柴胡人参药对通过调控胆汁酸代谢防治非酒精性脂肪肝的研究

目的观察柴胡人参药对对大鼠肝脏胆汁酸代谢的影响,探讨柴胡人参药对通过调控胆汁酸代谢防治非酒精性脂肪肝的机制。方法32只SPF级Wistar雄性大鼠,根据体质量随机分成4组:空白对照组(C)、模型组(M)、柴胡人参药对组(BG)、阳性对照药奥贝胆酸组(OCA),每组各8只。除空白组给以普通饲料外,余各组给以高脂高糖饲料8周制备NAFLD大鼠模型。造模成功后分别连续给予生理盐水、柴胡人参药对和阳性对照药奥贝胆酸灌胃6周,检测其体质量、肝湿重、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、肝功能(ALT、AST)的变化以及肝脏病理变化;采用靶向代谢组学分析大鼠肝脏胆汁酸代谢谱,并用PCR和Western Blot检测大鼠结肠组织FXR基因和蛋白表达水平。结果BG组大鼠的体质量、肝湿重以及肝体比、血清TC、TG、ALT、AST水平显著降低(P<0.05或P<0.01);病理结果显示:柴胡人参药对组肝脏脂肪变明显改善。柴胡人参药对组次级胆汁酸成分,包括鼠胆酸(muroCA)、猪去氧胆酸(HDCA)、石胆酸(LCA)、6-酮基石胆酸(6-ketoLCA)、别胆酸(ACA)、牛磺石胆酸(TLCA)的水平显著升高(P<0.05或P<0.01);柴胡人参药对组还能上调NAFLD大鼠肠道中FXR基因和蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.001)。结论柴胡人参药对可能通过调控大鼠肝脏胆汁酸代谢,激活大鼠肠道FXR信号表达,从而改善NAFLD大鼠肝脏的脂肪变性。

柴胡人参药对对非酒精性脂肪性肝病大鼠法尼醇X受体和固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响

目的:观察柴胡人参药对对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠法尼醇X受体(FXR)蛋白和固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)表达及胰岛素抵抗的影响。方法:雄性Wistar大鼠喂养高脂高糖饲料,造模8周后随机分为模型对照组(M)、西药组(R)和柴胡人参药对组(Y),分别给予生理盐水、罗格列酮和药对灌胃治疗4周,同时继予高脂高糖饲料喂养。检测大鼠空腹血糖(FBG)、血脂、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)、胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(IRI);取肝脏,计算肝重指数,检测肝组织甘油三酯(TG)水平;做肝脏HE染色,光镜下观察肝脂肪变性和炎症程度。用Western blot检测肝组织的FXR及SREBP-1c蛋白表达水平,用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测FXR mRNA的表达情况。结果:Y组大鼠血清TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、IRI水平较M组显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平未见明显变化(P>0.05)。光镜下观察见Y组大鼠肝脏脂肪病变较M组明显减轻,而R组脂肪变性改善程度不明显。Western blot检测结果显示:与M组比较,Y组大鼠肝脏FXR蛋白表达显著升高(P<0.01),SREBP-1c蛋白表达显著降低(P<0.05);Real-time PCR检测结果显示:与M组比较,Y组大鼠肝脏FXR mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论:柴胡人参药对能够改善NAFLD大鼠肝脏脂肪变和炎症程度,激活FXR的活性,间接抑制SREBP-1c的蛋白表达,从而降低NAFLD大鼠血清TC、TG、LDL-C和肝脏TG含量,改善胰岛素抵抗,这可能是其治疗NAFLD的机制之一。

不同浓度的柴胡人参药对血清对非酒精性脂肪性肝细胞模型的毒性评估和脂肪变的影响

目的通过观察不同浓度的柴胡人参药对血清对混合脂肪酸诱导的HepG2细胞模型脂肪变的影响,探讨NAFLD细胞模型的建立,筛选出药物血清最佳的效应浓度。方法HepG2常规培养后,分为正常组(C)组,模型组1(M1×)、模型组2(M2×),将C组加入含10%的小牛血清DMEM培养基继续培养,模型组分别加入两种不同体积配置混合脂肪酸0.5 mmol·L^(-1)(13.5μL油酸+6.5μL棕榈酸)和1 mmol·L^(-1)(27μL油酸+13μL棕榈酸)造模,选出最佳的模型后,将正常组大鼠血清(Zq组)、吡格列酮组大鼠血清(P组)和药对组大鼠血清(Y组)按不同浓度干预细胞24 h,用CCK-8试剂盒检测各组血清毒性,对造模组细胞进行油红O染色和TG含量检测,筛选出含药血清最佳的效应浓度。结果①1 mmol·L^(-1)混合脂肪酸可使脂肪变细胞着色明显,其平均光密度值和TG含量显著高于0.5 mmol·L^(-1)浓度组(P<0.01);②每组含药血清IC50浓度分别为:Zq组:44.27%,是Y组:32.34%,P组:36.00%;IC10浓度分别为:Zq组:10.26%,Y组:10.84%,P组:11.49%,各组含药血清浓度≤10%时,对于HepG2细胞来说较为安全;③与M组相比,10%浓度的含药血清均能够较显著的减少HepG2细胞内脂滴蓄积,显著降低细胞内甘油三脂(TG)含量(P<0.01)。结论1 mmol·L^(-1)油酸:棕榈酸(2:1)可成功诱导HepG2细胞脂肪变模型,并且10%浓度的柴胡人参药对血清的作用最强,能有效改善HepG2细胞的脂肪变。