柴胡总皂苷抗内毒素活性研究

目的 :探讨柴胡总皂苷 (BCS)抗内毒素活性。方法 :从柴胡中提出柴胡总皂苷 ,用体外鲎试验法、细菌内毒素致兔热模型、细菌内毒素致卡介苗增敏小鼠毒性证实其抗内毒素活性。结果 :体外鲎试验法显示将 5 0mg·ml 1的柴胡总皂苷溶液稀释至 32倍仍有直接破坏内毒素作用 ;解热实验显示 ,BCS +LPS组、模型组 (LPS)、BCS组的最大升温和平均升温分别为 0 0 5℃和 0 75℃ ,0 0 1℃和 - 0 2 5℃ ,0 4 9℃和 - 0 37℃ ,BCS +LPS组与模型组相比差异显著 (P <0 0 1) ;细菌内毒素致小鼠毒性实验显示 ,BCS +LPS组死亡率 (13 3% )大于BCS组 (5 0 % ) ,但与模型组 (90 0 % )相比 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论 :柴胡总皂苷具有抗内毒素活性。

柴胡总皂苷对酒精性肝病大鼠肝脏转化生长因子-β_1和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究柴胡总皂苷对酒精性肝病大鼠肝脏转化生长因子(TGF)-β1和α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达的影响,以探讨柴胡皂苷防治酒精性肝病的机制。方法 SD大鼠45只随机分为正常组、模型组、柴胡皂苷保护组,利用白酒灌胃辅以高脂饲料制备大鼠肝损伤模型,同时给予柴胡总皂苷(200 mg/kg)保护,每天一次,连续8 w,8 w末处死全部大鼠。测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理形态学改变,检测肝组织TGF-β1和α-SMA的表达。结果和模型组比较,柴胡皂苷能明显降低大鼠血清ALT、AST活性,减少肝细胞坏死和纤维组织增生;模型组肝组织中TGF-β1和α-SMA表达呈强阳性,给予柴胡皂苷后TGF-β1和α-SMA的表达明显降低。结论柴胡皂苷对酒精性肝病具有一定的预防作用,其机制可能是通过抑制TGF-β1信号通路对肝星形细胞的活化,保护肝细胞的结构和功能,抑制细胞外基质在肝脏的分泌和沉积。

不同产地及不同采收期北柴胡中柴胡总皂苷的含量测定

目的:测定不同产地及不同采收期北柴胡中柴胡总皂苷的含量。方法:以柴胡皂苷a为对照品,采用紫外可见分光光度法,于535nm处测定不同产地及同一产地不同采收期北柴胡样品中柴胡总皂苷的含量。结果:柴胡总皂苷在0.0306～0.3062 mg具有良好的线性关系(r=0.9996),加样回收率为101.44%,RSD为3.29%,不同产地北柴胡中柴胡总皂苷含量为0.98%～2.05%;生长年限为19个月(9月28号采集)的河南嵩县北柴胡柴胡总皂苷含量达到最大富集值,为1.78%。结论:不同产地及同一产地不同采收期的北柴胡药材中的总皂苷含量存在明显差异,河南嵩县北柴胡的最佳采收期为生长周期第二年的9月28号。

中药柴胡总皂苷急性肝毒性的代谢组学研究

运用UPLC-MS联用技术对空白对照组、柴胡总皂苷(SS)组大鼠在给药后第3天和第5天的尿液样本进行分析检测,获得了以质荷比和保留时间为变量的矩阵数据。据此建立各组大鼠的尿液代谢轮廓图,并利用主成分分析(PCA)建立了SS的代谢组学毒性模型。结合肝组织病理,探讨了柴胡总皂苷的急性肝毒性。对于SS组与正常组,大鼠尿液代谢轮廓图表现出了一定的差异。在代谢组学毒性模型中,给药第3天和第5天的PCA分类均偏离正常组,而第5天的偏离程度强于第3天。同时,在第5天的肝组织病理切片中发现了组织病变。由此表明,给药组大鼠的代谢组偏离了正常组,这种偏离正是肝急性毒性的表现,且给药到第5天的肝毒性强于第3天,表明肝毒性与给药累积剂量呈正相关,表现出了明显的急性和累积肝毒性。

柴胡总皂苷对大鼠酒精性肝病预防作用及其机制研究

目的:研究柴胡总皂苷对大鼠酒精性肝病(ALD)的预防作用及其机制。方法:SD大鼠随机分为3组:酒精组、柴胡皂苷组、正常对照组,利用白酒灌胃辅以高脂饲料方法建立大鼠ALD模型,同时给予柴胡总皂苷保护,12周末处死大鼠,测定有关指标。结果:柴胡总皂苷明显升高肝组织活性、降低丙二醛(MDA)含量,降低血清转氨酶(ALT、AST)活性和甘油三酯(TG)含量,与模型组比较差异显著(P<0.01);并且能明显改善由酒精引起的肝组织脂肪变性和小叶灶性坏死,使肝小叶结构趋于正常。结论:柴胡总皂苷对ALD有明显防护作用,其机制可能与柴胡总皂苷清除自由基抑制脂质过氧化反应有关。

柴胡总皂苷提取工艺的优化

目的考察柴胡中总皂苷的最佳提取工艺。方法以柴胡总皂苷提取率为评价指标,采用单因素实验与正交实验设计优选出柴胡中柴胡总皂苷的提取工艺。结果柴胡总皂苷的最优提取工艺为:粉碎粒径<180μm的柴胡粉末在80℃条件下以70%乙醇回流提取3次,每次1 h,每次加乙醇量为柴胡粉末量的8倍。结论验证实验表明优选出的提取工艺稳定可行,适用于柴胡总皂苷的提取。

柴胡总皂苷对小鼠肠道首过效应和肝脏Cyp3a、Cyp2e1的影响

目的:研究柴胡总皂苷对小鼠肠道首过效应(Cyp3a,P-糖蛋白)和肝脏细胞色素氧化酶(Cyp3a,Cyp2e1)的影响。方法:供试物灌胃给小鼠2次/d,连续3 d。实验当日,对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP;P-gp底物)以50 mg/kg经口投予后60 min断头采血,并摘取肝脏和全段小肠。以分光光度法测定血中APAP浓度;用梯度离心法分离小鼠肝/肠微粒体;以分光光度法检测微粒体中Cyp3a/Cyp2e1活性;以实时荧光定量法测定Cyp3a11/Cyp2e1 mRNA在小鼠肝脏中的表达。结果:血中APAP浓度测定结果和P-糖蛋白偶联的ATP酶活性测定结果显示,柴胡总皂苷各剂量组与对照组之间均无统计学差异(P>0.05);在肝脏和肠道微粒体实验中不论以氨基吡啉还是以红霉素为底物测定Cyp3a,仅有柴胡总皂苷高剂量组(150 mg/kg)的Cyp3a活性显著高于对照组(P<0.05);仅有柴胡总皂苷中剂量组(75 mg/kg)的Cyp2e1活性显著低于对照组(P<0.05);RT-PCR结果显示,仅有柴胡总皂苷高剂量(150 mg/kg)时能够诱导Cyp3a11在肝脏中的表达。结论:柴胡总皂苷对小鼠肝脏和肠道中的Cyp3a具有一定的诱导作用,对肝脏中的Cyp2e1具有一定的抑制作用,对小鼠肠道P-糖蛋白的转运活性无影响。

柴胡中柴胡总皂苷及柴胡皂苷a的含量测定

目的建立柴胡中柴胡总皂苷及柴胡皂苷a的含量测定方法,并对样品进行含量测定。方法采用紫外分光光度法,以柴胡皂苷a为对照品,在波长545nm处对样品中的总皂苷进行含量测定;采用高效液相色谱法,以C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)、甲醇-水为流动相,流速为1mL.min-1,检测波长为210nm,测定样品中柴胡皂苷a的含量。结果柴胡总皂苷在30～70μg/mL、柴胡皂苷a在50.4～252μg/mL范围内呈良好的线性关系r,分别为09956、0.9991;平均回收率:柴胡总皂苷为99.31%、柴胡皂苷a为99.22%;RSD:柴胡总皂苷为1.25%,柴胡皂苷a为1.07%。结论本研究所建立的紫外分光光度法测定柴胡总皂苷及高效液相法测定皂苷a含量的方法,简便、易行、快速,结果准确可靠,适用于柴胡中柴胡总皂苷及柴胡皂苷a的含量测定,并为在安全剂量范围内正确使用柴胡提供依据。

柴胡总皂苷分离工艺的研究

目的 从北柴胡中分离出柴胡总皂苷。方法 用 60 %的乙醇在低于 55℃下提取柴胡粉末 ,滤液去溶剂后所得的浆状液加入正丁醇 ,在低于 55℃去除溶剂得皂苷粉末。结果 柴胡总皂苷的收率为 1 .1 % ,富含柴胡皂苷d、a、c成分。结论 本法可以从柴胡中分离出柴胡总皂苷 ,并可以保持柴胡皂苷d、a。

柴胡总皂苷粗提取物对大鼠肝毒性损伤作用研究

目的观察长期、大量给予柴胡总皂苷粗提取物致大鼠肝毒性损伤的作用和程度。方法按45天毒性实验方法,除观察一般状况、肝毒性相关指标外,检测血和肝组织内脂质代谢情况、糖代谢、胆红素(TBIL)水平和肝组织病理检查。结果柴胡总皂苷粗提取物可导致血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性增高,肝脏重量和肝体比值增大,血和肝内甘油三酯(TG)含量增加,对血中胆固醇(CHO)和肝内糖原(Gn)影响不明显,仅高剂量组对TBIL有影响;上述变化随剂量的增加而逐渐加重,病理组织学检查可见肝细胞损伤,与蒸馏水对照组相比有明显差异。结论长期给柴胡总皂苷粗提取物可致大鼠明显的肝毒性损伤,既可致肝功能指标的改变,又可致肝细胞器质性病变。

柴胡总皂苷纯化方法研究

目的以柴胡皂苷A和柴胡皂苷D含量为指标,考察柴胡总皂苷最佳纯化方法。方法采用正丁醇萃取、D-101及AB-8大孔吸附树脂法分离纯化柴胡总皂苷,采用HPLC法测定不同纯化方法所得的总皂苷中柴胡皂苷A和柴胡皂苷D的含量。结果正丁醇萃取、D-101及AB-8大孔吸附树脂法纯化柴胡总皂苷中胡皂苷A+D的含量分别为5.93 mg/g、5.04 mg/g和10.81 mg/g,胡皂苷A+D的重量分别为26.81 mg、19.22 mg和38.70 mg。结论在本实验所用的方法中,AB-8大孔树脂法是分离精制柴胡总皂苷的最佳方法,且树脂可重复利用,具有良好的应用前景。

大孔吸附树脂分离纯化柴胡总皂苷工艺研究

目的以柴胡皂苷a含量为指标,考察柴胡总皂苷的最佳分离纯化工艺。方法建立柴胡皂苷a的HPLC测定法,色谱柱为ODS-C18柱(150×4.6mm,5μm),流动相为甲醇:水(70:30),流速为1mL.min-1,检测波长为210nm。以柴胡皂苷a为指标,比较不同型号大孔树脂对于柴胡总皂苷的分离纯化能力,对吸附流速、洗脱溶剂及用量、洗脱流速进行考察。结果柴胡皂苷a在50～250μg.mL-1的范围内,浓度与其峰面积具有良好的线性关系(r=0.9991),平均加样回收率为99.22%,RSD=1.07%(n=6)。确定D101大孔树脂为柴胡总皂苷的纯化材料,其最佳工艺条件是吸附流速为1BV.h-1,洗脱溶剂为70%乙醇,用量为5BV,洗脱流速为2BV.h-1。柴胡总皂苷精制品中柴胡皂苷a含量可达到3%左右。结论该含量测定方法操作简便、重复性好,可用于测定柴胡总皂苷精制品中柴胡皂苷a的含量。D101大孔树脂分离柴胡总皂苷工艺稳定可行,树脂可重复利用,对于柴胡总皂苷的分离精制具有良好的应用前景。

柴胡总皂苷肝毒性肝纤维化损伤机制研究

目的探讨柴胡总皂苷肝毒性损伤与肝脏纤维化的相关性,为阐明其肝毒性机制提供依据。方法大鼠连续15天灌胃高、中、低不同剂量,按等生药量计算,高、中、低剂量分别为300、150、50 mg.kg-1,末次药后取血和肝组织,检测血清及肝组织匀浆中羟脯氨酸含量的变化;并作大鼠肝脏组织Masson's病理学检查。结果 15天给药结束后药物组大鼠血清和肝组织羟脯氨酸含量均明显升高,随给药剂量增加羟脯氨酸含量升高幅度增大,与正常对照组比较呈现不同程度的显著性差异;马松染色肝组织病理改变可见胶原纤维延伸明显,并互相连接包绕整个肝小叶,导致正常肝小叶结构破坏,假小叶形成。药物高、中、低剂量之间的肝毒性损伤程度有一定的剂量依赖关系,与空白组相比有明显差异。结论连续15天灌服一定剂量的柴胡总皂苷可导致大鼠明显的肝纤维化,柴胡总皂苷是其肝毒性主要物质基础,为柴胡总皂苷的肝毒性评价提供了实验依据,为其毒性预警和临床安全应用提供对策及科学依据。

柴胡总皂苷醇洗脱精制品对小鼠急性毒性实验研究

目的探讨柴胡总皂苷醇洗脱精制品对小鼠急性毒性的影响。方法采用经典的小鼠急性毒性试验方法,进行柴胡总皂苷醇洗脱精制品对小鼠的急性毒性研究。结果按含柴胡总皂苷含量计算,柴胡总皂苷醇洗脱精制品对小鼠的半数致死量(LD50)为446.7mg·kg-1·d-1,95%可信限为386.13～513.66mg·kg-1·d-1。死亡小鼠急性毒性主要表现为安静怠动,即而出现走路不稳、腹卧昏睡、心率加快、呼吸急促、连续性抽搐、神经抑制而死亡。存活小鼠在14天观察期内体重增长缓慢,余未见明显异常。结论柴胡总皂苷醇洗脱精制样品的小鼠急性毒性比柴胡总皂苷粗提取物的急性毒性大,进一步证实了柴胡总皂苷是柴胡产生毒性的主要物质基础。其体内蓄积毒性的"量-时-毒"关系有待进一步研究。

柴胡总皂苷精制品大鼠肝毒性病理学研究

目的观察连续15d给予大鼠不同剂量的柴胡总皂苷醇洗脱精制样品导致大鼠肝毒性病理学损伤程度。方法分别给大鼠灌胃高、中、低剂量的柴胡总皂苷醇洗脱精制样品,按柴胡总皂苷计算,高、中、低剂量组分别为300,150,50mg.kg-1,除观察一般状况外,剖杀大鼠,精密称取心、肝、脾、肺、肾脏重量,计算脏体比值;进行肝脏病理组织学检查。结果不同剂量的柴胡总皂苷醇洗脱精制样品可导致大鼠体重下降,肝脏重量和肝体比值增大,病理学检查可见不同程度的肝组织损伤;上述变化随剂量的增加而逐渐加重,与空白组比较有明显差异。结论柴胡对大鼠肝毒性损伤程度与柴胡用药剂量、柴胡总皂苷含量呈剂量依赖关系。柴胡总皂苷是柴胡导致肝毒性的毒效部位,柴胡总皂苷醇洗脱精制品(81.9%)在一定剂量下,连续给药15d即可导致大鼠明显的肝脏器质性病变,其细胞损伤乃至坏死是主要病理改变。

HPLC-ELSD测定柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d的含量

目的:应用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d的含量。方法:柴胡以碱性乙醇进行提取,AB-8大孔吸附树脂分离纯化,得到柴胡总皂苷,用HPLC-ELSD法测定柴胡皂苷a、d的含量。结果:柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d的含量分别为4.31%,12.86%,柴胡皂苷a、d分别在0.09～0.72μg、0.16～1.08μg范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别为102.39%、102.00%,RSD分别为1.95%、2.21%。结论:HPLC-ELSD测定柴胡总皂苷中柴胡皂苷a、d含量,方法简便,结果可靠,可作为柴胡提取物质量控制的检测方法。

毒性导向下的柴胡总皂苷精制工艺研究

目的通过小鼠急性毒性比较研究,探讨不同精制工艺对毒性物质基础柴胡总皂苷的富集程度。方法参照经典的急性毒性实验方法,进行柴胡总皂苷粗提取物、柴胡总皂苷水洗脱液和柴胡总皂苷醇洗脱液对小鼠的急性毒性比较研究。结果按总皂苷含量计算,测得柴胡总皂苷粗提取物LD15为0.3g·kg-1,MTD为0.48g·kg-1;测得柴胡总皂苷水洗脱液LD10为0.83g·kg-1,MTD为1.324g·kg-1;测得柴胡总皂苷醇洗脱液LD100为12.4g·kg-1。结论上述不同精制工艺样品的柴胡总皂苷富集程度为:柴胡总皂苷醇洗脱液>柴胡总皂苷水洗脱液>柴胡总皂苷粗提物;上述不同精制工艺样品的小鼠急性毒性大小为:柴胡总皂苷醇洗脱液>柴胡总皂苷粗提物>柴胡总皂苷水洗脱液,故确定醇洗脱工艺为富集柴胡总皂苷的最佳精制工艺。

柴胡总皂苷粗提取物对小鼠急性毒性实验研究

目的探讨柴胡总皂苷提取物对小鼠急性毒性的影响。方法采用经典的小鼠急性毒性试验方法,进行柴胡总皂苷粗提取物对小鼠的急性毒性研究。结果按含生药量计算,柴胡总皂苷粗提取物对小鼠的半数致死量(LD50)为94.974g·kg-1·d-1,相当于临床70kg成人每公斤人日用量的422.8倍;95%可信限为88.742～103.76g·kg-1·d-1,相当于临床70kg成人每公斤人日用量的414.1～484.2倍;按含总皂苷含量计算,LD50为5231.5mg·kg-1·d-1,95%可信限为4886.1～5721.2mg·kg-1·d-1。死亡小鼠急性毒性主要表现为安静怠动,即而出现走路不稳、腹卧昏睡、心率加快、呼吸急促、连续性抽搐、神经抑制而死亡。存活小鼠在14天观察期内体重增长缓慢,余未见明显异常。结论柴胡药材具有一定的毒性,与临床报道相一致。柴胡总皂苷既是其发挥功效的主要化学成分,又是其产生毒性的主要物质基础。其毒性部位以及体内蓄积毒性的"量-时-毒"关系有待进一步研究。

柴胡总皂苷粗提取物对大鼠急性毒性实验研究

目的探讨柴胡总皂苷粗提取物对大鼠急性毒性的影响。方法采用经典的急性毒性试验方法,进行柴胡总皂苷粗提取物对大鼠的急性毒性研究。结果按含柴胡总皂苷含量计算,柴胡总皂苷粗提取物对大鼠的半数致死量(LD50)为2255.6mg·kg-1·d-1,95%可信限为2057.2～2452.9mg·kg-1·d-1。死亡大鼠急性毒性主要表现为安静怠动,继而出现步态不稳、腹卧昏睡、心率加快、呼吸急促、连续性抽搐、神经抑制而死亡。存活小鼠在14天观察期内体重增长缓慢,余未见明显异常。结论柴胡总皂苷粗提取物可致大鼠全部死亡,且其毒性比小鼠毒性小。其产生毒性的部位及毒性机制有待于深入研究。

柴胡总皂苷醇洗脱精制品对大鼠急性毒性实验研究

目的探讨柴胡总皂苷醇洗脱精制品对大鼠急性毒性的影响。方法采用经典的急性毒性试验方法,进行柴胡总皂苷醇洗脱精制品对大鼠的急性毒性实验研究。结果按含柴胡总皂苷含量计算,柴胡总皂苷醇洗脱精制品对小鼠的半数致死量(LD50)为591.95mg·kg-1·d-1,95%可信限为490.96～713.7mg·kg-1·d-1。死亡大鼠急性毒性主要表现为安静怠动,即而出现步态不稳、腹卧昏睡、心率加快、呼吸急促、连续性抽搐、神经抑制而死亡。存活大鼠在14天观察期内体重增长缓慢,余未见明显异常。柴胡总皂苷醇洗脱精制样品的大鼠急性毒性比柴胡总皂苷粗提取物的急性毒性大,但比小鼠急性毒性小。结论柴胡总皂苷是柴胡产生毒性的主要物质基础,其产生毒性的部位及毒性机制有待于深入研究。