柴芪益肝方对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化治疗作用

目的探讨柴芪益肝方(CQYG)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的治疗作用与机制。方法50只C57BL/6雄性小鼠随机分成5组:空白对照组(NC)、模型组(Model)、CQYG低剂量组(CQYG-L)、CQYG高剂量组(CQYG-H)、水飞蓟素组(Silymarin),每组10只。除空白对照组外,其余组腹腔注射CCl4橄榄油溶液诱导肝纤维化模型,2次/周,连续8周。从造模当天起,治疗组每天分别灌胃对应的低、高剂量柴芪益肝方和水飞蓟素。8周后处死小鼠,观察肝脏形态,HE、Masson、天狼星红染色观察肝组织和胶原纤维变化,生化法分析血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,ELISA法检测肝组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)变化,Real-time PCR分析I型胶原(Collagen I)、α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平,Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β及磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)表达。结果与模型组对比,CQYG各组和水飞蓟素组肝组织形态、炎症细胞浸润与胶原纤维变化优于模型组;水飞蓟素组和CQYG高剂量组小鼠ALT、AST水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01);CQYG高剂量组治疗后,肝组织中TNF-α、IL-6、IL-1β表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,CQYG各组的肝组织Collagen I、TGF-β、TNF-α、IL-1β基因表达水平以及Collagen I、α-SMA、TGF-β、p-NF-κB蛋白表达较模型组有不同程度降低,以高剂量组降低最为显著(P<0.05)。结论柴芪益肝方能减轻CCl4诱导的小鼠肝纤维化,其机制或与其抑制NF-κB介导的炎症通路,下调肝纤维化相关因子TGF-β、α-SMA、Collagen I蛋白表达相关。

基于生物分子网络调控研究柴芪益肝方治疗肝纤维化的作用机制

目的基于生物分子网络研究柴芪益肝方治疗肝纤维化的作用机制。方法检索TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction数据库,挖掘柴芪益肝方的潜在活性成分及其作用靶点,并基于OMIM和Gene Cards数据库筛选肝纤维化的相关靶点。运用String数据库和Cytoscape软件对PPI进行可视化及拓扑学分析。借助clusterprofile对交集靶点行GO分析以及KEGG富集分析,运用Autodckvina软件进行分子对接。结果筛选出柴芪益肝方137种潜在活性成分以及257个对应靶点,肝纤维化相关靶点6807个,其抗纤维化作用可能与丝裂原激活蛋白激酶MAPK1/3/8、原癌基因酪氨酸激酶Src、激活子蛋白c-Jun、热休克蛋白HSP90α、表皮生长因子受体、p53抑癌基因、血管内皮生长因子、连环蛋白β1、肝细胞生长因子等靶点有关。柴芪益肝方抗纤维化的靶点显著富集于PI3K-Akt、TNF、IL-17、MAPK/NF-κB、HIF-1α/VEGF等信号通路中。分子对接结果表明,柴芪益肝方的主要活性成分槲皮素、白藜芦醇、山柰酚、木犀草素、丹参酮ⅡA等对丝裂原激活蛋白激酶MAPK1/3/8、原癌基因酪氨酸激酶Src、激活子蛋白c-Jun、热休克蛋白HSP90α、表皮生长因子受体、p53抑癌基因、血管内皮生长因子、连环蛋白β1等靶点表现出显著性亲和作用。结论柴芪益肝方中槲皮素、白藜芦醇、山柰酚、木犀草素、丹参酮ⅡA等活性成分可能作用于丝裂原激活蛋白激酶MAPK1/3/8、原癌基因酪氨酸激酶Src、激活子蛋白c-Jun、热休克蛋白HSP90α、表皮生长因子受体、连环蛋白β1、肝细胞生长因子等靶点,参与PI3K-Akt、TNF、IL-17、MAPK/NF-κB、HIF-1α/VEGF等信号通路,调控氧化应激反应、肝脏炎症反应、肝再生等生物过程,最终发挥治疗肝纤维化的作用。

柴芪益肝方对肝纤维化小鼠的保护作用机制研究

目的探讨柴芪益肝方抗肝纤维化的作用机制。方法选取50只无特定病原体级C57BL/6雄性小鼠通过随机数字表法分成空白对照组、模型组、柴芪益肝方低、高剂量组、水飞蓟素阳性对照组,各10只。除空白对照组外,各组小鼠腹腔注射15%的四氯化碳橄榄油诱导肝纤维化模型。从造模第1天起,空白对照组和模型组以等体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余3组每天分别灌胃低、高剂量柴芪益肝方和水飞蓟素。小鼠处死后,观察肝脏形态,苏木精-伊红、Masson、天狼星红染色观察肝组织和胶原纤维变化,生化法分析血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,酶联免疫吸附试验法检测肝组织中丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和羟脯氨酸的含量,蛋白质印迹法检测肝组织中α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、转化生长因子β(TGF-β)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及MMP组织抑制因子1(TIMP-1)蛋白表达水平。结果水飞蓟素阳性对照组和柴芪益肝方低、高剂量组小鼠肝细胞变性、坏死及纤维化组织增生程度均较模型组明显减轻。柴芪益肝方低、高剂量组血清ALT、AST水平,肝组织中丙二醛、羟脯氨酸、α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β及TIMP-1蛋白表达较模型组呈现剂量依赖性降低,而柴芪益肝方高剂量组SOD、GSH-Px、MMP-9的蛋白表达水平显著高于模型组,差异均有统计学意义[(125±14)U/mg比(41±11)U/mg、(267±19)U/g比(82±22)U/g、(0.43±0.04)比(0.12±0.01)](P<0.01或P<0.05)。结论柴芪益肝方对肝纤维化小鼠有一定的抗肝纤维化及肝脏保护作用,其机制可能与其调节脂质代谢、抗氧化应激反应、抑制TGF-β蛋白表达,促进细胞外基质降解等相关。

柴芪益肝方治疗乙型病毒性肝炎相关性原发性肝癌正虚毒瘀证患者的临床回顾性分析

目的:观察柴芪益肝方对乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)相关原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)正虚毒瘀证患者5年生存率的影响,并对5年生存率相关影响因素进行分析。方法:回顾性收集首次诊断为PLC并辨证为正虚毒瘀证的患者资料,分为柴芪益肝方组和西医治疗组。采集患者的人口学特征及相关临床指标信息,比较两组患者的5年生存率及5年无进展生存率和服用柴芪益肝方不同累计时间的5年生存率及5年无进展生存率;采用单因素和多因素Cox回归分析筛选患者生存的保护因素;比较两组患者不同巴塞罗那临床肝癌(Barcelona clinic liver cancer,BCLC)分期、不同Child-Pugh分级患者的5年生存率及5年无进展生存率。结果:共纳入患者300例,倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)前,西医治疗组154例,柴芪益肝方组146例,两组患者基线指标存在差异;PSM后,两组各87例患者,组间关键的基线指标平衡。PSM后,柴芪益肝方组5年生存率及5年无进展生存率均显著优于西医治疗组,服用柴芪益肝方>6个月的患者5年生存率明显提高。多因素Cox回归分析显示,年龄、家族史、西医治疗方式(仅微创治疗)、服用柴芪益肝方、BCLC-C期、BCLC-D期、Child-Pugh B级、Child-Pugh C级、HBV-DNA(≥2000 IU·mL^(-1))和肿瘤个数是患者5年生存率的独立影响因素。对于BCLC B-D期、Child-Pugh A/B/C级的患者,柴芪益肝方组5年生存率高于西医治疗组(P<0.05);对于BCLC-C/D期、Child-Pugh B级的患者,柴芪益肝方组5年无进展生存率高于西医治疗组(P<0.05)。结论:柴芪益肝方对乙肝相关PLC患者的生存有保护作用,且用药时间与生存时间呈正相关。