基于细胞代谢组学的柴胡皂苷b2对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的研究柴胡皂苷b2(SSb2)对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法①将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),CORT(100~800μmol·L^(-1)孵育24 h)组和SSb2(1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100μmol·L^(-1)孵育24 h)组,MTT法检测细胞存活率。②将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),模型组(CORT 400μmol·L^(-1)孵育24 h)和模型+SSb2组(SSb21.5625,3.125,6.25,12.5和25μmol·L^(-1)预处理3 h,去上清,然后加入CORT 400μmol·L^(-1)及对应浓度SSb2共孵育24 h)。MTT法检测细胞存活率,微板法检测PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率。③将细胞分为细胞对照组、模型组和模型+SSb212.5μmol·L^(-1)组,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)的代谢组学技术检测PC12细胞代谢轮廓变化;比色法检测谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性。结果①与细胞对照组相比,当CORT浓度为400μmol·L^(-1)时,细胞存活率降低至(55±6)%(P<0.01);SSb2浓度>50μmol·L^(-1)时,对PC12细胞有显著的细胞毒性(P<0.01)。②与细胞对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),LDH释放率显著降低(P<0.01)。③与细胞对照组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。代谢组学结果表明,SSb2能显著回调谷氨酸、肌酸、N-乙酰天冬氨酸、L-酪氨酸、柠檬酸、L-异亮氨酸、乳酸、谷氨酰胺和胆碱9个差异代谢物。对SSb2调控的关键代谢物进一步富集分析表明,SSb2主要影响5条代谢通路,即D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,酪氨酸代谢和精氨酸生物合成。与细胞对照组相比,模型组谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞谷氨酸含量(P<0.01)和谷氨酰胺酶活性显著升高(P<0.05)。结论SSb2对CORT诱导的PC12细胞损伤具有神经保护作用,其机制与抑制细胞凋亡和调节代谢紊乱有关。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10 mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P<0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达有关。

柴胡皂苷B通过Nrf2/ARE信号缓解Caco-2细胞氧化损伤

目的探讨柴胡皂苷B(saikosaponin B,SSB)对棕榈酸(palmitic acid,PA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS联合诱导的人结直肠腺癌细胞(Caco-2)屏障损伤的保护作用及潜在机制。方法利用Caco-2细胞构建肠道屏障模型,采用随机数字表法将细胞分为对照组(CON组,n=6),模型组(PA+LPS组,n=6)和柴胡皂苷B干预组(PA+LPS+SSB组,n=6),通过测量跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)值和紧密连接蛋白的表达水平,评价SSB对Caco-2细胞屏障损伤的保护作用。通过检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化物含量评估细胞氧化压力。通过定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测SSB对Nrf2/ARE信号通路相关基因及蛋白的表达水平的影响。通过敲降Nrf2验证SSB改善细胞屏障功能是否通过Nrf2/ARE途径。结果PA+LPS+SSB组Caco-2细胞的TEER值、ZO-1和Occludin-1的蛋白水平显著高于PA+LPS组(P<0.05)。PA+LPS组细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)、蛋白羰基含量(protein carbonyl content,PCC)和ROS含量均显著高于对照组(P<0.05),PA+LPS+SSB组的4-HNE、MDA、ROS含量和PCC均显著低于PA+LPS组(P<0.05)。PA+LPS+SSB组细胞内Nrf2和p-Nrf2的蛋白水平、Nqo1和Ho-1的m RNA水平、过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)酶活性均显著高于PA+LPS组(P<0.05)。PA+LPS+SSB^(siNrf2)组细胞中ZO-1和Occludin-1的蛋白水平和转录水平均显著低于PA+LPS+SSB组(P<0.05),ROS、4-HNE、MDA含量和PCC均显著高于PA+LPS+SSB组(P<0.05)。结论SSB通过激活Nrf2/ARE信号通路增加了肠上皮细胞的抗氧化能力,抑制了PA和LPS引起的Caco-2细胞氧化应激和屏障损伤,对肠上皮细胞具有良好保护作用。

柴胡皂苷b1缓解CCl_(4)诱导急性肝损伤的作用机制研究

目的:研究柴胡皂苷b1(SSb1)对CCl_(4)诱导急性肝损伤的保护作用。方法:将雄性C57BL/6小鼠按体质量随机分为空白组、模型组、阳性药组(联苯双酯,150 mg/kg)、SSb1低剂量组(SSb1-L,2.5 mg/kg)和SSb1高剂量组(SSb1-H,10 mg/kg),每组8只。阳性药组每天灌胃给药;SSb1-L和SSb1-H组每天腹腔注射给药,每日1次,连续给药7 d;空白组和模型组小鼠给予等体积的生理盐水。第7天给药1 h后,除空白组外,其余各组小鼠腹腔注射0.2%CCl_(4)橄榄油(10 mL/kg)诱导复制急性肝损伤小鼠模型。造模17 h后,收集血清和肝组织。检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,测定小鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及相关炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平,检测小鼠肝组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、核转录因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达水平。结果:SSb1可显著降低急性肝损伤小鼠的肝脏指数,减轻肝组织病理损伤,降低急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、IL-6、IL-1β及TNF-α水平。SSb1也可抑制肝组织中相关炎症因子的表达,调节MDA和SOD的活性,调控炎症因子和氧化应激相关基因的转录。结论:SSb1可能通过调节炎症和氧化应激反应从而发挥对急性肝损伤小鼠的保护作用。

HPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷b_2的含量

目的建立小柴胡颗粒中柴胡皂苷b2含量的测定方法。方法采用HPLC法，phenomenexLuna色谱柱，以乙腈-0．2％二乙胺（35：65）为流动相，流速为1．0mL·min-1，柱温30℃，检测波长254nm。结果柴胡皂苷b2线性范围0．3632～3．6320μg，R2=1．00；平均加样回收率为102．2％，RSD为2．5％。结论该方法准确、稳定，重现性好，可用于小柴胡颗粒的质量控制。

柴胡皂苷b_2降解产物结构研究

目的研究柴胡皂苷b2降解产物的结构。方法采用各种分离技术和光谱技术对柴胡皂苷b2降解产物的结构进行分离和结构鉴定。结果柴胡皂苷b2在保存过程中形成的降解产物的结构为Saikogenin D。结论为进一步研究其降解的过程动力学过程,进而更好地保存柴胡皂苷b2奠定基础。

柴胡皂苷B2对LPS诱导的脓毒症肺损伤氧化应激和炎性反应的影响研究

目的探讨柴胡皂苷B2对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症肺损伤氧化应激和炎性反应的影响。方法将50只SD大鼠分为空白对照组、模型组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组。空白对照组大鼠腹腔内注射等体积生理盐水;模型组大鼠腹腔注射10 mg/kg的LPS;柴胡皂苷B2低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠腹腔注射10 mg/kg的LPS后,分别注射5、10、20 mg/kg的柴胡皂苷。末次给药24 h后,麻醉处死大鼠,检测肺组织湿干比;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡;Western blotting检测肺组织B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2同源二聚体X蛋白(Bax)、p53蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果与空白对照组相比,模型组内肺组织湿干比、细胞凋亡率、Bax、p53蛋白表达、MDA含量、TNF-α、IL1β、IL-6含量明显升高,Bcl-2蛋白表达、SOD活性、GSH-Px活性明显降低。与模型组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组内肺组织湿干比、细胞凋亡率、Bax、p53蛋白、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6明显降低,Bcl-2蛋白、SOD活性、GSH-Px活性明显升高。结论柴胡皂苷B2能减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠氧化应激和炎性反应,并减少细胞的凋亡。

UPLC法测定加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2含量研究

目的:建立加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2的含量测定方法。方法:采用UPLC法,ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相:乙腈(A)-水(B);流速:0.3 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:30℃。结果:柴胡皂苷b2线性范围为2.902~87.06μg(R2=0.9999),加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2平均加样回收率为100.65%、102.05%,RSD分别为1.35%、2.61%,不同批次提取物至制剂柴胡皂苷b2转移率均在95%~110%。结论:该方法简便、稳定、快速、重现性好,可用于加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2的含量测定,且方法准确可靠,可表征工艺稳定性,为完善加味逍遥片的质量评价体系提供依据。

柴胡皂苷B2(Saikosaponin B2)对四氯化碳损伤HepG2细胞的保护作用

目的初步探讨柴胡皂苷B2(SSB2)对CCl4肝细胞损伤的保护作用。方法用CCl4诱肝HepG2细胞损伤,设立正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度SSB2保护组;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力以及流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的方法,观察SSB2对CCl4诱导的肝细胞损伤的保护作用。结果 MTT检测显示SSB2保护组细胞活性明显高于损伤组,以SSB2浓度为100μg/mL保护组细胞活性最高;流式细胞仪测定细胞凋亡率显示SSB2保护组(终浓度为100μg/mL)凋亡率明显低于CC14损伤组,细胞周期各期细胞分布比例无明显变化。结论 SSB2对CCl4诱导的HepG2细胞损伤具有保护作用。

薄层扫描法测定小儿解热宁口服液中柴胡皂苷b_2的含量

目的 :建立小儿解热宁口服液的含量测定方法。方法 :采用薄层扫描法对小儿解热宁口服液中柴胡皂苷b2 进行定量。结果 :柴胡皂苷b2 在 0 .6～ 2 .8μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系 ,平均回收率为 97.0 9% ,RSD =1.2 4 % (n =5 )。结论 :本法简便、快速、准确 ,可作为小儿解热宁口服液质量控制的方法。

柴胡口服液HPLC指纹图谱及柴胡皂苷b2的含量检测分析

目的 根据柴胡口服液HPLC指纹图谱及柴胡皂苷b2的含量,提供评价质量的方法。方法 根据HPLC方法对5批柴胡口服液进行测定,并根据中药色谱指纹图谱相似度评价系统,建立柴胡口服液标准指纹图谱,并测定每批制剂柴胡皂苷b2的含量以及制剂的相似度。结果 5批柴胡口服液的HPLC指纹图谱共有5个峰,相似度〉0.945,柴胡皂苷b2在0.0395~0.7935μg显示存在良好的线性关系。结论 柴胡口服液制剂与标准指纹图谱对比评价质,操作方便,可有效用于评价柴胡口服液的质量。

柴胡皂苷b2通过调控沉默信息调节因子6介导的糖代谢通路减轻二乙基亚硝胺诱导的小鼠原发性肝癌

目的探讨柴胡皂苷b2(SSb2)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的原发性肝癌小鼠的肝癌抑制作用及对沉默信息调节因子6(SIRT6)介导的糖代谢通路的影响。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组、肝癌模型组(DEN 50 mg·kg^(-1))、模型+SSb21.5,3.0和6.0 mg·kg^(-1)组及模型+多柔比星(DOX)1 mg·kg^(-1)组。除正常对照组外,其余组小鼠ip给予DEN 50 mg·kg^(-1),每周2次;第5周开始DEN给药减为每周1次,同时按分组给予SSb2和DOX,正常对照组在建模期间给予等体积生理盐水,给药持续19周。第19周末,收集小鼠血清和肝。计算肝指数,采用HE染色观察肝组织病理变化,试剂盒检测血清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶(LDH)和甲胎蛋白(AFP)水平;Western印迹法检测肝组织中SIRT6、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸脱氢酶激酶同工酶1(PDK1)和乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠肝指数明显升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各剂量组和模型+DOX组小鼠肝指数显著降低(P<0.01)。HE染色结果显示,模型组肝细胞异形性明显,癌巢组织多发,模型+SSb26.0 mg·kg^(-1)组和模型+DOX组细胞坏死增多,异形核及癌巢减少。血清指标结果显示,与正常对照组相比,模型组血清中GOT,GPT,LDH和AFP水平均显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb23.0和6.0 mg·kg^(-1)组及模型+DOX组小鼠血清中GOT,GPT,LDH和AFP水平均显著降低(P<0.01),模型+SSb21.5 mg·kg^(-1)组GOT,LDH和AFP水平显著降低(P<0.01)。Western印迹结果显示,与正常对照组相比,模型组肝组织中SIRT6蛋白的表达显著降低(P<0.01),HIF-1α,GLUT1,PDK1和LDHA蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各剂量组和模型+DOX组肝组织SIRT6蛋白的表达显著升高(P<0.01),而模型+SSb23.0和6.0 mg·kg^(-1)组及模型+DOX组肝组织HIF-1α,GLUT1,PDK1和LDHA蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),模型+SSb21.5 mg·kg^(-1)组HIF-1α,GLUT1和LDHA蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论SSb2对DEN诱导的原发性肝癌小鼠的肝癌发展有抑制作用,其作用与其调控SIRT6介导的糖代谢通路有关。

柴胡皂苷b2通过抑制线粒体凋亡通路减轻过氧化氢诱导的L-02细胞损伤

目的探讨柴胡皂苷b2(SS-b2)对过氧化氢(H2O_2)诱导的L-02细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法将L-02细胞分为正常对照组、模型组(H2O_2100μmol·L^(-1)孵育12 h)和SS-b2组(SS-b212.5,25,50和100 mg·L^(-1)孵育24 h后,再加入H2O_2继续孵育12 h)。MTT法检测L-02细胞存活率;罗丹明123染色检测L-02细胞线粒体膜电位变化;Hoechst33258荧光染色法和流式细胞术检测L-02细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测线粒体凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素c(Cyt-c)、胱天蛋白酶9和3表达水平。结果与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01);细胞线粒体膜电位水平降低(P<0.01)且细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Bax(P<0.01)、Cyt-c(P<0.01)、胱天蛋白酶9(P<0.05)和3(P<0.05)蛋白表达水平显著升高,而Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,SS-b2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性(r=0.9804,P<0.05);线粒体膜电位水平升高(P<0.01);Hoechst染色和流式细胞检测结果均显示,细胞凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01);Bax、Cyt-c、胱天蛋白酶9和3蛋白水平显著下调(P<0.01),且Bcl-2蛋白水平上调(P<0.01)。结论 SS-b2可减轻H2O_2诱导的L-02细胞损伤,其机制与抑制线粒体凋亡有关。

柴胡皂苷b2对大鼠体内柴胡皂苷a肝组织分布的影响

研究柴胡皂苷b2对柴胡皂苷a在大鼠肝脏组织中分布的影响。将Wistar大鼠随机分为两组,分别灌胃给药柴胡皂苷a(25mg/kg)和柴胡皂苷a+柴胡皂苷b2(25+3.125mg/kg)混合药液,然后于0.25、0.5、1、2、4h收集肝脏,肝组织匀浆经液液萃取处理后通过LC-MS/MS法测定肝组织中柴胡皂苷a的含量。给药后0.5h,柴胡皂苷a在肝组织中分布量最大,并随时间延长其含量迅速下降。柴胡皂苷b2显著增加0.5h时柴胡皂苷a在肝组织的累积量,而对其他时间点柴胡皂苷a在肝组织的累积量无显著性影响。本研究表明柴胡皂苷b2增加了柴胡皂苷a在大鼠肝脏的分布,可能对药效产生影响。

柴胡皂苷b2对肝癌细胞增殖的影响及机制

目的研究柴胡皂苷b2(SSb2)对肝癌细胞增殖的影响,并进一步探讨柴胡皂苷b2抑制肝细胞癌发生发展的分子机制。方法将细胞分为空白对照组(NC)、SSb2组、沉默信息调节因子6(SIRT6)si-RNA组(si-SIRT6)、si-SIRT6+SSb2组,NC组与SSb2组分别加入含阴性质粒的转染溶液,si-SIRT6组和si-SIRT6+SSb2组加入含si-SIRT6质粒的转染溶液,转染24 h后,SSb2组和si-SIRT6+SSb2组加入80 mg·L^(-1)的SSb2,各组继续转染24 h。检测各组HepG2细胞中腺苷三磷酸(ATP)含量、细胞上清液中葡萄糖以及乳酸的含量,用蛋白质印迹法检测HepG2细胞中SIRT6、缺氧诱导因子1α(HIF1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达水平变化。结果NC组、SSb2组、si-SIRT6组和si-SIRT6+SSb2组细胞的ATP含量分别为(36.81±2.42)、(26.22±2.09)、(74.16±2.65)和(33.95±2.00)μmol·gprot^(-1),葡萄糖摄取量分别为(1.41±0.07)、(0.49±0.05)、(1.86±0.10)和(1.06±0.12)mmol·L^(-1),乳酸生成量分别为(7.09±0.30)、(4.13±0.25)、(11.49±0.68)和(5.76±0.27)mmol·L^(-1),SIRT6蛋白相对表达水平分别为0.29±0.06、0.70±0.06、0.06±0.03和0.17±0.04,HIF1α蛋白相对表达水平分别为0.18±0.03、0.06±0.03、0.44±0.04和0.22±0.04,GLUT1蛋白相对表达水平分别为0.63±0.05、0.30±0.09、1.34±0.12和0.51±0.09。上述指标,SSb2组与NC比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);si-SIRT6组与NC比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);si-SIRT6+SSb2组与SSb2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论SSb2在体外可以抑制肝癌细胞的增殖,其作用可能是通过调控SIRT6介导的糖代谢通路实现的。

柴胡醋制前后柴胡皂苷a、b_2、c、d的LC-MS/MS法测定及比较

采用LC-MS/MS法对醋制前后柴胡中的Ⅰ型柴胡皂苷a、c、d与Ⅱ型柴胡皂苷b2进行含量测定,色谱柱为KinetexTMC18(50 mm×4.6 mm,2.6μm),流动相为水-乙腈-甲醇三元梯度洗脱;检测系统为电喷雾离子源(ESI)-三重四级杆质谱仪,ESI负离子模式检测,待测成分与内标均采用负离子加合物作为选择性反应监测(SRM)的前体离子,以[M+HCOO]-/[M-H]-作为SRM检测离子对。方法学验证结果显示,所建立的方法灵敏度高、专属性好,可作为柴胡生品及醋炙品的质量控制方法。含量测定结果表明,醋制过程引发了由Ⅰ型柴胡皂苷向Ⅱ型的转化,醋制后柴胡皂苷b2的含量明显增加,对柴胡醋炙品的质量控制应同时考虑对Ⅰ、Ⅱ型柴胡皂苷柴胡皂苷进行测定。

HPLC法测定柴胡口服液中柴胡皂苷b_2的含量

目的:建立柴胡口服液中柴胡皂苷b2的含量测定方法。方法:采用Hypersil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水,梯度洗脱(0～50min,30∶70→50∶50);流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:252nm。结果:柴胡皂苷b2的进样量在0.03～0.30μg范围内,与其峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998);平均加样回收率(n=6)为98.0%,RSD为0.9%。结论:所建立的方法灵敏、简便、准确,可用于该药中柴胡皂苷b2的含量测定。

HPLC-ELSD法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a、b_2、c的含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a,b_2,c的含量。方法:采用Hypersil BDS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^(-1),ELSD检测器,漂移管温度:100℃,气体:空气,气体流速:2.0 L·min^(-1),柱温:室温。结果:柴胡皂苷a,b_2,c分别在7.74~129.00,7.86~131.00,5.12~85.30μg的范围内线性关系良好(r分别为0.999 2,0.999 2,0.999 3);平均回收率分别为98.6%,99.3%,100.7%,RSD分别为2.5%,1.8%,2.7%(n=6)。结论:白芍中的成分可降低柴胡皂苷a、c的煎出量;枳实中的成分可提高柴胡皂苷a、b_2、c的煎出量;与单味柴胡药材相比,配伍组合中柴胡皂苷b_2的含量均显著增加。

HPLC-MS/MS法测定柴葛解肌汤中柴胡皂苷a、b2的含量

目的建立测定柴葛解肌汤中I型柴胡皂苷a与Ⅱ型柴胡皂苷b2的HPLC—MS／MS方法。方法采用Hypersil GOLDaQ色谱柱（150mm×2．1mm，3txm），乙腈-0．1％甲酸溶液为流动相，流速为300μL.min^-1，柱温：25℃，以液相色谱分离、电喷雾离子化串联进行检测。结果柴胡皂苷a、b2分别在44．8-672ng·mL～、47．2～708ng·mL。线性关系良好（r=0．9992、r=0．9993），平均回收率分别为98．53％和99．47％，RSD分别为2．01％和2．08％（n=6）。结论该方法快速简便、准确、灵敏度高，可用于柴葛解肌汤中柴胡皂苷a、b2的含量测定。

HPLC-ELSD同时测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷含量

目的用HPLC-ELSD同时测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷6种苷类成分的含量。方法 Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.2%醋酸溶液(B),梯度洗脱(0~8 min, 8%A;8~15 min, 8%~20%A;15~30 min, 20%~35%A;30~40 min, 35%~45%A;40~60 min, 45%~75%A),柱温30℃,流速1.0 mL·min^(-1),载气为氮气,体积流量2.3 L·min^(-1),漂移管温度70℃,增益2。结果柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷B1、山奈苷在5.48~109.6 mg·L^(-1)(r=0.999 4)、9.76~195.2 mg·L^(-1)(r=0.999 6)、11.98~239.6 mg·L^(-1)(r=0.999 9)、0.532~10.64 mg·L^(-1)(r=0.999 7)、0.35~7.0μg·mL^(-1)(r=0.999 5)、0.254~5.08μg·mL^(-1)(r=0.999 6)范围内的线性关系良好。平均回收率分别为99.1%、99.4%、97.2%、100.4%、100.7%、98.6%。21批北柴胡样品含量范围:柴胡皂苷C 0.093 2%~0.243%、柴胡皂苷A 0.103 8%~0.889 6%、柴胡皂苷D 0.288%~1.084 3%、柴胡皂苷B2 0~0.032 6%、柴胡皂苷B1 0~0.031 26%、山奈苷0~0.010 33%。结论该方法测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷6种苷类成分含量灵敏、准确,分离效果较好,无干扰,可作为完善北柴胡中苷类成分的质量标准评价提供依据。