HPLC-ELSD同时测定柴胡消瘿颗粒中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷、阿魏酸及橙皮苷的含量

目的：建立采用高效液相-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法同时测定柴胡消瘿颗粒中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷、阿魏酸、橙皮苷的含量测定方法.方法：色谱柱为Agilent TC-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.01％甲酸水溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;柱温为25℃;蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为60℃,雾化气体为高纯氮气,氮气压力为3.0 MPa,Gain 6.结果：5种活性成分实现良好分离,柴胡皂苷a在0.21 ～1.64 μg线性关系良好,r=0.999 3,平均回收率为102.2％,RSD为1.5％;柴胡皂苷d在0.355 ～2.840μg线性关系良好,r =0.999 0,平均回收率为101.9％,RSD为1.5％;芍药苷在1.20～9.60 μg线性关系良好,r=0.9995,平均回收率为97.93％,RSD为2.2％;阿魏酸在0.140～1.120 μg线性关系良好,r=0.999 2,平均回收率为98.79％,RSD为2.7％;橙皮苷在1.00～8.00μg线性关系良好,r=0.999 2,平均回收率为99.9％,RSD为2.6％.结论：该方法简便、准确,重复性好,可为控制柴胡消瘿颗粒的质量提供参考.

正交试验法优选柴胡消瘿颗粒的乙醇提取工艺

目的：优选柴胡消瘿颗粒的醇提工艺,为该制剂的临床用药提供参考.方法：以干膏率和芍药苷、橙皮苷、柴胡皂苷a及柴胡皂苷d含量的综合评分为指标,通过正交试验考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间及提取次数对醇提工艺的影响.采用HPLC测定指标成分含量,柴胡皂苷类成分的流动相乙腈（A）-0.1％磷酸水（B）梯度洗脱（0 ～ 10 min,10％ ～ 25％A;10 ～ 25 min,25％ ～ 35％ A;25 ～ 33 min,35％～ 45％A;33～ 50 min,45％A;50～ 55 min,45％ ～ 10％ A）,检测波长210 nm;芍药苷与橙皮苷的流动相乙腈-0.2％乙酸（15∶85）,检测波长分别为230,283 nm.结果：最佳提取工艺为加6倍量60％乙醇回流提取2次,每次1.5h.干膏率35.98％,干膏中芍药苷、橙皮苷、柴胡皂苷a＋d的质量分数分别为0.944％,1.543％,0.089％.结论：优选的提取工艺科学合理、稳定可行,为柴胡消瘿颗粒的工业化生产提供参考.

柴胡软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎大鼠Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响

目的探讨柴胡软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎大鼠辅助性T细胞1(helper T cell 1,Th1)/辅助性T细胞2(helper T cell 2,Th2)、辅助性T细胞17(helper T cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)平衡的影响。方法随机数字表法将48只大鼠分为正常组(12只)和造模组(36只),采用甲状腺球蛋白注射结合高碘饮水+慢性束缚+游泳过劳+饮食失节制备肝郁脾虚桥本甲状腺炎大鼠模型,共33只大鼠造模成功,将造模成功大鼠随机分为模型组、金水宝片[0.45 g/(kg·d)]和柴胡软坚消瘿颗粒组[11.43 g/(kg·d)],每组11只,连续给药8周。观察大鼠一般情况,实验前后记录大鼠体重、摄食量、粪便含水量,实验结束后旷场实验分析大鼠行为;末次给药后12小时,取血,流式细胞术检测Th1、Th2、Th17、Treg细胞百分比;酶联免疫吸附法检测大鼠血清甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化酶抗体(thyroidperoxidase antibody,TPOAb)、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(freethyroxine,FT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、γ-干扰素(γ-interferon,IFN-γ)、白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)、白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、白细胞介素35(interleukin35,IL-35)的水平;取血后分离大鼠甲状腺组织,苏木素—伊红染色法检测大鼠甲状腺组织病理形态;蛋白免疫印迹法检测大鼠甲状腺组织T盒子转录因子(T-box transcription factor,T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)、叉头盒蛋白p3(forkhead box protein p3,Foxp3)、维A酸相关孤独受体γt(retinoid related orphan receptorγt,RORγt)的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠甲状腺损伤严重,血清TPOAb、TGAb、FT3、FT4水平、Th1、Th17、Th1/Th2、Th17/Treg、IFN-γ、IL-17水平及蛋白T-bet、RORγt表达显著升高(P<0.01),TSH、Th2、Treg、IL-10、IL-35水平及蛋白GATA3、Foxp3表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,金水宝片组、柴胡软坚消瘿颗粒组大鼠甲状腺损伤减轻,血清TPOAb、TGAb、FT3、FT4水平、Th1、Th17、Th1/Th2、Th17/Treg、IFN-γ、IL-17水平及蛋白T-bet、RORγt表达显著降低(P<0.01),TSH水平、Th2、Treg、IL-10、IL-35水平及蛋白GATA3、Foxp3表达显著升高(P<0.01)。结论柴胡软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚桥本甲状腺炎大鼠治疗有一定的疗效,可能与调节Th1/Th2及Th17/Treg细胞平衡有关。