柱前衍生高效液相荧光检测法测定复方氨基酸注射液中甲硫氨酸亚砜的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液中甲硫氨酸亚砜质量分数的高效液相色谱法。方法采用柱前衍生HPLCFLD法,色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18柱(3.0 mm×100 mm,2.7μm)或效能相当的色谱柱,以乙酸钠四氢呋喃溶液为流动相A,乙酸钠溶液-乙腈-甲醇(体积比20∶40∶40)为流动相B,流速为1.0 mL/min,采用荧光检测器,激发波长为233 nm,发射波长为441 nm。结果甲硫氨酸亚砜质量浓度在0.02605~2.605μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9996),检测限为1.3×10^(-3)ng,平均回收率为100.1%,RSD为0.3%。结论建立的方法操作简单、准确、灵敏度高,适用于复方氨基酸注射液中甲硫氨酸亚砜的测定。

柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中的甜蜜素

白酒中甜蜜素(化学名为环己基氨基磺酸钠)是我国食品安全监督抽检计划中的重点关注项目,生产企业亟需简单、经济、灵敏度高而且可靠的检测方法。本研究建立了柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中甜蜜素的方法。在酸性条件下,通过脱磺酸基反应将样品中的环己基氨基磺酸钠转化为氨基化合物,然后加入400 g/L的氢氧化钠溶液中和样品处理液,再加入邻苯二甲醛衍生试剂与样品溶液中的氨基化合物进行反应,产生具有荧光信号的吲哚取代衍生物。以反相C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相进行等度洗脱,荧光检测器检测,外标法定量。结果表明,甜蜜素在0.1~2.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,其相关系数(r^(2))大于0.999。基于白酒样品,在0.1~1.0 mg/kg含量范围内进行3个浓度水平的加标回收试验(n=6),平均回收率为90.7%~100.9%,相对标准偏差为3.5%~5.6%,方法的检出限为0.03 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg。应用本方法对市售9种白酒样品进行检测,结果与GB 5009.97-2016(第三法)液相色谱-串联质谱法所得结果一致。本方法具有成本低、灵敏度高、专属性强、定量结果准确的特点,适用于大批量白酒中甜蜜素的定量检测,可为生产企业或相关机构进行白酒中甜蜜素的日常监测提供有力的技术支持。

AQC柱前衍生高效液相色谱方法测定康复新液中游离氨基酸和总肽的含量

目的应用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生化技术,建立康复新液中游离氨基酸和总肽的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法,并以总肽含量为指标对市售样品进行检测。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5 C18色谱柱);60%乙腈(A)-0.14 mol·L^(-1)三水合乙酸钠溶液,用磷酸调节pH值至5.0(B)为流动相,梯度洗脱;柱温:39℃;流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:248 nm。结果14种氨基酸均能达到良好的分离效果;门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸分别在2.0~99.7、3.4~168.5、2.8~139.6、4.0~201.4、4.8~238.1、6.7~336.9、3.3~167.5、9.7~487.3、4.1~202.5、4.4~221.6、5.4~270.5、3.3~166.8、4.8~240.8、4.7~236.6μg·mL^(-1)范围内呈现良好的线性关系(r=0.9995~1.0000);游离氨基酸的平均加样回收率(n=6)为86.8%~108.1%,RSD为2.8%~4.4%,总肽酸水解氨基酸的平均加样回收率(n=6)为83.2%~102.7%,RSD为0.1%~3.1%;仪器精密度、重复性、稳定性实验的RSD均小于5.0%。结论该方法与现行质量标准的紫外分光光度法比较,二者测定的总氨基酸含量结果基本一致,但前者的专属性、重现性更优;以具有生物活性的总肽为质控指标,针对性更强,可为康复新液的质量评价提供更科学、合理的方法。

柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量及营养价值评价

建立柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量,采用氨基酸比值系数法评价其营养价值。采用盐酸水解法制得巴戟天氨基酸供试品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺为柱前衍生化试剂,采用高效液相色谱法,使用Ultimate Amino Acid色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)以0.1 mol/L无水乙酸钠-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长为254 nm,测定氨基酸含量;通过氨基酸比值、氨基酸比值系数、氨基酸比值系数分等评价其营养价值,并采用系统聚类和主成分分析对其进行分类分析。结果表明,15种氨基酸线性关系良好,相关系数r≥0.9996。16份巴戟天氨基酸总含量为17.87~102.15 mg/g,均检测到15种氨基酸,其中包含6种必需氨基酸,占总氨基酸含量的14.15%~32.06%;8种药用氨基酸,占总氨基酸含量的45.20%~56.31%。限制氨基酸为苏氨酸和亮氨酸,氨基酸比值系数分为33.87~61.31。不同巴戟天样品氨基酸组成相关性显著;主成分分析提取2个主成分,累计方差贡献率为97.085%,可将16批巴戟天分为三类。该实验测定方法简单有效,可同时分离测定15种氨基酸,精密度与重复性良好,有较高的药用价值,可为巴戟天的品质分析和资源开发利用提供参考。

柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中16种氨基酸的含量

提出了2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生-高效液相色谱法测定化妆品中甘氨酸、亮氨酸、组氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、异亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸等16种氨基酸含量的方法。取化妆品样品5 g置于50 mL离心管中,加入5 mL水,超声10 min,加热煮沸15 min,冷却后加入15 mL 35 g·L^(−1)磺基水杨酸溶液,以转速10500 r·min^(−1)离心20 min。取全部上清液,用35 g·L^(−1)磺基水杨酸溶液定容至25 mL。取1 mL样品溶液,加入0.5 mol·L^(−1)碳酸氢钠溶液(pH 9.0)1 mL和1%(体积分数)DNFB衍生溶液1 mL,混匀,于60℃加热10 min,冷却后用0.01 mol·L^(−1)磷酸二氢钾溶液(pH 7.0)定容至5 mL,所得溶液中16种氨基酸经X Bridge C_(18)色谱柱分离,以不同体积比的含1%(体积分数)N,N-二甲基甲酰胺的0.05 mol·L^(−1)乙酸钠缓冲液(pH 6.5)-体积比1∶1的乙腈-水混合溶液为流动相进行梯度洗脱,在360 nm处检测。结果表明:16种氨基酸标准曲线的线性范围均为0.004~40.0 mg·L^(−1),检出限(3S/N)为0.1~0.2 mg·kg^(−1);对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为89.0%~105%,测定值的相对标准偏差(n=7)均不大于10%。方法用于11种市售化妆品分析,检出的氨基酸成分多为组氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸。

柱前衍生-高效液相色谱法测定鱼类中组胺

建立测定鱼类中组胺含量的柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)联合紫外检测分析方法。样品均质后先用三氯乙酸水溶液震荡超声提取,再用丹磺酰氯衍生,采用HPLC-紫外检测器在254 nm处对组胺衍生物进行检测,以色谱峰面积外标法定量。组胺的质量浓度在1.0~50.0μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9997,方法检出限为7.2μg/kg,定量限为24μg/kg。样品加标回收率为96.8%~99.2%,测定结果的相对标准偏差为1.6%~3.7%(n=6)。该方法快速准确、灵敏度高、重复性好,可用于鱼类产品中组胺的定量分析。

免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定植物油中黄曲霉毒素B_1的含量

建立了免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定植物油中黄曲霉毒素B1含量的方法，并对样品的测定条件进行了优化。结果表明：植物油的称样量缩减为5．00 g，黄曲霉毒素B1测定结果与GB/T 18979-2003测定结果基本吻合；工作曲线在1-40 ng/mL质量浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数为0．9999，方法检出限为0．3μg/kg；在空白样品中添加低、中、高3个不同添加量水平的黄曲霉毒素B1标准品，其回收率在90．5%-99．8%之间，相对标准偏差在6．3%-9．8%之间。采用光化学衍生，操作简单，无需衍生剂，避免了柱前衍生和柱后衍生受衍生剂浓度、温度、反应时间的影响，所建立的方法适用于植物油中黄曲霉毒素B1含量的测定。

柱前衍生-固相萃取-高效液相色谱荧光法测定蔬菜中草甘膦

目的建立快速、准确的蔬菜中草甘膦的柱前衍生-固相萃取-高效液相色谱荧光测定方法。方法蔬菜提取液样经衍生后经固相萃取,过C（18）色谱柱,以甲醇-水（70：30,V：V）为流动相,流速1.0 mL/min,柱温为35℃,荧光检测激发波长为265 nm,发射波长为3 15 nm。结果草甘膦的加标回收率在89.2%~99.2%范围,其相对标准偏差均〈5.0%,在0.5~20.0 ng/mL范围呈现良好的线性,其回归系数〉0.999,最低定量检出限（LOQ）为0.02 mg/kg。结论本方法回收率高,净化效果好,杂质干扰少,可满足蔬菜中痕量草甘膦的残留检测要求。

高效液相柱前衍生化法和高效液相荧光法测定栀子厚朴汤4种生物碱的比较

目的建立高效液相柱前衍生化法和高效液相荧光法测定栀子厚朴汤中4个生物碱,并比较两种方法优缺点。方法①高效液相柱前衍生化法:采用色谱柱Lichrospher C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(57:43)为流动相;流速:1.0mL·min^(-1);紫外检测器:257nm。②高效液相荧光法:采用色谱柱Lichrosμher C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),以[10mM己烷磺酸钠用磷酸调节pH至2.5]-甲醇(85:15)为流动相;流速为1.0mL·min^(-1);荧光检测器:激发波长为281nm;发射波长为302nm。结果①高效液相柱前衍生化法:4个生物碱的线性范围为0.05～5μg·mL^(-1)(r≥0.9994),平均回收率在96.2%～98.8%之间(RSD≤3.4%)。②高效液相荧光法:4个生物碱的线性范围为0.025～1μg·mL^(-1)(r≥0.9998),平均回收率在100.0%～101.4%之间(RSD≤3.0%)。两种方法比较:从方法准确性、专属性、系统适应性、样品处理、峰面积的响应、检测限和定量限、流动相和色谱分离角度进行全面评价。结论两种方法准确、专属、灵敏,可用于栀子厚朴汤中4个生物碱的含量测定。与高效液相柱前衍生化法相比,高效液相荧光法更简单,灵敏度更高。

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定硫普罗宁片含量

目的:建立了柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定硫普罗宁片含量。方法:供试品经 N-(1-芘)马来酰亚胺(NPM)衍生化后,采用 Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为水(含0.02%磷酸和0.8%冰乙酸)-乙腈(52:48),pH=3.0;流速0.8 mL·min^(-1),在λ_(ex)=330 nm,λ_(em)=380 nm 处荧光检测。结果:硫普罗宁在5.0～50.0μg·mL^(-1)浓度范围内与其衍生化主产物峰面积呈良好的线性关系,r=0.9993,平均回收率为99.5%(RSD=1.0%)。结论:该法准确可靠,专属性强,能满足制剂质量控制的要求。

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定大鼠血浆中硫普罗宁

建立了测定大鼠血浆中硫普罗宁含量的柱前衍生-高效液相色谱荧光法。血浆样品经二硫苏糖醇（DTT）还原后，再经N-（1-芘）马来酰亚胺（NPM）衍生化后进样测定。以0．2％乙酸（含0．015 mol·L^-1磷酸二氢钾）-乙腈（56：44）为流动相，采用Kromasil C18色谱柱分离，在λex=340nm，λem=375nm下荧光检测。硫普罗宁线性范围为0．1～10．0μg·mL^-1，定量下限为0．1mg·L^-1，日内、日间精密度（RSD）分别为5．3％～10．8％和7．0％～10．8％，提取回收率在73．7％～79．7％。大鼠单剂量给予硫普罗宁后，药代动力学行为符合二室模型。该法准确可靠，专属性强，适用于硫普罗宁的药代动力学研究。

免疫亲和柱净化-碘柱后衍生化-高效液相色谱荧光法检测斑蝥中黄曲霉毒素及其液质确证

目的：建立高效液相色谱-碘柱后衍生化-荧光检测器检测中药材斑蝥中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量,并采用液质联用法进行确证。方法：样品以70%甲醇溶液提取,经免疫亲和柱净化后,利用碘柱后衍生化-HPLC-FLD进行分析测定。并进一步采用LC-MS/MS对阳性样品进行确证。结果：在优化条件下,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分别在0～0.525、0～0.1125、0～0.1875、0～0.1125μg的范围内线性关系良好,r〉0.9996,回收率82.5%～107.3%,RSD〈8.1%。检测了21批样品并通过LC-MS/MS确证,在与对照品相同的保留时间处,样品与对照品有相同的特征离子碎片,排除了样品假阳性的可能。结论：该方法简便快速,灵敏度高,重复性好,适用于斑蝥中黄曲霉毒素的检测。

混合分散固相萃取联合柱前衍生高效液相色谱法测定蜂蜜中草甘膦残留

建立蜂蜜样品中强极性农药草甘膦的多壁碳纳米管(MWCNTs)和十八烷基硅烷键合硅胶(C18)混合分散固相萃取联合柱前试剂衍生的高效液相色谱测定方法。蜂蜜样品经水溶解后,震荡超声提取草甘膦,提取液先经60 mgMWCNTs和120mgC18混合分散固相吸附剂吸附净化,然后用1.0mg/mL9-芴基氯甲酸酯乙腈溶液进行柱前试剂衍生。目标组分经色谱柱分离后采用荧光检测器检测。草甘膦的质量浓度在0.005~5.00μg/mL范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系,相关系数为0.9999,方法检出限为0.025 mg/kg。样品加标回收率为78.1%~92.3%,测定结果的相对标准偏差为2.8%~8.4%(n=6)。该方法可为食品卫生监管部门提供技术参考。

柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法测定水中草铵膦

采用柱前衍生结合高效液相色谱-荧光法建立了水中草铵膦的检测方法。水样在四硼酸钠缓冲盐体系中与氯甲酸-9-芴基甲酯进行衍生化反应,衍生产物在Waters AtlantisT3色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm)上进行色谱分离。试验结果表明,该方法的检出限为0.000 370 mg·kg-1,定量限为0.001 23 mg·kg-1,在0.002 00~0.200 00 mg·L-1,草铵膦具有良好的线性关系(R2=0.999 9)。在0.003 00、0.300和30.0 mg·kg-1添加水平下,草铵膦的平均回收率为88.0%~103.0%,相对标准偏差(n=5)为0.73%~2.14%。该方法前处理简单,回收率和精密度均符合农药残留检测技术的要求,适合水中草铵膦的检测。

柱前衍生-高效液相色谱-荧光法测定乳制品中左旋肉碱含量

本文研究了柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)-荧光检测技术测定乳制品中左旋肉碱(L-肉碱)含量的分析方法。经优化后的前处理条件为:提取液采用10%(V/V)甲醇水溶液(经磷酸调节pH至2.7～2.8),经超声提取20 min过滤后调节pH至6.0,取一定滤液加热浓缩近干,用20 mL乙醇溶解。经重复两次高速离心(12000 r/min、5 min)、旋转蒸发浓缩后,残留物用乙醇溶解,以L-丙酰胺-β-萘胺为衍生化试剂于50℃恒温衍生5 min后终止反应,于激发波长280 nm、发射波长328 nm下经HPLC分析测定。乳粉检出限为4.0 mg/kg,液体乳检出限0.5 mg/kg、0.2～20.0 mg/L范围内线性关系良好,相关系数0.9990,平均回收率为80～90%,相对标准偏差RSD小于10%。同时,利用该方法对不同配方奶粉及液体乳中L-肉碱进行了含量测定。该方法灵敏度高,准确性好,适用于乳制品中L-肉碱的含量测定。

免疫亲和柱净化-光化学柱后衍生高效液相色谱荧光法测定粮食中黄曲霉毒素

建立了粮食中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的免疫亲和柱净化-光化学柱后衍生高效液相色谱荧光检测法。样品经甲醇-水提取,免疫亲和柱净化,高效液相色谱分离,光化学柱后衍生,荧光检测器测定。结果表明,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检出限分别为0.50、0.25、0.50、0.25μg/kg,回收率为67.2%～91.7%,RSD小于10%。该方法快速、准确、灵敏度高、重现性好,能满足我国对粮食中黄曲霉毒素限量的检测要求。

高效液相色谱-柱后衍生荧光法同时检测粮食中8种氨基甲酸酯类农药

建立了高效液相色谱-柱后衍生荧光法同时检测粮食中8种氨基甲酸酯类农药,样品经乙腈提取,SPE-NH 2小柱净化,减压旋转蒸发浓缩后定容.检测系统为柱后光化学衍生器串联荧光检测器,激发波长330 nm,发射波长465 nm.外标法定量,方法的线性范围为0.01~1.00 mg·L^(-1),检出限(3S/N)为3~5μg·kg^(-1),用该方法检测大米、小麦和玉米等试样,加标回收率介于77.9%~106.3%,相对标准偏差不大于6.7%(n=6).

高效液相色谱柱后衍生荧光法测定柑橘中8种氨基甲酸酯类农药残留

建立了固相萃取—高效液相色谱柱后衍生荧光法检测柑橘中8种氨基甲酸酯类农药残留,样品经乙腈均质提取,SPE-NH2小柱净化,Waters XBridge C18液相色谱柱分离,以甲醇、水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用光化学衍生器串联荧光检测器进行检测,激发波长330nm,发射波长465nm。以外标法定量,在0.010~1.0mg/L浓度范围内,8种农药均具有良好的线性相关性(r>0.999 3),定量限为0.010mg/kg。采用空白基质加标,在0.010、0.020和0.50mg/kg 3种加标水平下,平均添加回收率为82.3%~105.1%,相对标准偏差(RSD)为2.7%~6.2%。

免疫亲和柱净化/柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测法测定粮谷中的T-2毒素

建立了免疫亲和柱净化／柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测器测定粮谷中T-2毒素含量的方法。样品经甲醇-水（体积比为80：20）混合溶剂提取，通过免疫亲和柱（IAC）净化，以氰酸蒽（1-AN）为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶（DMAP）为催化剂进行衍生，以ZORBAX Eclipse XDB-C18柱为分离柱，乙腈-水（体积比为80：20）为流动相进行高效液相色谱分离及荧光检测，荧光检测的激发波长为381nm，发射波长为470nm。T-2毒素的质量浓度为0．01～1．5mg／L时与峰高呈良好的线性，相关系数为0．9985。在0．01～1．5μg／g添加水平下，回收率为79．7％～94．5％，相对标准偏差小于7％；检出限（S/N=3）为0．01μg／g。该方法净化效果好，灵敏度高，操作简便快速。

PSA分散固相萃取液相色谱柱后衍生荧光法测定蔬菜和水果中的13种氨基甲酸酯

建立了PSA分散固相萃取净化,液相色谱柱后衍生荧光法测定蔬菜和水果中13种氨基甲酸酯农药的分析方法。在建立的测定条件下,13种氨基甲酸酯的含量与峰面积之间成线性关系,相关系数大于0.994,保留时间的相对标准偏差在0.03%-0.22%之间,检测下限在2.00-2.28μg/kg范围内。西瓜、杏、茄子及胡萝卜中13种氨基甲酸酯的平均回收率在71.7%-110%之间,相对标准偏差在0.68%-15%之间,分析结果优于氨基柱固相萃取法。