节球藻和柱胞藻毒素免疫分析的前处理方法研究

采用固相萃取前处理技术和酶联免疫吸附(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assays,ELISAs)检测技术,研究了水样中节球藻和柱胞藻毒素的免疫前处理方法.由于两种藻毒素极性差异较大,分别对水样中节球藻和柱胞藻毒素采用不同的前处理方法,具体如下.①节球藻毒素:先后用10 mL甲醇和10 mL纯水活化C18柱,以3～4 mL/min的速度上样后用10 mL纯水淋洗,再用12 mL甲醇洗脱节球藻毒素,氮气吹干后纯水定容至1 mL待测.②柱胞藻毒素:先后用10 mL甲醇和10 mL纯水活化碳黑固相萃取柱,以2～3 mL/min的速度上样后用10 mL甲醇淋洗,再用12 mL含0.1%三氟乙酸的甲醇洗脱柱胞藻毒素,氮气吹干后用0.1%氨水定容至1 mL待测.结果表明,这两种前处理方法对节球藻与柱胞藻毒素的ElISAs检测能保证有较好的回收率,加标回收率可分别达到99.4%和77%.

柱胞藻毒素研究进展

柱胞藻毒素(CYN)是由淡水蓝藻产生的一种细胞毒素,现被列为世界上重要的藻毒素之一。该毒素分子结构稳定,其毒性主要抑制蛋白质和谷胱甘肽的合成,本文综述了CYN的特性、检测及其去除方法。

超高效液相色谱-串联质谱测定水中的拟柱胞藻毒素

拟柱胞藻毒素属于一种具有细胞毒性的生物碱藻毒素。水样经1～3次冻融后,用Waters超高效液相色谱-串联质谱(UPLC/MS/MS)直接测定水中的拟柱胞藻毒素,并以416.1>194 m/z特征离子进行定量。由低浓度实验数据的3倍标准偏差得出方法检出限为0.5 ng/mL。实验结果表明,在5.0～30.0 ng/mL浓度范围内,串联质谱响应值(峰面积)和浓度的线性方程为A=53.2c+3.6(相关系数r=0.9986)。样品加标(10 ng/mL)平均回收率为93.6%,相对标准偏差为4.2%。利用本文所建立的方法对以蓝藻为优势种的水样进行了测定。检测结果显示在拟柱胞藻占一定比例的样品中均检测到拟柱胞藻毒素,最高含量达到1.8 ng/mL。

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测水中的3种蓝藻毒素

建立了超高效液相色谱-串联质谱测定水中石房蛤毒素(STX)、拟柱胞藻毒素(CYN)、鱼腥藻毒素(AnTX)3种蓝藻毒素的分析方法。通过考察色谱柱、流动相和梯度洗脱程序对分离的影响,获得了最佳的色谱、质谱条件。结果表明:采用HSS T3柱,以甲酸水溶液(0.1%)和乙腈为流动相梯度洗脱,3种目标物可获得有效分离。STX、CYN、AnTX的方法检出限(LOD)为0.018、0.009、0.013μg/L,相关系数(r)均大于0.999,方法在0.50μg/L加标水平的回收率为102%~104%,相对标准偏差为1.7%~5.2%。该方法灵敏、准确、简便、快速,适用于水体中3种低浓度蓝藻毒素的同时检测。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定地表水中9种藻毒素

采用超高效液相色谱-串联质谱法快速测定地表水中9种藻毒素的含量。地表水样经滤网过滤,离心后,所得上清液以Waters Acquity BEH130色谱柱为分离柱,以不同体积比的0.1%(体积分数,下同)甲酸溶液和含0.1%甲酸的乙腈的混合液为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾正离子源和多反应监测模式。9种藻毒素的质量浓度在一定范围内与其对应的峰面积呈线性关系,方法的检出限为0.084～0.175μg·L^(-1)。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为79.4%～113%,测定值的相对标准偏差(n=7)为5.1%～14%。

超高效液相色谱-串联质谱测定水中10种藻毒素

采用超高效液相色谱-串联质谱法快速测定水中10种藻毒素的含量.水样经过聚四氟乙烯亲水滤膜过滤后,采用BEH C18柱(1.7μm,2.1 mm×100 mm)分离,以超高效液相色谱-电喷雾离子源正离子多反映模式进行检测,外标法定量.10种目标物在0—50μg·L-1浓度范围内线性相关系数在0.99以上,方法检出限为0.08—0.33μg·L-1,在1、10、20μg·L-1的3个水平添加浓度时,其平均回收率在71.32%—114.59%,相对标准偏差为0.77%—9.76%.

福建石兜水库产毒拉氏尖头藻(Raphidiopsis raciborskii)遗传多样性

近几十年以来,全球内陆深水水体拉氏尖头藻(Raphidiopsis raciborskii)的检出率和水华事件日益增多,这种新型水华蓝藻具有产毒和无毒株系,其中能合成拟柱胞藻毒素(cylindrospermopsins,CYNs)的株系主要分布在澳大利亚和东南亚,严重威胁水生态系统和人类健康。本研究于2018年从福建省厦门市石兜水库分离、培养了4株拉氏尖头藻(XM1~XM4),对其形态、遗传多样性和产毒特征进行了研究。显微观察结果表明,4株拉氏尖头藻形态特征基本一致,细胞平均长度为3.79~4.26μm,藻丝体呈直线型、平均长度为122~199μm,在环境样品中可观察到异形胞(固氮细胞),使用富含氮的BG11培养基培养后异形胞会消失。酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测定显示,4株拉氏尖头藻均为产毒藻株;液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析表明,4个藻株能同时合成CYN和脱氧拟柱胞藻毒素(deoxy-CYN),其中XM1、XM2和XM3藻株以CYN为主,在对数生长后期平均浓度为0.71~1.02 pg·cell^(-1),XM4则以deoxy-CYN为主,平均浓度为0.42 pg·cell^(-1)。16S rRNA基因系统发育分析表明,XM2藻株与非洲藻株同源相似性较高,其他3株(XM1、XM3和XM4)与亚洲、欧洲的藻株同源相似性较高,表明石兜水库拉氏尖头藻种群遗传多样性较高。序列分析发现,XM2藻株具有完整的产CYN基因簇,但是部分关键基因发生了重排变异,cyrB和cyrI基因分别被分割成2部分和3部分,XM2藻株与浙江杭州藻株产毒基因簇最为相似。在气候变化和人类活动多重影响下,我国水源地水库产毒拉氏尖头藻的来源、传播扩散、遗传分化和生态效应有待进一步研究。