柴胡皂苷-b2抑制内质网应激信号通路减轻四氯化碳致小鼠急性肝损伤

目的探讨柴胡皂苷-b2(SS-b2)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其对内质网应激通路的影响。方法 60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、模型组、SS-b2(5,10和20 mg·kg-1)组和阳性药(水飞蓟宾10 mg·kg-1)组。各组小鼠连续7 d每天ig给予不同剂量的SS-b2、水飞蓟宾或生理盐水;末次给药后2 h,除正常对照组外,各组分别一次性ip给予5%CCl4建立小鼠急性肝损伤模型。比色法检测血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;HE染色检测肝组织病理变化,免疫组织化学和Western蛋白印迹法检测小鼠肝组织中内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、转录激活因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清中GPT和GOT的活性及MDA的含量明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01),同时,肝组织内质网应激通路相关蛋白PERK,p-eIF2α,ATF4,GRP78和CHOP表达水平显著增高(P<0.01)。与模型组相比,不同浓度SS-b2组小鼠血清中GPT和GOT的活性及MDA的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),SOD的活性明显升高(P<0.01);肝组织上述内质网应激通路相关蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。HE染色结果显示,不同浓度的SS-b2明显改善CCl4引起的小鼠肝细胞肿胀、肝小叶周围胞核溶解和肝索排列紊乱,使细胞形态明显好转。结论 SS-b2对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与改善氧化应激损伤,抑制内质网应激通路的激活有关。

柴胡皂苷-b2对HepG2细胞迁移及血管生成相关蛋白表达的影响

目的研究柴胡皂苷b2(SS-b2)对HepG2细胞迁移的影响,并探讨其潜在的分子机制。方法用MTT法检测SS-b2对HepG2细胞存活的影响,并根据结果将细胞分为细胞对照组、SS-b2治疗组(15,30和60 mg·L-1)和阳性对照组〔多柔比星(DOX)2 mg·L-1〕;利用划痕实验观察SS-b2对HepG2细胞迁移的影响;采用Western印迹法检测HepG2细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的表达和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平。结果SS-b215,30和60 mg·L-1处理HepG2细胞48 h后,划痕愈合率分别为74.71%,72.50%和66.82%,随着SS-b2浓度的增加,划痕愈合率明显减小。与细胞对照组相比,SS-b230和60 mg·L-1组的划痕愈合率显著降低(P<0.05);SS-b215,30和60 mg·L-1可显著降低HepG2细胞中VEGF和HIF-1α的表达(P<0.05,P<0.01),而SS-b260 mg·L-1可显著降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达以及ERK1/2的磷酸化(P<0.05,P<0.01);阳性对照组可显著降低上述4种蛋白的表达以及ERK1/2的磷酸化(P<0.05,P<0.01)。与阳性对照组相比,SS-b260 mg·L-1下调VEGF和MMP-2的表达更显著(P<0.05,P<0.01),SS-b215,30和60 mg·L-1对HIF-1α的表达与阳性对照组无显著性差异,对MMP-9蛋白表达的下调不如阳性对照组效果显著(P<0.01),SS-b260 mg·L-1与阳性对照组的ERK1/2磷酸化程度无显著性差异。结论SS-b2可以抑制HepG2细胞的迁移,该作用可能与其抑制血管生成通路相关蛋白的表达有关。

柴胡皂苷-b2对原发性肝癌小鼠血管生成的影响

目的研究柴胡皂苷-b2(SS-b2)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的原发性肝癌小鼠血管生成的影响。方法雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、对照组(阿霉素1 mg·kg^-1)和低、中、高剂量实验组(SS-b21.5,3,6 mg·kg^-1),腹腔注射给药。实验结束时摘取肝、脾、胸腺称重,计算脏器指数;以Western Blot法检测肝血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达变化。结果与空白组相比,模型组的肝指数、胸腺指数、脾指数和白细胞计数均明显升高(均P<0.01);与模型组比较,高剂量实验组肝指数、胸腺指数、脾指数和白细胞计数均显著降低(均P<0.01)。Western Blot结果显示,模型组肝VEGF,MMP-2和MMP-9的表达分别为1.66±0.10,1.12±0.08和2.21±0.36,高剂量实验组分别为0.36±0.04,0.25±0.04和0.77±0.21,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论柴胡皂苷-b2对原发性肝癌的发生发展具有一定的抑制作用,其机制可能与其下调血管生成相关蛋白VEGF,MMP-2,MMP-9的表达有关。