柴蜕颗粒通过MAPK/Akt/NF-κB信号通路改善气道炎症治疗咳嗽变异性哮喘的药效及机制研究

目的基于丝裂原活化蛋白激酶/蛋白激酶B/核转录因子-κB(MAPK/Akt/NF-κB)信号通路探讨柴蜕颗粒改善气道炎症治疗咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)的药效及作用机制。方法雄性Hartley豚鼠32只,随机分为正常组、模型组、柴蜕颗粒组[5.3 g/(kg·d)]、孟鲁司特钠组[0.001 g/(kg·d)],每组8只。除正常组外,其他各组豚鼠肌注4%OVA溶液0.5 mL,同时腹腔注射2%Al(OH)3凝胶0.2 mL建立CVA模型,致敏14天后雾化吸入1%OVA溶液激发咳嗽症状,同时各给药组连续灌胃14天进行干预。末次给药后,使用小动物肺功能仪检测豚鼠气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR);血生化分析仪检测外周血、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞比例;苏木素—伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测BALF中豚鼠免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测肺组织中细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、p-ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、p-p38 MAPK、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,Akt)、p-Akt、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)、p-NF-κB p65蛋白表达。结果与正常组比较,模型组豚鼠咳嗽次数、气道阻力、病理评分显著增高(P<0.05,P<0.01),咳嗽潜伏期显著缩短(P<0.05);BALF中白细胞(white blood cell,WBC)总数、嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)、中性粒细胞(neutrophil,NE)、嗜碱性粒细胞(basophil,BA)总数及比例显著升高(P<0.05,P<0.01);BALF中IgE、IL-4、TNF-α水平显著增高(P<0.05),IFN-γ、IL-10水平显著下降(P<0.05,P<0.01);肺组织中ERK、p38 MAPK蛋白表达量明显降低(P<0.01,P<0.05),p-ERK、p-p38 MAPK、p-Akt、p65 NF-κB、p-p65 NF-κB水平显著增高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,柴蜕颗粒组和孟鲁司特钠组CVA豚鼠咳嗽次数、气道阻力、病理评分显著降低(P<0.05,P<0.01),咳嗽潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01);外周血及BALF中WBC、EOS、NE、BA总数及比例显著降低(P<0.05,P<0.01);BALF中IgE、IL-4、TNF-α含量明显降低(P<0.05,P<0.01),IFN-γ、IL-10含量明显上升(P<0.05,P<0.01);肺组织中ERK蛋白表达量明显增高,p-ERK、p-p38 MAPK、p-Akt、p65 NF-κB、p-p65 NF-κB蛋白表达量显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论柴蜕颗粒可有效改善肺功能和咳嗽敏感性治疗咳嗽变异性哮喘,其机制可能与平衡细胞因子表达,抑制MAPK/Akt/NF-κB信号通路活化作用有关。