柴胡皂苷A调节cAMP/PKA/CREB信号通路对失眠大鼠的改善作用及机制研究

目的基于cAMP/PKA/CREB通路探讨柴胡皂苷A对失眠大鼠的改善作用及机制。方法将75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A低剂量组(0.625 mg·kg^(-1))、柴胡皂苷A高剂量组(2.500 mg·kg^(-1))、艾司唑仑组(0.1 mg·kg^(-1)),每组15只。采用腹腔注射苯丙氨酸(PCPA,0.1 mg·kg^(-1))复制失眠大鼠模型。观察大鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相,记录慢波睡眠第1期(SWS1)、慢波睡眠第2期(SWS2)、快速眼球运动睡眠期(REMS)时长以及总睡眠时长(TST);qRT-PCR法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA及钟控基因Rev-erbα、RorαmRNA的表达水平;免疫荧光法测定海马组织NeuN表达水平;ELISA法测定脑组织中的cAMP水平;Western Blot法测定脑组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα及cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显缩短(P<0.05);神经元排列紊乱,NeuN阳性神经元IOD值明显降低(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,给药组大鼠的攻击性明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显延长(P<0.05);神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN阳性神经元IOD值明显升高(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论柴胡皂苷A可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路改善失眠大鼠的昼夜节律。

柴胡皂苷A调控PI3K/Akt通路对2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响

目的探究柴胡皂苷A对2型糖尿病(T2DM)小鼠胰岛素抵抗的作用及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调控机制。方法60只BALB/c小鼠分为对照组、模型组、阳性对照组(盐酸二甲双胍250 mg/kg)、柴胡皂苷A低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组。对照组饲喂普通饲料,其余5组饲喂高脂饲料。第5周开始,除对照组外其余5组给予腹腔注射链脲佐菌素(STZ),连续注射3 d,诱导T2DM模型。实验结束后进行胰岛素耐量实验计算血糖-时间曲线下面积(AUC);麻醉小鼠取血,检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMAIR);处死小鼠分离肝组织,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及游离脂肪酸(FFA)含量,Western印迹检测PI3K/Akt通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组肝组织结构异常,细胞排列紊乱,肝细胞出现空泡变性;AUC、FBG、FINS含量及HOMA-IR、肝组织中TG、TC、FFA含量明显升高(P<0.05);肝组织中PI3K表达和p-Akt/Akt显著降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组与柴胡皂苷A各剂量组肝组织病理损伤逐渐减轻,AUC、FBG、FINS含量及HOMA-IR、肝组织中TG、TC、FFA含量明显降低(P<0.05);肝组织中PI3K表达和p-Akt/Akt显著升高(P<0.05)。与阳性对照组比较,柴胡皂苷A高剂量组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论柴胡皂苷A可能通过激活PI3K/Akt信号通路,改善胰岛素抵抗,治疗T2DM。

柴胡皂苷A调节MLCK/MLC2信号通路对SAP大鼠肠损伤的影响

目的探讨柴胡皂苷A调节肌球蛋白轻链激酶(MLCK)/肌球蛋白轻链2(MLC2)信号通路对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠损伤的影响。方法随机选择10只大鼠作为假手术组,其余大鼠注射牛磺胆酸钠溶液构建SAP大鼠模型。将造模成功的SAP大鼠模型随机平分为SAP组、柴胡皂苷A组(腹腔注射10.0 mg/kg的柴胡皂苷A)、iE-DAP组(腹腔注射3.5 mg/kg MLCK/MLC2通路激活剂iE-DAP)、柴胡皂苷A+iE-DAP组(腹腔注射10.0 mg/kg柴胡皂苷A+3.5 mg/kg iE-DAP),每组均10只大鼠,每天1次,连续注射1周,假手术组和SAP组注射等量生理盐水。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色检测各组大鼠回肠组织病理形态变化。ELISA检测各组大鼠回肠组织中氧化应激指标水平。蛋白质免疫印迹检测肠道屏障相关蛋白及MLCK/MLC2通路相关蛋白表达。结果与SAP组相比,柴胡皂苷A组AMY、LIP、DAO、IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著降低,而iE-DAP组AMY、LIP、DAO、IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与SAP组相比,柴胡皂苷A组大鼠回肠组织结构得到改善,回肠组织病理评分显著降低(P<0.05)。与SAP组相比,柴胡皂苷A组谷胱甘肽、超氧化物歧化酶水平显著升高,丙二醛水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与SAP组相比,柴胡皂苷A组MLCK、p-MLC2/MLC2蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡皂苷A可能通过下调MLCK/MLC2信号通路对SAP大鼠肠损伤起到改善作用。

柴胡解表退热功效相关生物活性指标与柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量相关性分析

目的:寻找与柴胡解表退热功效相关的生物活性指标,并探明此功效的生物活性量化值与柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d (SSd)含量是否具有相关性。方法:采用临床煎药方式获得柴胡水煎液,并通过醇沉去除多糖和蛋白质等大分子物质,得到适宜体外实验的柴胡提取物。从抗炎、抗过敏、抗氧化应激及解热这4类与柴胡解表退热功效相关的体外模型中筛选量效关系明确的生物活性指标,并赋予各项指标不同的权重系数,对7个柴胡样品在各项指标上的作用强弱进行排序打分;分数与相应指标权重的积为该项得分;每项得分之和为该样品解表退热之生物活性量化值;采用CCK-8法检测细胞活力;Griss法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)水平;ELISA法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)及补体活化水平;铁离子还原能力法(FRAP)测定总抗氧化能力;高效液相色谱法测定柴胡中的SSa和SSd含量。结果:筛选得到4项关联柴胡解表退热功效的量效关系明确的生物活性指标,分别为脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌NO、LPS诱导THP-1细胞分泌TNF-α、总抗氧化能力及酵母多糖介导的替代途径补体活化。相关性分析显示,7个样品的SSa和SSd总量与解表退热的生物活性量化值不相关。结论:柴胡解表退热可能与其抑制促炎因子(NO)生成、压制内生性致热原(TNF-α)生成、抗氧化及抗补体C5a活化有关,而《中华人民共和国药典》 2020年版柴胡指标性成分SSa和SSd可能并非柴胡该功效的物质基础。

柴胡皂苷A抗抑郁的靶点识别及作用研究

中药柴胡具有改善抑郁患者临床治疗效果的作用,柴胡皂苷A(saikosaponin A,SSA)是柴胡主要药效成分,本研究以SSA为研究对象,利用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型小鼠悬尾(tail suspension test,TST)和强迫游泳实验(forced swimming test,FST)明确SSA的抗抑郁作用。利用计算机分子对接技术分析并验证SSA的作用靶点,并利用细胞热转移测定实验(cellular thermal shift assay,CETSA)和药物亲和力靶稳定性实验(drug affinity responsive target stability,DARTS)验证SSA的靶标;采用Western blotting等技术研究SSA的抗抑郁作用机制。CUMS模型TST和FST结果表明,与模型组相比,SSA能够显著缩短小鼠的不动时间,表明SSA具有显著的抗抑郁作用。计算机分子对接证明了SSA与催产素受体(oxytocin receptor,OXTR)结合效果较好,表明SSA抗抑郁的作用靶点可能是OXTR。CETSA结果表明在一系列温度梯度处理下,SSA能够明显延缓OXTR的热变性;DARTS实验结果表明,在一系列酶浓度梯度处理下,SSA能够显著降低OXTR对蛋白质水解的敏感性,表明SSA抗抑郁的作用靶点是OXTR。此外,SSA对OXTR下游的ERK通路没有激活作用。本研究表明SSA发挥抗抑郁作用的靶点可能为OXTR,为抑郁症等精神疾病的临床研究治疗和新药开发提供必要的理论与参考依据。

维生素A修饰柴胡皂苷a/d脂质体的制备及体内外释药评价

目的制备维生素A(vitamin A,VA)修饰柴胡皂苷(saikosaponin,SS)a和SSd靶向脂质体并考察其体内外释药行为。方法以包封率为指标,在明确大豆磷脂CS-95、胆固醇琥珀酰单酯{4-[(3β)-Cholest-5-en-3-yloxy]-4-oxobutanoic acid,CHEM}及靶向配体二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000-维生素A(DSPE-PEG-VA)最佳比例的基础上,通过薄膜分散超声法包载SSa/SSd后,结合后插法将DSPE-PEG-VA搭载在脂质体上,构建VA修饰SSa/SSd脂质体递药体系(VA-SSa/SSd-Lips)。采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、动态光散射法测定脂质体形态、粒径及电位;鱼精蛋白沉淀法考察脂质体包封率及载药量;2%兔红细胞混悬液考察VA-SSa/SSd-Lips溶血性;正常大鼠尾静脉注射(1 mg/kg)VA-SSa/SSd-Lips溶液、SSa/SSd-Lips溶液和SSa/SSd溶液后,在不同时间点眼眶取血,测定各时间点大鼠血浆中SSa和SSd的药物浓度,利用DAS 3.0软件计算药动学参数;小动物活体成像仪观测裸鼠尾静脉注射VA-DiR-Lips后体内荧光分布。结果VA-SSa/SSd-Lips平均粒径为(142.43±0.60)nm,聚合物分散性指数(polymer dispersity index,PDI)为(0.31±0.052),Zeta电位为(-14.15±0.74)mV,SSa和SSd的包封率均达90%以上;体外释放行为表明VA-SSa/SSd-Lips具有一定的缓释效果;体外溶血性评价表明,SSa和SSd由脂质体包载后溶血毒性显著降低;VA-SSa/SSd-Lips的SSa和SSd药时曲线下面积(area under the curve,AUC)分别是SSa/SSd溶液的1.53(SSa)倍和1.99(SSd)倍,生物利用度显著提高;VA-SSa/SSd-Lips的t 1/2分别是SSa/SSd溶液的2.46(SSa)倍和3.19(SSd)倍,SSa/SSd-Lips的t 1/2分别是柴胡皂苷a和柴胡皂苷d混合溶液(SSa/SSd-Sol)组的0.89(SSa)倍和1.25(SSd)倍。VA-DiR-Lips在活体成像中具有良好的肝脏靶向性能。结论本研究设计并构建的VA修饰脂质体VA-SSa/SSd-Lips的粒径、包封率、载药量及体内外释药行为均达到了本文的设计目的。

柴胡皂苷A治疗高脂血症作用分子机制的生物信息学分析

目的 利用生物信息学方法探讨柴胡皂苷A治疗高脂血症的分子机理。方法 利用小分子靶点在线预测分析系统筛选柴胡皂苷A的作用靶点,注释靶蛋白所属GO生物学过程及KEGG通路,利用STRING 11建立靶蛋白相互作用关系网络,利用Cytoscape 3.7分析关键节点蛋白、核心作用模块及其功能。随后,以HepG2细胞为模型,利用qPCR验证生物信息分析结果的可靠性。结果 靶点蛋白涉及多种生物学过程及信号转导通路,其中与高脂血症密切相关的通路包括PI3K-Akt信号通路、Jak-STAT信号通路、钙离子信号通路、溶血磷脂与LPA受体以及鞘磷脂信号通路。qPCR检测结果表明,柴胡皂苷A能够促进HepG2细胞中STAT3、GRB2、PIK3CA、EGFR基因的表达并抑制SOCS1基因的表达,其与生物信息分析结果相吻合。结论 柴胡皂苷A能够通过多种途径调节脂质代谢,发挥治疗高脂血症功效。

柴胡皂苷A对噪声诱发听力损失小鼠受损毛细胞及氧化应激的影响

【目的】探讨柴胡皂苷A对噪声诱发听力损失小鼠的干预作用及机制。【方法】将45只C57BL/6小鼠随机分为正常组、噪声暴露组、柴胡皂苷A组,每组15只。柴胡皂苷A组接受噪声暴露的同时给予柴胡皂苷A 10.0 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃;噪声暴露组接受噪声暴露,给予等体积生理盐水灌胃;正常组不接受噪声暴露,给予等体积生理盐水灌胃。每日1次灌胃,连续4周。给药结束后,检测小鼠听力脑干反应(ABR),采用Hoechst荧光染色法和扫描电镜分别对应观察耳蜗毛细胞数量、形态,采用8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)免疫荧光染色法观察耳蜗组织氧化应激损伤情况,Western Blot法检测耳蜗组织4-羟基壬烯醛(4-HNE)及3-硝基酪氨酸(3-NT)表达。【结果】(1)与正常组比较,噪声暴露组小鼠ABR域值明显增加(P<0.001);与噪声暴露组比较,柴胡皂苷A组小鼠ABR域值明显降低(P<0.01)。(2)正常组小鼠耳蜗毛细胞核完整、纤毛排列有序;噪声暴露组耳蜗毛细胞核部分丢失,纤毛出现倾斜、部分破裂;柴胡皂苷A组耳蜗毛细胞核完整性、纤毛形态较噪声暴露组得到明显改善。(3)与正常组比较,噪声暴露组小鼠耳蜗毛细胞中8-OHdG及耳蜗组织4-HNE、3-NT表达水平明显升高(P<0.001);与噪声暴露组比较,柴胡皂苷A组小鼠耳蜗毛细胞中8-OHdG及耳蜗组织4-HNE、3-NT表达水平明显降低(P<0.01)。【结论】柴胡皂苷A可有效干预小鼠噪声性听力损失,其机制与抑制氧化应激、保护耳蜗毛细胞有关。

柴胡皂苷A对噪音诱发耳鸣小鼠抑郁的干预作用及机制

目的探究柴胡皂苷A对噪音诱发耳鸣(Tinnitus)小鼠模型的干预作用及机制。方法将50只小鼠随机分为对照组(Control组)、噪音诱发耳鸣小鼠模型组(BBN组)、BBN组基础上分别灌胃10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg柴胡皂苷A(SSA)的SSA-L组、SSA-M组和SSA-H组,每组10只。检测小鼠耳鸣行为;通过旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验评估小鼠的抑郁样行为;ABR阈值测定小鼠听力;RTqPCR和Western blot检测小鼠听觉皮层中IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达。结果和Control组相比,BBN组小鼠在噪声暴露2 h后3 d、14 d和28 d时GPIAS%值降低(P<0.05);和BBN组相比,SSA-L组、SSAM组和SSA-H组小鼠在噪声暴露2 h后3 d、14 d和28 d时GPIAS%值升高,且呈剂量依赖(P<0.05)。和Control组相比,BBN组小鼠进入中央区时间和距离、进入开放臂次数和时间均减少,不动时间及Click和8、16、32 kHz声刺激下ABR阈值均升高(P<0.05);和BBN组相比,SSA-L组、SSA-M组和SSA-H组小鼠进入中央区时间和距离、进入开放臂次数和时间均增加,不动时间及Click和8、16、32 kHz声刺激下ABR阈值均降低(P<0.05)。和Control组相比,BBN组小鼠听觉皮层中IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);和BBN组相比,SSA-L组、SSA-M组和SSA-H组小鼠听觉皮层中IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论柴胡皂苷A可改善噪声诱导耳鸣小鼠抑郁行为和听力,其可能和抑制耳鸣小鼠听觉皮层炎症因子密切相关。

柴胡皂苷a对癫痫神经保护及神经元兴奋性的影响

目的 研究柴胡皂苷a(SSa)对癫痫大鼠的神经保护及对海马神经元兴奋性的影响及其作用机制。方法 用氯化锂-匹鲁卡品建立大鼠癫痫模型,将大鼠随机分为模型组、丙戊酸钠(VPA)组、SSa高剂量组和SSa低剂量组,另设15只未造模大鼠作为正常组,每组15只。连续给药4周,Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力,全细胞膜片钳技术分析海马区神经元的动作电位变化,HE染色观察海马区神经元病变,试剂盒检测大鼠海马组织一氧化氮合酶(NOS)活力及一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3和蛋白激酶G(PKG)蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠Racine评分显著升高,逃避潜伏期显著延长,60 s内穿越过平台的次数和平台象限的停留时间减少,海马神经元兴奋性显著提高,海马区神经元有明显损伤,海马组织NOS活力、NO和cGMP含量及Bcl2、PKG蛋白表达降低,Bax、Caspase-3增加(P<0.05)。与模型组比较,SSa各剂量组大鼠Racine评分降低,逃避潜伏期缩短,60 s内穿越过平台的次数和平台象限的停留时间增加,海马神经元兴奋性降低,海马区神经元损伤减轻,海马组织NOS活力、NO和cGMP含量及Bcl2、PKG蛋白表达增加,Bax、Caspase-3降低(P<0.05)。结论 SSa对癫痫大鼠具有神经保护作用,并可降低海马神经元的兴奋性,其机制可能与促进NO生成并激活cGMP/PKG通路有关。

基于Nrf2/HO-1通路的柴胡皂苷A对A549细胞顺铂敏感性的影响

目的观察柴胡皂苷A与顺铂联用对非小细胞肺癌A549细胞的影响,并探讨其相关作用机制。方法将A549细胞分为对照组、顺铂组、柴胡皂苷A组及联用组(顺铂+柴胡皂苷A),分别加入相应药物培养24 h,CCK8法检测细胞存活率,克隆形成实验检测细胞增殖,C11-BODIPY荧光探针检测细胞脂质过氧化水平,FeRhonox-1荧光探针检测Fe^(2+)含量,谷胱甘肽(GSH)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分别检测细胞GSH和上清液LDH含量,RT-PCR和Western blot检测细胞溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、转铁蛋白(Transferrin)、溶质载体家族40成员1(SLC40A1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,柴胡皂苷A组和联用组细胞存活率显著降低,克隆数目显著减少(P<0.05,P<0.01),细胞内脂质过氧化水平和Fe^(2+)含量显著升高(P<0.01),细胞内GSH含量显著减少(P<0.05),细胞上清液LDH含量显著增加(P<0.01),SLC7A11、GPX4、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),联用组细胞Transferrin mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),顺铂组细胞SLC40A1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与顺铂组比较,联用组细胞存活率显著降低,克隆数目显著减少(P<0.01),细胞内脂质过氧化水平和Fe^(2+)含量显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞内GSH含量显著减少(P<0.01),细胞上清液LDH含量显著增加(P<0.01),SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),Transferrin mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论柴胡皂苷A与顺铂联用能诱导肺癌A549细胞铁死亡,其机制与提高细胞内脂质过氧化水平及Fe^(2+)浓度,降低GSH含量及SLC7A11、GPX4、SLC40A1表达,上调Transferrin表达,抑制Nrf2/HO-1通路有关。

柴胡皂苷A促进SD大鼠肛旁创面模型创伤愈合的作用机制

目的:探讨柴胡皂苷A对SD大鼠肛旁创面模型创伤愈合的影响及其可能的作用机制。方法:将80只SD大鼠随机分为正常组、对照组、阳性组和实验组,每组各20只。正常组不进行任何处理,对照组、阳性组和实验组均进行肛肠手术,制作肛旁创面模型。实验组在手术后每天灌胃给予柴胡皂苷A(50 mg/kg),阳性组则在术后给予重组人表皮生长因子(rhEGF),1喷/d(200 IU/喷);对照组灌胃等量的生理盐水。分别于术后第3、7、14天取血清,检测各组大鼠血清IL-6、IL-10、TNF-α和血清PGE2、NO水平;同时取创面组织,观察各组创面愈合率,通过光镜观察创面上皮爬行、肉芽组织增生、胶原纤维、成纤维细胞、炎症细胞浸润、组织水肿等愈合及炎症情况;电镜下观察各组大鼠新生肉芽组织中血管内皮细胞紧密连接及胶原纤维合成、分布情况。结果:对照组、阳性组和实验组大鼠血清IL-6、TNF-α、PGE2、NO水平术后第3、7、14天逐渐降低,IL-10水平则逐渐上升(P<0.05)。与正常组相比,对照组大鼠血清IL-6、TNF-α、PGE2、NO水平在术后第3、7、14天均明显升高(P<0.05),IL-10水平在术后第3、7、14天明显降低(P<0.05)。与对照组相比,阳性组和实验组大鼠血清IL-6、TNF-α、PGE2、NO水平在术后第3、7、14天均明显降低(P<0.05),IL-10水平在术后第3、7、14天均明显升高(P<0.05)。对照组、阳性组和实验组大鼠创面愈合率术后第3、7、14天逐渐上升(P<0.05);与对照组相比,阳性组和实验组大鼠创面愈合率高(P<0.05)。光镜下可见实验组大鼠创面上皮爬行快,肉芽组织增生良好,胶原纤维丰富,成纤维细胞增多,炎症细胞浸润少,组织水肿轻;电镜下可见实验组大鼠新生肉芽组织中血管内皮细胞紧密连接完整,胶原纤维合成多,分布均匀。结论:柴胡皂苷A能够促进SD大鼠肛旁创面模型创伤愈合,其作用机制可能与抑制炎症反应、增强免疫调节、促进血管生成和胶原纤维合成有关。

酶水解柴胡皂苷B_(1)制备稀有前柴胡皂苷A的研究

目的通过酶水解柴胡皂苷B_(1)获取中药活性成分前柴胡皂苷A,并构建关键技术。方法以单因素试验考察水解酶、缓冲液pH值、酶/底物质量比、反应温度和反应时间等影响因素,并通过响应面实验设计对酶水解条件进行优化;此后,利用LC-MS、^(1)H-NMR、13 C-NMR确定产物的化学结构。结果柴胡皂苷B_(1)的最佳水解酶为蜗牛酶,在0.20 mol/L HAc-NaAC缓冲液(pH 4.5)中,当酶与柴胡皂苷B_(1)的质量比为30∶1时,于56℃下反应33 h后,水解率高达99.1%,产物经鉴定为前柴胡皂苷A。结论本研究构建的酶水解关键技术获取前柴胡皂苷A更便捷,不产生柴胡皂苷元副产物,反应过程中不使用无机酸,清洁环保,可为大量制备前柴胡皂苷A以开展药理药效研究奠定基础。

基于肝脏代谢组学研究柴胡皂苷A对小鼠酒精性脂肪肝保护作用

目的:基于代谢组学探讨柴胡皂苷A(SSa)改善酒精饮食诱导下小鼠酒精性脂肪肝(AFL)的作用机制。方法:将C57BL/6J雄性小鼠分为饮食对照(NC)组、模型(EtOH)组、不同剂量SSa干预(Et+SA-L、Et+SA-M、Et+SA-H,5、10、20 mg·kg^(-1))组,每组6只。除对照组外,各组小鼠使用含5%乙醇的流质饮食诱导10 d构建AFL模型,自乙醇饲料喂养第4天起给药至造模结束。应用酶联免疫吸附法检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和小鼠肝脏丙二醛(MDA)含量水平。采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织形态学变化。采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱法(UPLC-Q-Exactive MS)建立检测NC组、EtOH组、Et-SA-H组小鼠肝脏代谢谱,以偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)分析模式识别,以T检验、差异倍数筛选潜在生物标志物,并借助MetaboAnalyst数据库富集代谢通路。结果:SSa减轻AFL小鼠肝体比降低AFL小鼠血清中ALT、AST、TC、TG和MDA的含量,缓解AFL小鼠肝脂肪变性。NC组、EtOH组及Et+SA-H组的肝脏代谢组学分析显示,有5个与SSa调控AFL作用相关的潜在生物标志物,主要涉及甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定生物合成、苯丙氨酸代谢、烟酸盐与烟酰胺代谢、组氨酸代谢、脂肪酸生物合成和细胞色素P450对外源物的代谢等途径。结论:SSa调控AFL小鼠肝脏脂质代谢、降低肝脏脂肪变性、改善肝脏功能,其机制与肝脏TG代谢和肝细胞微粒体乙醇氧化代谢密切相关。

柴胡皂苷A·D与柴胡复方药理活性和机制的研究进展

柴胡是我国的传统中药,具有抗癌、抗炎、保肝、免疫调节等作用,主要活性成分为柴胡皂苷A(SSa)和柴胡皂苷D(SSd)。近年来,针对柴胡皂苷及柴胡复方的药理研究越发深入。二者的药理活性和作用机制有相同或相近之处,但柴胡皂苷如何在复方中发挥药理作用尚不明确。概述了近几年SSa和SSd及以柴胡为君药的复方的主要药理作用及作用机制,探讨了柴胡皂苷单体和柴胡复方在药理活性、作用机制之间的共性与联系,为进一步深入研究单一化学成分与中药复方之间的药理作用关系提供基础。

柴胡醋制前后柴胡皂苷a、b_2、c、d的LC-MS/MS法测定及比较

采用LC-MS/MS法对醋制前后柴胡中的Ⅰ型柴胡皂苷a、c、d与Ⅱ型柴胡皂苷b2进行含量测定,色谱柱为KinetexTMC18(50 mm×4.6 mm,2.6μm),流动相为水-乙腈-甲醇三元梯度洗脱;检测系统为电喷雾离子源(ESI)-三重四级杆质谱仪,ESI负离子模式检测,待测成分与内标均采用负离子加合物作为选择性反应监测(SRM)的前体离子,以[M+HCOO]-/[M-H]-作为SRM检测离子对。方法学验证结果显示,所建立的方法灵敏度高、专属性好,可作为柴胡生品及醋炙品的质量控制方法。含量测定结果表明,醋制过程引发了由Ⅰ型柴胡皂苷向Ⅱ型的转化,醋制后柴胡皂苷b2的含量明显增加,对柴胡醋炙品的质量控制应同时考虑对Ⅰ、Ⅱ型柴胡皂苷柴胡皂苷进行测定。

23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d含量的RP-HPLC测定

目的:建立RP-HPLC法,分离和测定中国23种61个产地的柴胡属植物样品中柴胡皂苷a、c、d的含量。方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min～1,检测波长210 nm。结果:不同品种柴胡以及相同品种、不同产地柴胡中的柴胡皂苷a、c、d含量差异悬殊。结论:本研究所建立的HPLC方法适用于柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d定量分析,结果准确可靠。

柴胡皂苷A对抑郁模型大鼠脑中单胺类神经递质及其代谢产物含量的影响

在酸性条件下,利用高效液相色谱法研究了柴胡皂苷A对抑郁模型大鼠脑中单胺类神经递质及其代谢物含量的影响.实验结果表明,柴胡皂苷A可使抑郁型大鼠脑中的高香草酸、去甲肾上腺素、多巴胺及5-羟色胺的含量升高,这一结果有利于对柴胡皂苷治疗抑郁症的物质基础及相关机理进行更深入了解.

柴胡皂苷A对抑郁模型大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用

目的探讨柴胡皂苷A对抑郁模型大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用及机制。方法 60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组、中药组;采用慢性不可预见性应激刺激结合孤养方式建立抑郁模型;利用敞箱实验与糖水偏爱度检测大鼠行为学改变;采用电镜观察大鼠脑海马区超微结构变化;应用免疫组化与RT-PCR检测大鼠海马区脑源性神经生长因子(BDNF)蛋白及基因的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组水平运动得分、垂直运动得分和糖水偏爱度明显降低(P<0.01,P<0.001),与模型组比较,西药组和中药组水平运动得分、垂直运动得分和糖水偏爱度均明显升高(P<0.05,P<0.001);与正常对照组相比,模型组大鼠海马区BDNF mRNA与蛋白表达明显下调(P<0.05),与模型组相比,西药组、中药组海马区BDNF mRNA与蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论柴胡皂苷A抗抑郁症的作用机制可能与其促进海马区BDNF蛋白与mRNA的活性和表达,进而减少神经细胞凋亡有关。

HPLC-DAD-TOF/MS法测定小柴胡汤中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸的含量

目的:建立小柴胡汤药材中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸含量测定的方法。方法:采用HPLC-DAD-TOF/MS,Agilent Zorbax XDB-C18柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm),水(0.025%甲酸)-甲醇(0.025%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速为0.15 ml·min^(-1),柱温为25℃,进样量0.25μl;质谱条件为电喷雾电离源(ESI),正离子监测,毛细管电压为4000 V,干燥气流速为10.0 L·min^(-1),干燥气温度为350℃,雾化器压力为40 psi(275792 Pa),裂解器电压为200 V,用于定量分析的柴胡皂苷a离子为m/z 803.4200～803.4900。黄芩苷和甘草酸检测波长分别是275 nm和250 nm。结果:柴胡皂苷a线性范围为0.2116～127.3μg·ml^(-1),线性方程为Y=461182X+2000000(r=0.9990)。黄芩苷线性范围为0.758～455μg·ml^(-1),线性方程Y=5.9789X-27.418(r=0.9995)。甘草酸单铵盐线性范围为2.268-136.8μg·ml^(-1),线性方程Y=0.9499X- 1.0464(r=0.9995)。高、中、低浓度的柴胡皂苷a平均回收率分别为(95.54±1.60)%、(99.39±3.97)%、(103.8±1.97)%和黄芩苷平均回收率分别为(102.3±0.47)%、(100.9±1.32)%、(97.15±2.10)%及甘草酸单铵盐平均回收率分别为(102.6±1.96)%、(100.3±3.12)%、(97.75±1.25)%。日内、日间RSD均<5%,21 d内稳定性试验结果表明RSD均<5%。小柴胡汤中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸的含量分别为0.7500、10.65和2.572 mg/g。结论:该方法简便、灵敏、快速、准确,适用于小柴胡汤的质量控制。