC-柱后衍生化-荧光检测器检测。采用Diamonsil ODS C18(5μm,4.6 mm×200 mm)色谱柱,荧光检测,激发波长360 nm,发射波长450 nm。柱后衍生化系统(1)碘衍生化:以甲醇-乙腈-水(25∶18∶57)为流动相,流速0.8 mL.min-1;衍生化溶液为0.05%碘溶液,流速0.3 mL.min-1,衍生化反应温度70℃;(2)电化学衍生化:以甲醇-乙腈-水(20∶20∶60)为流动相(每1 L流动相中加入溴化钾120 mg和4 mol.L-1硝酸350μL),流速1.0 mL.min-1。结果:碘衍生化,黄曲霉毒素G2、B2在2～36 pg,黄曲霉毒素G1、B1在2～120 pg范围内线性关系良好;电化学衍生化,黄曲霉毒素G2、B2在1.2～36 pg,黄曲霉毒素G1、B1在2～120 pg范围内线性关系良好,r>0.9997;回收率在60%～101%之间。结论:2种衍生化方法的测定结果比较接近,且电化学衍生化方法较灵敏,操作简单、分析速度快,也适用于陈皮中黄曲霉毒素的测定。

柱后衍生化技术及其在药物与食品分析中的应用与进展

柱后衍生化技术是分析化学中常用的一种在线处理技术。该技术为介质中痕量药物的分析和弱紫外吸收物质的分析开辟了广阔的应用前景,并且已经发展为提高传统HPLC法检测水平的一种常用技术。在中药与食品中残留农药检测、氨基酸分析、无机离子分析、生物毒素检测、兽药分析及体内药物分析等领域有着广泛的应用;近年来,共振瑞利散射光谱技术的应用为柱后衍生化技术拓宽了应用范围和发展前景。本文综述了近10年国内外广泛应用的典型的柱后衍生化反应及其在药物与食品分析中的应用,并展望了新技术在药物与食品分析领域的应用前景。

HPLC柱后衍生化法测定前列腺素E_1脂肪乳的含量

目的:建立HPLC柱后衍生化法测定前列腺素E1(PGE1)脂肪乳中PGE1的含量。方法:采用固相萃取技术对样品进行预处理,使用Kromasil C18色谱柱(300 mm×4.6 mm,10μm),流动相为0.01 mol.L-1磷酸盐缓冲液(pH6.3)-乙腈(75∶25),流速1.0 mL.min-1,柱后反应液为1 mol.L-1氢氧化钾溶液,流速0.50 mL.min-1,反应温度为60℃,前列腺素B1(PGB1)为内标,检测波长为280 nm。结果:PGE1浓度在2.4～9μg.mL-1范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)分别为97.2%(RSD=1.4%),98.4%(RSD=0.6%),97.8%(RSD=1.8%)。结论:此方法准确灵敏,可用于PGE1脂肪乳的质量控制。

柱后衍生化高效液相色谱法测定注射用硫酸阿米卡星

目的:建立柱后衍生化高效液相色谱法测定硫酸阿米卡星含量的方法。方法:色谱柱为Waters Sun Fire C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相为含戊烷磺酸钠和冰醋酸的硫酸钠溶液-甲醇(97∶3);柱温25℃,流速1.0mL.min-1。柱后衍生化试液为邻苯二甲醛溶液,流速0.5mL·min-1,衍生化反应温度45℃,荧光激发波长360nm,测定波长440nm。结果:硫酸阿米卡星在2.09～41.81mg·L-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=9)为98.6%。结论:该方法简便快速,结果准确可靠,可用于注射用硫酸阿米卡星的含量测定。

离子色谱柱后衍生化法测定面粉中溴酸盐

目的:建立一种准确测定面粉中溴酸盐的新方法。方法:样品溶解后,采用固相萃取法去除大部分水溶性大分子,通过离子色谱分离,柱后衍生化-紫外检测器法测定溴酸盐。结果:该方法线性好,灵敏度高,专属性强。结论:此方法可满足面粉中痕量溴酸盐检测的要求。

前列地尔乳剂的柱后衍生化HPLC法测定

建立了柱后衍生化-HPLC法测定前列地尔乳剂,采用C18色谱柱,以6.7 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.3)-乙腈(2︰1)为流动相,以β-萘酚为内标,氢氧化钾溶液为衍生化试剂,检测波长278 nm。前列地尔在0.5～10μg/ml浓度范围内线性关系良好,平均回收率为99.3%,RSD为0.53%。

在线柱后衍生-荧光检测-高效液相色谱法测定果蔬中残留氨基甲酸酯农药

提出了具有在线柱后衍生流路及荧光检测器的高效液相色谱法测定了果蔬中6种氨基甲酸酯类农药。果蔬样品经匀浆后用乙腈萃取，经固相萃取柱纯化。用甲醇及二氯甲烷（1＋99）混合溶剂作淋洗剂，淋出液经氮吹蒸干后用甲醇溶解，所得溶液供高效液相色谱分析。采用Carba-mate Analysis柱（3．9mm×150mm，5μm）作为固定相，并用不同比例配制的甲醇和水的溶液作为流动相进行梯度淋洗。在线柱后衍生化系在-反应器中进行，0．05mol．L^-1氢氧化钠溶液及衍生化试剂邻苯二甲醛溶液均以0．5mL·min^-1速率引入于反应器中。采用339nm及445nm分别作为荧光检测的激发波长和发射波长，测得6种农药的线性范围均在0．01～2．5mg·L^-1之间，其检出限（3S／N）在0．5～3．0gg·kg^-1之间。用标准加入法测得方法的回收率在86．4％～103．0％之间。

高效液相色谱法柱后衍生法测定陈皮中黄曲霉毒素

目的考察医院药房中不同批次陈皮饮片中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的含量,为确保陈皮饮片的临床用药安全。方法采用高效液相色谱法（HPLC）-碘柱后衍生化-荧光检测方法测定陈皮样品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的含量,色谱柱为Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-水（40∶18∶42）,流速为0.8 m L/min,荧光检测,激发波长360 nm,发射波长450 nm。柱后碘衍生化系统为衍生溶液为0.05%的碘溶液,流速为0.3 m L/min,衍生化反应器温度为70℃。结果药房现存5批次陈皮样品均未检出黄曲霉毒素;黄曲霉毒素G2,G1,B1,B2进样量分别在1081 085 ng,2172 171 ng,1911 913 ng,64644 ng范围内与峰面积线性关系良好,加样回收率在60%110%之间。结论该方法准确、可靠,可作为陈皮中黄曲霉毒素的含量测定方法。

柱后衍生-离子对反相高效液相色谱法测定不同基质中亚硫酸盐

应用离子对反相高效液相色谱法测定了不同基质样品中亚硫酸盐的含量。不同样品中的亚硫酸根先后用稀盐酸及山梨醇的混合溶液和乙酸钠及山梨醇的混合溶液提取，并离心分离，所得上清液中的亚硫酸根与甲醛反应生成羟甲基磺酸盐（HMS）而使之固定。用VenusilMPC18柱作固定相，并用三乙基辛烷膦酸铵（pH5．O）溶液与甲醇以9比1（体积比）混合所得溶液作流动相对试液进行离子对色谱分离。在柱后衍生系统中，分出的HMs先与氢氧化钾作用而重新释出亚硫酸根阴离子，再与5，5-二巯基-2，2-二硝基苯甲酸进行衍生反应，生成5-巯基-2-硝基-苯甲酸，对此产物在450nm波长处进行分光光度检测，方法的检出限（3S／N）为0．15mg·L-1。用标准加入法进行回收试验，测得回收率在85．9％～105．2％之间。

柱后衍生HPLC法测定牛磺酸滴眼液的含量

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)测定牛磺酸滴眼液的含量。方法:采用邻苯二甲醛(OPA)作为柱后衍生化试剂,以C18色谱柱为分析柱,以磷酸盐缓冲液(pH7.0)-乙腈-水(70∶15∶15)为流动相,柱温为60℃,检测波长为338nm,流速为1.0mL·min-1,按峰面积以外标法计算。结果:牛磺酸在40～400mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.9996),测得平均回收率为98.32%(RSD为0.87%),未衍生样品在20h内的稳定性良好,最低检出量为2ng。结论:本方法简单、快速、专属性强、灵敏度高、重现性好,结果准确可靠。

高效液相色谱柱后衍生法测定饲料中莫能霉素

以香草醛为衍生剂，建立了高效液相色谱柱后衍生化测定饲料中莫能霉素的方法。采用C18反相柱，甲醇－冰乙酸－水为流动相。方法检测限为0．5μg／mL，添加回收率为81．3％～94．3％，变异系数为0．5％～2．1％。