加热提取时间对柴胡皂甙A含量的影响

考察了柴胡合理的加热提取工艺，以柴胡皂甙A为检测指标，采用薄层扫描法，测定了不同加热提取时间柴胡皂甙A的含量，并比较了不同提取工艺对挥发油提取率的影响。结果表明，柴胡加热提取时间不宜超过6h。

柴胡总皂甙及柴胡皂甙a、c、d对MES惊厥小鼠的影响

目的:观察柴胡总皂甙(saikosaponins)及柴胡皂甙a(saikosaponina,SSa)、柴胡皂甙c(saikosaponinc,SSc)、柴胡皂甙d(saikosaponind,SSd)的抗惊厥作用。方法:采用最大电休克发作(MES)导致小鼠惊厥模型进行试验,记录小鼠惊厥数。结果:柴胡总皂甙100mg/kg、200mg/kg和300mg/kgig均可以显著降低小鼠MES惊厥发生率;SSa1.09mg/kg、2.18mg/kgip也均可显著降低小鼠MES惊厥发生率,而SSc、SSd作用不明显。结论:柴胡总皂甙和SSa具有抗小鼠MES惊厥作用,而SSc、SSd抗小鼠MES惊厥作用不明显。

柴胡中柴胡皂甙a的超声辅助溶剂提取

以溶剂提取法为基础,以超声波为辅助手段,对柴胡中的有效成分进行了提取。通过对提取液中柴胡皂甙a量的测定,研究了超声功率、提取温度、提取时间和样品浸渍时间等条件对提取效果的影响,优选出超声辅助溶剂提取的最佳条件为超声功率50%、提取温度50℃、提取时间20 min、样品浸渍时间24 h。实验结果表明,超声辅助溶剂提取比普通的溶剂提取具有更高的提取效率。

薄层色谱－分光光度法测定柴胡疏肝散中柴胡皂甙a（d）的含量

采用薄层色谱－分光光度法测定了柴胡疏肝散中柴胡皂甙ａ（ｄ）的含量。样品通过聚酰胺吸附、溶剂萃取等方法进行预处理，采用硅胶ＧＦ２５４高效薄层板，展开剂为氯仿－正戊醇－甲醇－正丁醇醋酸，水（６０：３６：２２：９：４：２），测定波长５４５ｎｍ。本法回收率为１００.２４％。

高效液相色谱法分离与测定柴胡中的柴胡皂甙a

采用反相高效液相色谱法对北柴胡中的柴胡皂甙a进行了分离和测定。试验选出分离的最佳条件：流动相为V（乙腈）：V（水）=90：10，流速为0．8mL／min，检测波长为208nm，在0．05—1．50mg／mL范围内柴胡皂甙a的量与峰面积线性关系良好，回归方程为：Y=2258428p＋186676，相关系数r=0．9993，检出限为2．3ng／mL，回收率为98．3％-100．9％。

毛细管电泳法对柴胡中柴胡皂甙a与d对映体的分离和测定

利用环糊精衍生物2-O-丙酮基-2-O-羟丙基-环糊精(2-AHP--βCD)作为手性选择剂,提出了一种毛细管电泳快速分离、测定柴胡中柴胡皂甙a,d对映体的方法.考察了手性选择剂浓度、缓冲液浓度及其pH值对分离效果的影响,确定了最佳分离条件.结果表明,在214 nm检测波长处,在硼砂缓冲溶液中,2-AHP--βCD能使柴胡皂甙a,d异构体在7 min内得到分离.利用该法测定了柴胡中柴胡皂甙a,d的含量,并进一步研究了方法的线性范围、检测限及精密度.

中药复方中柴胡皂甙A和D的LC/MS/MS研究

To study Saikosaponins in a Chinese traditional compound medicine by LC/MS. Saikosaponin A and D, which were the bioactive components of Bupleurum falcatum L., were not found in the medicine. And three isomeric compounds of Saikosaponin A and D were detected instead. Saikosaponin A and D were found have turned into two other isomers after treated by acid water, but keep unchanged when treated by neutral water. Two of the isomeric compounds which found in the Compound medicine were determined as Saikosaponin B1 and B2 . This work is helpful for quality control of the medicine and also is useful for supervising the procedures of manufacture.

柴胡皂甙A对脓毒症大鼠早期血清中炎症因子的影响

目的探讨柴胡皂甙A(Ss A)对脓毒症大鼠早期血清中炎症因子的影响。方法 90只清洁级SD大鼠,随机分为对照组、脓毒症组和治疗组(脓毒症+Ss A),各30只。通过盲肠结扎穿孔建立脓毒症大鼠模型,术后1、8、24 h三个时间点收集动脉血标本。酶联免疫分析法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)浓度。结果与对照组比较,脓毒症组大鼠血清TNF-α、IL-6水平在术后各时间点均明显升高(P<0.05)。在8、24 h时间点,治疗组大鼠TNF-α、白细胞介素-1(IL-1)的含量均较脓毒症组各时间点显著降低(P<0.05)。结论 Ss A可抑制脓毒症大鼠早期炎症反应。

北柴胡中新皂甙的结构鉴定

从北柴胡（ＢｕｐｌｅｕｒｕｍｃｈｉｎｅｓｅＤＣ．）根醇提液的正丁醇部分得到７个化合物，经鉴定分别为柴胡皂甙ａ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎａ，１），柴胡皂甙ｄ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｄ，２），柴胡皂甙ｃ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｃ，３），柴胡皂甙ｆ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｆ，４），柴胡皂甙ｂ３（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｂ３，５），柴胡皂甙ｂ２（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｂ２，６）和柴胡皂甙ｔ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｔ，７），化合物７为新化合物，用化学和波谱法确定其结构为３β，１６β，２８三羟基１１α甲氧基１２齐墩果烯３ＯβＤ葡萄糖基（１→３）βＤ呋糖甙。化合物１～６均为首次自北柴胡中分离鉴定。

柴胡皂甙d对人肝癌细胞HIF-1α/COX-2信号通路的调节作用

目的观察缺氧条件下人肝癌细胞转录因子HIF-1α和COX-2表达的变化以及柴胡皂甙d的干预作用,探讨柴胡皂甙d对HIF-1α/COX-2信号通路的影响。方法①应用氯化钴模拟细胞缺氧,观察氯化钴模拟缺氧条件下人肝癌SMMC-7721细胞中HIF-1α及COX-2的表达;②应用氯化钴模拟细胞缺氧,以mTOR抑制剂雷帕霉素抑制HIF-1α蛋白合成后,观察SMMC-7721细胞中COX-2表达的改变;③应用不同浓度的柴胡皂甙d作用于氯化钴模拟缺氧条件下培养的人肝癌SMMC-7721细胞,作用24 h后,分别检测肝癌细胞中HIF-1α及COX-2的表达。结果①在正常肝癌SMMC-7721细胞中HIF-1α的蛋白表达较低,氯化钴模拟缺氧显著增加了HIF-1α的蛋白水平;正常SMMC-7721细胞中便有一定量的COX-2蛋白表达,氯化钴模拟缺氧条件下其蛋白水平进一步升高。②雷帕霉素显著降低了氯化钴模拟缺氧条件下HIF-1α的蛋白水平,同时可以观察到该组细胞COX-2蛋白显著降低。③柴胡皂甙d抑制了氯化钴模拟缺氧条件下HIF-1α的蛋白表达,并呈现出剂量依赖性,COX-2的蛋白水平随柴胡皂甙d浓度增加呈下降趋势。结论转录因子HIF-1α参与了缺氧条件下人肝癌SMMC-7721细胞COX-2表达的调节,柴胡皂甙d可能通过影响HIF-1α/COX-2信号通路发挥其抗癌作用。

柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白血病细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响

目的：观察柴胡皂甙d（SSd）对人急性早幼粒白血症细胞（HL60）糖皮质激素受体（GR）mRNA表达的调节作用及对细胞生长的影响。方法：用从柴胡中提取的单体成分SSd，以3H-胸腺嘧啶（3H－TdR）掺入法和流式细胞仪观察细胞生长，用Northernblot分析SSd对GRmRNA的改变。结果：经SSd作用后，HL60细胞2H－TdR掺入率明显降低，呈时间和剂量依赖关系，SSd10μg／ml处理48h作用最明显；流式细胞仅分析细胞呈现G0／G1期阻滞现象，GRmRNA表达增加。结论：SSd可上调HL60细胞GRmRNA表达并抑制细胞生长。

柴胡皂甙对肝细胞增殖及基质合成的实验研究

目的研究柴胡皂甙对原代培养肝细胞（ＨＣ）增殖及合成细胞外基质（ＥＣＭ）的作用，为进一步阐明柴胡皂甙防治肝损伤和抗肝纤维化的机理提供实验依据。方法电镜观察、免疫细胞化学及图像分析仪检测ＨＣ内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和纤维粘连蛋白（ＦＮ）含量，流式细胞仪测定ＨＣ内的ＤＮＡ含量和３Ｈ－脯氨酸掺入量未检测ＨＣ内胶原蛋白总量。结果ＴＫＣｎｃｍ各组对细胞损伤得到改善，各实验组ＨＣ内３Ｈ－脯氨酸掺入量均明显升高，各治疗组ＨＣ内ＤＮＡ含量显著升高，而３Ｈ－脯氨酸掺入量均呈现降低趋势。ＨＣ内Ｉ型胶原含量明显减少，其余各组基质成分含量呈下降趋势。结论柴胡皂甙对肝细胞具有保护作用；表现为与相应实验组ＨＣ内ＤＮＡ含量内呈上升趋势；胶原蛋白总量及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和ＦＮ含量及其合成受到抑制。

柴胡皂甙d对人肝癌细胞STAT3/COX-2信号通路的调节作用

目的观察柴胡皂甙d(saikosaponin-d,SSd)对人肝癌细胞STAT3、COX-2表达的影响,探讨其抗肿瘤作用可能的信号通路机制。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,分别经IL-6、AG490和SSd作用后,免疫细胞化学及免疫印迹方法检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)以及COX-2蛋白表达的变化,并探讨其关系。结果免疫细胞化学结果显示,IL-6诱导组人肝癌细胞p-STAT3和COX-2蛋白的表达较空白对照组显著升高,而加入AG490或SSd后p-STAT3、COX-2蛋白表达较IL-6诱导组明显减弱,SSd对STAT3蛋白表达则无明显影响;免疫印迹结果亦显示出类似变化:经IL-6作用,人肝癌细胞p-STAT3和COX-2的表达明显增强,AG490或SSd作用的人肝癌细胞p-STAT3表达呈现剂量依赖性下降,COX-2蛋白表达亦出现相应下调。结论p-STAT3参与了人肝癌细胞COX-2表达调节,SSd可能通过抑制STAT3磷酸化下调COX-2的表达而发挥抗肿瘤作用。

柴胡皂甙d对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响及其作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经内毒素(脂多糖,LPS)诱导,加入不同质量浓度的SSd作用后,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,光学、电子显微镜和流式细胞仪观察细胞凋亡,放免法检测细胞前列腺素E2(PGE2)产生量。结果SSd对肝癌细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。镜下观察,SSd作用组细胞可见典型凋亡小体形成,细胞凋亡率达17.5%。肿瘤细胞前列腺素E2的产生量,SSd作用组明显下降,接近环氧合酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利(Nimesulide)作用组水平。结论SSd可能通过下调COX-2的表达,抑制PGE2产生而发挥抗癌作用。

柴胡皂甙v的结构鉴定

从北柴胡（ＢｕｐｌｅｕｒｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅＤＣ．）根的乙醇提取液的ＥｔＯＡｃ部分及ＢｕＯＨ部分得到４个化合物，经鉴定分别为柴胡皂甙ｖ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｖ，１），柴胡皂甙ｌ（ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｌ，２），２″Ｏ乙酰柴胡皂甙ｂ２（２″Ｏａｃｅｔｙｌｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｂ２，３），２″Ｏ乙酰柴胡皂甙ａ（２″Ｏａｃｅｔｙｌｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎａ，４），化合物１为新化合物，用化学和波谱方法确定其结构为３β，１６α，２３，２８四羟基齐墩果１１，１３（１８）二烯３０酸３Ｏ［βＤ吡喃葡萄糖基（１→３）βＤ吡喃呋糖基］３０［木糖醇（１→１）］βＤ吡喃葡萄糖基６酯，化合物２～４为首次自北柴胡中分离鉴定。

柴胡皂甙d对肝癌细胞VEGF和Ang-2表达的影响

目的观察柴胡皂甙d(saikosaponins-d,SSd)对人肝癌SMMC-7721细胞血管内皮生成因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)和血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)表达的影响,探讨其抗癌作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经LPS诱导,加入不同终浓度的SSd(2.5、5、10、20 mg/L)作用48 h,并以300μmol/L终浓度的Nimesulide(COX-2选择性抑制剂)作为阳性对照,采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法测定肝癌细胞内VEGF和Ang-2蛋白表达,RT-PCR法检测VEGF mRNA表达,ELISA法检测培养上清中VEGF含量。结果 SSd可显著抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、增殖。与LPS诱导组比较,10 mg/L SSd作用组肝癌细胞VEGF蛋白表达率、mRNA表达水平和培养上清中VEGF含量均显著降低[VEGF蛋白:80.0%vs 60.0%;mRNA表达:(0.83±0.07)vs(0.09±0.03);培养上清中VEGF含量:(655.00±5.56)vs(446.15±5.05)pg/ml,P<0.05,P<0.01],同时Ang-2蛋白表达亦显著降低(86.67%vs 53.33%,P<0.05)。在2.5～10 mg/L作用终浓度范围内,SSd对培养上清中VEGF含量降低的影响呈现一定的剂量依耐性。结论 SSd可能通过VEGF和Ang-2信号通路,发挥其抗癌作用。

柴胡皂甙D诱导肝癌细胞同时发生凋亡及类凋亡性细胞死亡

目的探讨柴胡皂甙D(saikosaponin-d,SSD)诱导人肝癌Hep3B细胞死亡的作用及其可能机制。方法将肝癌Hep3B细胞分为空白对照组、DMSO(溶媒)对照组和3个SSD(5、10、15μmol/L)处理组,MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记后采用流式细胞仪定量检测死亡细胞的比例;Hoechst 33258染色后在形态学方面检测细胞凋亡;分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)凋亡蛋白酶活性;倒置显微镜观察细胞形态改变;Western blotting和Real-time PCR技术分别用于检测CHOP(C/EBP homology protein)蛋白和mRNA表达。结果MTT结果显示,SSD浓度和时间依赖性抑制Hep3B细胞生长;流式细胞术结果表明SSD诱导Hep3B细胞死亡;Hoechst 33258染色后在荧光显微镜下观察,发现SSD处理组的细胞核出现凋亡细胞特征性的核染色体凝集、核固缩和碎裂;SSD可明显激活关键的凋亡执行分子caspase-3;通过倒置显微镜观察到SSD处理的细胞内出现大量空泡样改变——类凋亡的发生;总caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理能够有效抑制caspase-3活性,但仅能部分抑制SSD诱导的细胞死亡,且不能减少SSD诱导的细胞内空泡形成;SSD诱导应激诱导性分子CHOP蛋白和mRNA表达上调,该作用不能被Z-VAD-FMK抑制。结论SSD可诱导人肝癌Hep3B细胞同时发生caspase依赖性凋亡和非caspase依赖性类凋亡,其中CHOP表达升高可能是参与SSD诱导类凋亡的分子机制之一。

柴胡皂甙d干预肺纤维化VEGF/PEDF表达的实验研究

目的:观察柴胡皂甙(SS)d对博来霉素(BLM)致肺纤维化小鼠的肺组织血管内皮生长因子(VEGF)/色素上皮衍生因子(PEDF)在不同时间表达变化的调节作用,并探讨其与抗肺纤维化作用的关系。方法:将80只小鼠随机均分为对照组,BLM组,SSd大、小剂量组。治疗组分别每天腹腔注射不同剂量SSd(2.0mg/kg,1.0mg/kg),分别于3、7、14及28d时观察纤维化程度,样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,免疫荧光观察PEDF、VEGF蛋白在肺内表达的规律,RT-PCR观察各时间点PEDF、VEGFmRNA表达的强度。结果:BLM组和SSd大、小剂量组均呈纤维化逐渐进展的动态变化,28d时,SSd大、小剂量组纤维化程度较BLM组轻(P<0.01);BLM组和SSd大、小剂量组HYP含量随时间增加逐渐增加,7、14及28d时SSd大、小剂量组HYP含量均低于BLM组(P<0.001);BLM组及SSd大、小剂量组VEGF表达从3d时开始升高,第7天达高峰,后呈下降趋势,28d达低点,PEDF表达总体呈逐渐增高趋势;SSd大、小剂量组VEGF表达比BLM组降低,PEDF表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论:SSd能够抑制肺纤维化进展,机制可能与下调VEGF的表达,上调PEDF的表达有关。

柴胡皂甙d对人肝癌细胞BECN1表达及自噬功能的影响

目的观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖及自噬作用的影响,初步探讨其可能的机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经不同终浓度SSd(5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、和17.5mg/L)作用24、48、72h,MTT法检测细胞增殖,筛选最适作用浓度及时间,RT-PCR测定自噬基因BECN1 mRNA表达水平,Western blot检测BECN1蛋白表达水平。结果 SMMC-7721细胞增殖的抑制率随着SSd浓度的增大而增大,浓度达12.5mg/L时,抑制率最高(60%);SSd作用后BECN1在基因和蛋白水平的相对表达量比对照组明显升高(P<0.05),3-甲基腺嘌呤(3-MA)可降低BECN1基因和蛋白的表达,并可降低SSd作用后的BECN1的表达。结论 SSd对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用呈现浓度和时间的依赖性,基本符合药物剂量-效应关系。SSd可能通过上调自噬基因BECN1的表达诱导自噬性死亡的发生,从而达到抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用。