柴油废气颗粒体外对鼻息肉组织单个细胞炎性因子释放的影响

目的观察柴油废气颗粒(diesel exhaust particle,DEP)体外对慢性鼻窦炎合并鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者鼻息肉(nasal polyps,NP)组织炎性因子生成的影响。方法收集CRSwNP患者NP组织,制备NP组织单个细胞,体外分别用25、50和100μg/ml DEP刺激,24 h后检测细胞活性和细胞培养上清中Th1细胞(IL-12p70、IFN-γ),Th2细胞(IL-4、IL-5、IL-13)和Th17细胞(IL-17、IL-1β、TNF-α)的浓度。结果与未刺激组相比,50μg/ml和100μg/ml DEP刺激组中IFN-γ、IL-4、IL-13、IL-1β和TNF-α浓度均显著降低,100μg/ml DEP刺激组中IL-5和IL-17显著降低。活细胞百分比和IL-12p70的浓度在各组间没有显著差异。结论DEP能抑制NP组织单个细胞多种炎性因子的生成,而且这种抑制作用与细胞毒性无关。

柴油废气颗粒对哮喘大鼠气道趋化因子Eotaxin表达的影响

目的分析空气污染物的柴油废气颗粒(DEP)吸入对哮喘模型大鼠的气道嗜酸粒细胞趋化因子表达的影响。方法以SD雄性大鼠为实验动物,利用卵白蛋白(OVA)制备哮喘模型,之后再给予雾化吸入DEP各1、2及3周。每只大鼠均于最后一次吸入结束后次日处死,取支气管组织和肺泡灌洗液,ELISA法和定量PCR分别检测CCL11、CCL24、CCL26的基因和蛋白表达水平。结果随着DEP吸入时间的延长,CCL24和CCL26的基因和蛋白表达均逐渐上升,与对照组相比差异有统计学意义。而CCL11的基因和蛋白表达在DEP吸入后无明显变化。结论柴油DEP吸入加重哮喘大鼠的气道高反应性,与DEP刺激CCL24和CCL26趋化因子表达部分相关。

RTCA与CCK-8法用于检测柴油废气颗粒物致支气管上皮细胞毒性的比较研究

运用实时无标记细胞分析系统(RTCA)和Cell Counting Kit-8(CCK-8)法分别检测柴油废气颗粒物(DEP)致支气管上皮细胞(HBE)细胞毒性,从而对2种方法进行比较研究。分别以浓度为0、3.5、7、14、28和56 mg·L^(-1)2种柴油废气标准参考颗粒物(Standard Reference Material 1650b,SRM 1650b;Standard Reference Material 2975,SRM 2975)对HBE细胞进行暴露处理,分别暴露6、12、24和48 h后,检测不同DEP致HBE细胞毒性,比较各组之间细胞存活率或标准化细胞指数(normalized cell index,NCI)值的差异,考察2种方法的优缺点。并用细胞凋亡实验检测各差异组之间的凋亡率。在相同染毒浓度及暴露时间,与SRM 1650b相比,SRM 2975对HBE细胞的毒性更强。在RTCA检测DEP致HBE细胞毒性时,低浓度DEP组的NCI值已经表现出与对照组有统计学差异(P<0.05),而相同时间条件下,CCK-8法在更高浓度的DEP组才检测出显著的细胞活性下降(P<0.05)。且由细胞凋亡实验证实,与对照组相比,低浓度DEP组的细胞凋亡率已经有统计学差异。相对于CCK-8法,RTCA更适用于检测DEP致贴壁HBE细胞毒性。CCK-8法更适用于检测DEP致悬浮细胞的细胞毒性或与气液暴露装置联用时的贴壁/悬浮细胞毒性。

柴油废气颗粒对大鼠气道反应性及免疫指标影响

目的探讨空气污染物中柴油废气课粒(diesel exhaust particle,DEP)吸入对哮喘模型大鼠的气道反应性和免疫学指标的影响。方法选择Wistar大鼠60只,随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、实验组(C组、D组、E组、F组),每组各10只。每只大鼠染毒结束后次日处死,并测定每只大鼠气道阻力(RL)30min的变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清IgE和肺组织中白介素-5(IL-5)和γ-干扰素(IFN-γ)浓度的变化。结果抗原激发后,B组的气道阻力(7.069±0.632)比A组(3.567±0.211)明显增高;E、F组的气道阻力(8.879±0.616),(11.009±0.693)比B组(7.069±0.632)明显增高(F=156.187,P<0.01);气道阻力增高与DEP吸入时间呈相关性(r=0.948,P<0.01);B组血清中IgE(25.003±1.172)的浓度较A组(20.242±2.143)明显增加(F=2.490,P<0.01);C、E组肺组织中IL-5浓度(17.078±5.235),(18.618±4.228)较B组(12.788±2.827)明显增高(F=4.263,P<0.01);而肺组织中IFN-γ浓度在各组之间比较差异均无统计学意义(F=1.193,P>0.05)。结论柴油废气颗粒吸入可加重哮喘大鼠的气道高反应性,促进血清IgE介导及肺组织中IL-5分泌增加的气道炎症反应。

柴油废气颗粒对大鼠气道反应性及肺部病理改变影响

目的探讨空气污染物中柴油废气颗粒(DEP)的吸入对哮喘模型大鼠的气道反应性和肺部病理改变的影响。方法选择Wistar大鼠60只随机分为A组为正常对照组;B组为哮喘模型组,利用卵清白蛋白(OVA)制备哮喘模型;C、D、E、F组于第1天开始用OVA攻击(方法与B组相同),之后再给予吸入DEP各1、2、3、4周。每只大鼠均于最后一次雾化结束后次日处死,并测定每只大鼠气道阻力(RL)30min的变化,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞的百分比和肺组织病理形态学改变,采用酶联免疫吸附试验法测定血清中总IgE的浓度变化。结果抗原激发后B组RL比A组增高,E、F组的RL比B组明显增高,之间比较差异有统计学意义(F=156.186,P<0.01),RL的增高与DEP吸入时间呈显著正相关(r=0.948,P<0.01);血清中总IgE的浓度在B组较A组明显增加,之间比较差异有统计学意义(F=2.490,P<0.01);C、D、E、F组BALF中嗜酸性粒细胞占细胞总数的百分比(EOS%)逐渐增高,与B组比较差异有统计学意义(F=23.240,P<0.01),实验组BALF中中性粒细胞的浸润逐渐增多,E、F组BALF中的中性粒细胞数占细胞总数的百分比较B组明显增高,与之比较差异有统计学意义(F=36.329,P<0.01);肺组织病理切片中可以看到A组上皮细胞完整,气道周围未见炎症细胞的浸润,以纤毛柱状上皮细胞为主,仅有少量的杯状细胞,基底膜未见纤维化,实验组随着DEP的1、2、3、4周的吸入,逐渐出现上皮细胞的减少、中断、脱落,杯状细胞大量增生,气道周围的炎症细胞的浸润及基底膜的纤维化等改变。结论柴油DEP的吸入可加重哮喘大鼠的气道高反应性和肺部的炎症反应。

柴油废气颗粒物诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particles,DEP)对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响,为探讨DEP对血脑屏障的损伤作用机制提供线索。方法小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)分别用不同浓度的DEP(0、12.5、25、50和100μg/ml)处理24和48 h;用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Bcl-2、Bax和Caspase-3基因表达水平,Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果分别用不同浓度DEP处理bEnd.3细胞培养24和48 h后,其中0、12.5、25、50和100μg/ml剂量组的细胞活力、细胞凋亡数量各剂量组与对照组相比,细胞活力呈下降趋势,且细胞早期凋亡数量呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,12.5、25、50和100μg/ml DEP剂量组处理24和48 h后,Bcl-2 mRNA呈下降趋势,Bax、Caspase-3 mRNA呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,24和48 h 12.5、25、50和100μg/ml DEP剂量组处理24和48 h后,Bcl-2蛋白呈下降趋势,Bax、Caspase-3蛋白呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEP可能通过诱导小鼠脑微血管内皮凋亡,从而对血脑屏障产生损伤作用。

柴油机废气颗粒潜在致癌作用机制及其细胞毒性观察

目的通过柴油机废气颗粒(DEP)作用于正常支气管上皮细胞(HBE),从表皮生长耐受体(EGFR)、磷酸肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的变化探讨柴油机颗粒潜在致癌机制及对细胞毒性影响。方法将DEP以0、50、100、200、400μg/mL加入待测HBE细胞中,用Western blot检测EGFR表达量的变化,从中选择对HBE细胞影响最大的浓度作为研究对象实验组。Western blot检测DEP处理后实验组及空白对照组HBE细胞内EGFR、PI3K、AKT及p-AKT的变化。DEP对细胞毒性的检测,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。结果加入浓度为100μg/mL的DEP处理后,HBE细胞中EGFR表达量明显高于其他浓度组(P均<0.05);Western blot表明,实验组HBE细胞PI3K、AKT及p-AKT的表达量较空白对照组显著上升(P均<0.05),细胞毒性结果显示,与空白对照组比较,实验组HBE细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.01),凋亡率增加(P<0.01),侵袭能力下降。结论 DEP存在确切的细胞毒性,EGFR表达增加可能在DEP导致肺癌变的过程中起到重要作用,其作用机制可能与激活下游PI3K/AKT通路有关。

柴油废气颗粒物通过氧化损伤和炎症反应诱导血脑屏障损伤的体外实验研究

目的探讨柴油废气颗粒物(diesel exhaust particulates,DEP)是否通过氧化损伤和炎症反应导致血脑屏障损伤。方法用小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3细胞系构建血脑屏障体外模型,按照DEP染毒浓度不同将细胞分为对照组(0μg/mL)和实验组(DEP浓度为12.5、25、50、100μg/mL),染毒48 h后,检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎性细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌水平。Western blot检测紧密连接蛋白claudin-5和ZO-1的表达。结果bEnd.3细胞经不同浓度DEP染毒48 h后,100μg/mL浓度组与对照组相比,GSH-Px活力显著下降,差异具有统计学意义[(15.51±2.22)U/mg protein比(23.22±3.27)U/mg protein,q=4.741,P<0.05];活性氧含量升高,差异具有统计学意义;[(1.28±0.03)比(1.00±0.00),q=12.400,P<0.05];IL-1β分泌水平显著增加,25,50和100μg/mL浓度组与对照组相比差异具有统计学意义[(3.74±0.36)ng/L,(3.20±0.37)ng/L,(3.26±0.33)ng/L比(1.76±0.09)ng/L,q值分别为6.708、5.982、6.216,P值均<0.05];IL-6分泌水平显著增加,100μg/mL浓度组与对照组相比差异具有统计学意义[(57.79±4.20)ng/L比(20.31±1.12)ng/L,q=15.000,P<0.05];TNF-α分泌水平显著增加,50μg/mL和100μg/mL浓度组与对照组相比,差异具有统计学意义,[(20.88±4.77)ng/L,(24.41±6.53)ng/L比(7.54±2.81)ng/L,q值分别为4.715、5.962,P<0.05];claudin-5表达水平显著下降,12.5,25和100μg/mL浓度组与对照组相比,差异具有统计学意义[(0.87±0.16)、(0.92±0.17)、(0.37±0.12)比(1.24±0.11),q值分别为5.551、5.152、11.280,P<0.05];ZO-1表达水平显著下降,25、50和100μg/mL浓度组与对照组相比,差异具有统计学意义[(0.46±0.06)、(0.39±0.08)、(0.30±0.05)比(1.06±0.13),q值分别为6.724、7.572、8.470,P<0.05]。结论DEP可能通过氧化损伤和炎症反应,导致紧密连接蛋白表达降低进而造成血脑屏障损伤。

分散在模拟肺表面活性物质中的柴油机废气颗粒对V^（79）细胞DNA非程序合成（UDS）的诱导作用

分散在模拟肺表面活性物质中的柴油机废气颗粒对Ｖ^（７９）细胞ＤＮＡ非程序合成（ＵＤＳ）的诱导作用柴油机废气的致癌作用受到重视。本文报告了按美国柴油机联邦试验程序测试柴油机发生的柴油机废气颗粒（ＤＥＰ）的遗传毒性研究结果。实验将ＤＥＰ悬浮于二棕榈酰卵磷?..