酶水解柴胡皂苷B_(1)制备稀有前柴胡皂苷A的研究

目的通过酶水解柴胡皂苷B_(1)获取中药活性成分前柴胡皂苷A,并构建关键技术。方法以单因素试验考察水解酶、缓冲液pH值、酶/底物质量比、反应温度和反应时间等影响因素,并通过响应面实验设计对酶水解条件进行优化;此后,利用LC-MS、^(1)H-NMR、13 C-NMR确定产物的化学结构。结果柴胡皂苷B_(1)的最佳水解酶为蜗牛酶,在0.20 mol/L HAc-NaAC缓冲液(pH 4.5)中,当酶与柴胡皂苷B_(1)的质量比为30∶1时,于56℃下反应33 h后,水解率高达99.1%,产物经鉴定为前柴胡皂苷A。结论本研究构建的酶水解关键技术获取前柴胡皂苷A更便捷,不产生柴胡皂苷元副产物,反应过程中不使用无机酸,清洁环保,可为大量制备前柴胡皂苷A以开展药理药效研究奠定基础。

UPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷b_(1)、b_(2)

目的建立UPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷b_(1)、b_(2)。方法使用Acquity UPLC BHE C_(18)色谱柱(100 mm×2.1mm,1.7μm);流动相:水–乙腈,梯度洗脱;检测波长:254 nm;体积流量:0.3 mL/min;柱温:30℃;进样量3μL。结果柴胡皂苷b1、b2线性范围分别为0.006~0.374 mg、0.003~0.214 mg,平均回收率分别为98.97%、99.35%,RSD值分别为1.82%、1.16%。结论所建立方法准确、稳定,重现性好,可用于小柴胡颗粒的质量控制和评价。

一测多评法在大柴胡颗粒质量评价中的应用

目的建立高效液相一测多评法测定大柴胡颗粒中6种成分的含量。方法色谱柱为Waters XBridge C_(18)柱;流动相为甲醇-1 mL·L^(-1)磷酸溶液,梯度洗脱;流速为0.4 mL·min^(-1);柱温为35℃;检测波长为250 nm;进样量为10μL。并进行专属性、精密度、线性范围、重复性、稳定性和加样回收率等方法学验证。以黄芩苷为参照,分别测定其与汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、柴胡皂苷B 1、柴胡皂苷B 2的相对保留时间和相对校正因子,并计算大柴胡颗粒中6种成分的含量,实现一测多评。结果相对于黄芩苷,汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、柴胡皂苷B 1和柴胡皂苷B 2的相对保留时间分别为1.451、2.070、2.688、4.586、4.321,RSD<2.38%,表明各化合物的相对保留时间波动较小;相对校正因子平均值分别为0.773、0.519、0.579、1.081、0.834,RSD值均小于1.33%,表明相对校正因子波动较小。6批大柴胡颗粒中5种成分的含量用外标法和一测多评法测定结果的相对偏差均小于1.48%,无显著性差异。结论以黄芩苷为参照,用一测多评法可同时测定大柴胡颗粒中6种成分的含量,方法可靠、结果准确,可用于加强大柴胡颗粒的质量控制。