柴达木黑果枸杞花青素减轻中波紫外线辐射后人皮肤成纤维细胞氧化及炎性损伤的研究

目的 探讨柴达木黑果枸杞花青素减轻中波紫外线(UVB)辐射后人皮肤成纤维细胞(HSFs)氧化及炎性损伤。方法 将体外培养的HSFs细胞采用随机数字表法分为空白对照组(不进行任何处理)、UVB辐射组(30 mJ/cm~2照射30 min)、UVB+花青素低剂量组(0.1 mg/mL+30 mJ/cm~2照射30 min)、UVB+花青素中剂量组(0.5 mg/mL+30 mJ/cm~2照射30 min)、UVB+花青素高剂量组(1 mg/mL+30 mJ/cm~2照射30 min)。柴达木黑果枸杞花青素于UVB照射前24 h加入细胞培养基中,24 h后收集细胞。采用倒置显微镜观察细胞形态;台盼蓝染色观察细胞死亡情况;MTT法测细胞增殖活力;酶标法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力、谷胱甘肽(GSH-PX)含量、丙二醛(MDA)的含量。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测并比较白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)表达水平。结果 倒置显微镜下各组细胞形态:花青素中、高剂量组细胞形态接近于空白对照组,花青素低剂量组细胞形态接近于UVB副射组。台盼蓝染色显示,与空白对照组比较,UVB辐射组HSFs细胞蓝染数量增加,并出现漂浮细胞碎片;与UVB辐射组比较,UVB+低、中、高剂量柴达木黑果枸杞花青素组HSFs细胞蓝染数量下降,漂浮的细胞碎片减少。与空白对照组比较,UVB辐射组MDA、IL-1、IL-6表达水平明显增高(P<0.05);细胞增殖率、SOD活性、CAT活力、GSH-P含量下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。与UVB辐射组比较,UVB+低、中、高剂量柴达木黑果枸杞花青素组细胞上清液中IL-1、IL-6、MDA表达水平明显降低(P<0.05);细胞增殖率、SOD活性、CAT活力、GSH-P含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 柴达木黑果枸杞花青素通过提高抗氧化应激能力、减轻细胞的炎性损伤来改变UVB辐射后HSFs细胞的形态学变化,从而减轻紫外线辐射后引起的皮肤损伤。

柴达木黑果枸杞花青素对中波紫外线照射后体外培养人皮肤成纤维细胞衰老的保护作用及机制研究

目的:研究柴达木黑果枸杞花青素对中波紫外线(UVB)照射后体外培养人皮肤成纤维细胞(HSF)衰老的保护作用及衰老相关基因p53、p21、微RNA(miR)-34c和沉默信息相关调节因子(SIRT)1 mRNA表达水平的影响。方法:取对数生长期的HSF,分为对照组、UVB照射组,柴达木黑果枸杞花青素低剂量组(0.1 g/L)、柴达木黑果枸杞花青素中剂量组(0.5 g/L)和柴达木黑果枸杞花青素高剂量组(1.0 g/L)。UVB照射前24 h用不同浓度的柴达木黑果枸杞花青素预处理HSF。UVB照射后72 h,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测衰老细胞比例,定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中衰老相关基因p53、p21、miR-34c及SIRT1 mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,UVB照射组细胞SA-β-gal染色阳性率及p53、p21、miR-34c和SIRT1 mRNA表达水平均升高(P<0.05)。与UVB照射组相比,柴达木黑果枸杞花青素(0.1 g/L、0.5 g/L和1.0 g/L)组细胞SA-β-gal染色阳性率,p53、p21、miR-34c及SIRT1 mRNA的表达水平,均呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论:黑果枸杞花青素可能通过下调p53/miR-34c正反馈调节来减轻HSF的照射损伤,进而发挥抗衰老作用。

改进和优化黑果枸杞及其制品中花青素测定的pH示差法

建立一种基于美国官方分析化学师协会(Association of Official Analytical Chemists,AOAC)方法检测黑果枸杞及其制品中花青素含量的改进pH示差法。考察了黑果枸杞及其制品中花青素的最佳提取和检测条件,通过液相色谱-三重四级杆串联质谱法鉴别出黑果枸杞中花青素的具体化学结构,并计算出混合花青素的平均摩尔质量。通过分光光度法测得混合花青素的平均摩尔消光系数,对改进后的pH示差法进行方法学验证和花青素的含量测定。结果显示,最佳提取和检测条件如下:黑果枸杞花青素提取溶剂为盐酸-80%(体积分数)乙醇(3∶97,体积比),料液比为1∶100(g∶mL),提取温度为50℃,提取时间为30 min,缓冲溶液稀释5倍后静置平衡20 min。液相色谱-三重四级杆串联质谱法鉴别黑果枸杞中主要以矮牵牛素类花青素为主(占97.96%),黑果枸杞特有的混合花青素平均摩尔质量为912.7 g/mol,平均摩尔消光系数为29591 L/(mol·cm)。pH示差法改进后能够满足方法学验证要求,固体样品和液体样品最低检出限分别为28.2 mg/100 g、0.282 mg/100 mL。方法改进后花青素提取增长率均大于20%,静置平衡20 min后单次检测结果精密度小于0.3%。以矮牵牛素类花青素代替矢车菊素-3-O-葡萄糖苷计算花青素含量平均提高了2.41倍,能真实地反映黑果枸杞及其制品中花青素的含量。

外源诱导子和温度对黑果枸杞悬浮细胞花青素积累的影响

黑果枸杞富含花青素,是一种具有很高开发利用价值的药食同源植物。以黑果枸杞无菌苗的叶片为外植体诱导愈伤组织建立细胞悬浮体系,研究不同外源激素和温度对黑果枸杞悬浮细胞中花青素含量的影响。黑果枸杞愈伤组织诱导的最佳培养体系为WPM+0.5 mg/L激动素+2.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+20.0 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂,悬浮细胞培养的最优体系为WPM+0.5 mg/L激动素+2.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+0.01 mg/L萘乙酸+20.0 g/L蔗糖,其生长曲线呈“S”形,活细胞数量在悬浮培养第18天时达到峰值,为7.93×10^(5)个/mL。30 g/L蔗糖、200 mg/L茉莉酸甲酯、2 mg/L脱落酸及16℃单一处理均能显著促进悬浮细胞花青素产量的提升(P<0.05),2 mg/L脱落酸诱导效果最佳。在16℃和3种外源激素的复合处理下,200 mg/L茉莉酸甲酯+16℃的复合诱导处理能显著促进细胞花青素积累(P<0.05),含量是16℃单因素处理的1.13倍。研究结果为进一步优化黑果枸杞悬浮细胞培养体系、促进花青素积累奠定了基础。

黑果枸杞花青素智能显色膜的制备和性能研究

花青素作为植物体内存在的天然物质,不仅对人体无毒无害,还具有良好的抗氧化性能。采用溶剂提取法和超声波辅助提取法提取黑果枸杞花青素,再将花青素溶液与成膜基质共混后制备成花青素复合膜,并对复合膜进行厚度、含水率、水溶性、抗氧化性、pH显色、红外吸收光谱等性能测定。实验测得复合膜的平均厚度为0.0387 mm,含水率为22.78%,水溶性为31.55%,水蒸气透过系数为6.2359×10^(-4)g·mm·Pa^(-1)·h^(-1)·m^(-2),1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)抗性相当于1 mL 0.02 mol/L标准维生素E溶液的15.84倍,且在不同pH的缓冲溶液中具有良好的显色效应。实验制备得到的花青素智能显色膜具有与普通保鲜膜相似的外观和物理性质,能在水中自发降解并拥有极佳的抗DPPH自由基能力,具有良好食品包装应用前景。

黑果枸杞中原花青素的提取及其稳定性研究

以黑果枸杞中原花青素为研究对象,通过单因素实验分别考查乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度对原花青素提取率的影响,同时通过响应面法优化提取实验,得到提取最优工艺。另外,分别考查了不同种类、不同浓度的糊精和氨基酸对原花青素稳定性的影响,结果表明,其对原花青素具有一定的稳定性作用。

黑果枸杞花青素提取物的初步毒性评价

该文评价了黑果枸杞花青素提取物(Anthocyanins extract of Lycium ruthenicum,AEL)的急性毒性和亚急性毒性。采用固定剂量法一次灌胃AEL 8000 mg/kg进行经口急性毒性试验,观察小鼠毒性反应,记录14 d内一般状态。选取SD大鼠进行30 d喂养试验,记录大鼠体质量和体征变化,实验结束时进行尿液生化指标、血液学指标、血清生化指标检查,并观察脏器形态变化,计算脏体系数和脏脑系数。研究发现:急性毒性试验中,小鼠无不良反应,体质量正常增长,解剖脏器未见明显异常;连续灌胃30 d后,各组大鼠体质量正常增长,未见明显中毒反应;与对照组比较,高剂量组雌性大鼠单核细胞百分比(M%)显著升高(P<0.05),AST/ALT的比值显著降低(P<0.05);高剂量组雄性大鼠血清Cl-、脾脏系数高于对照组(P<0.05)。实验组大鼠其余尿液生化指标、血液学指标、血清生化指标、脏体系数和脏脑系数无明显异常。结果表明:小鼠对AEL的单次灌胃最大耐受剂量不低于8000 mg/kg;连续灌胃30 d,大鼠未见明显中毒反应,AEL在该实验条件下无急性、亚急性毒性,具有较高的安全性。

黑果枸杞花青素对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的影响

旨在探究青海柴达木黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murray)花青素(anthocyanidin,AC)对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的影响,作者选用H9c2大鼠心肌细胞为研究对象,设常氧组、低氧组、低氧+黑果枸杞花青素组和低氧+红景天苷(salidroside,Sal)组,采用酶标仪检测其细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)含量、显微镜观察其细胞形态学变化、荧光酶标仪检测其细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量、Hoechst33342/PI双染法检测其细胞凋亡程度、流式细胞术检测其细胞凋亡率、qRT-PCR法和Western blot法分别检测细胞凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl2)及Bcl2相关蛋白(Bcl2-associated X,Bax)在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果表明,与常氧组相比,低氧能极显著增加LDH、ROS含量和细胞凋亡率(P<0.01),极显著下调Bcl2、Bcl-2/Bax比值的mRNA和蛋白表达(P<0.01),极显著上调Bax的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。在低氧条件下,黑果枸杞花青素可显著减少LDH、ROS含量(P<0.05),细胞凋亡率极显著减少(P<0.01),显著上调Bcl-2和Bcl2/Bax比值的mRNA和蛋白表达(P<0.05),极显著下调Bax的蛋白表达(P<0.01)。综上可知,在低氧条件下,黑果枸杞花青素可通过降低LDH和ROS含量,上调Bcl2和Bcl2/Bax比值在mRNA水平和蛋白水平的表达,下调Bax的蛋白表达来有效延缓低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞的凋亡,对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞具有保护作用。

黑果枸杞花青素对H9c2大鼠心肌细胞抗氧化能力、炎性因子及能量代谢作用的影响

试验旨在探究青海柴达木黑果枸杞花青素(AC)对H9c2大鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响,选用H9c2大鼠心肌细胞为研究对象,设立常氧组、常氧+AC组、低氧组和低氧+AC组,利用ELISA法检测各组细胞中过氧化物酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血红素加氧酶-1(HO-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)以及能量代谢相关因子Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶的变化。结果显示,与常氧组相比,常氧+AC组大鼠心肌细胞MDA、TNF-α、IL-6的含量均显著降低(P<0.05),CAT、HO-1、Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性显著升高(P<0.05),GSH-Px、SOD活性和IL-10含量均极显著升高(P<0.01);低氧组大鼠心肌细胞GSH-Px、HO-1、Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性显著降低(P<0.05),CAT、SOD、Ca^(2+)-ATP酶活性和IL-10含量均极显著降低(P<0.01),MDA、TNF-α、IL-6含量均极显著升高(P<0.01)。与低氧组相比,低氧+AC组大鼠心肌细胞MDA、TNF-α、IL-6含量均极显著降低(P<0.01),CAT、GSH-Px、SOD、HO-1、Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶活性和IL-10含量均极显著升高(P<0.01)。研究表明,AC能够通过减轻H9c2大鼠心肌细胞氧化应激损伤,增强低氧下心肌细胞的能量代谢,抑制低氧诱导的炎症发生,进而缓解H9c2大鼠心肌细胞的低氧损伤。

柴达木黑果枸杞原花青素对小鼠衰老皮肤抗氧化作用及炎症因子的影响

目的探讨柴达木黑果枸杞原花青素对皮下注射5%D-半乳糖(D-gal)联合紫外线(长波紫外线UVA+中波紫外线UVB)照射后小鼠皮肤的抗氧化作用及炎症因子的影响。方法将50只昆明小鼠随机分为5组(正常组,模型组,维生素E组,原花青素低剂量组、高剂量组),连续造模40天。造模完成后,取小鼠颈背部皮肤制备10%的组织匀浆,取上清液,用生化法测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)活力;用ELISA法测白细胞介素IL-1、IL-6含量。结果与正常组比较,模型组SOD活力和GSH-PX、CAT含量降低,IL-1、IL-6含量增加显著(P<0.05);与模型组相比,维生素E组、原花青素低、高剂量组的SOD活力和GSH-PX、CAT含量不同程度增加,IL-1、IL-6含量降低(P<0.05);原花青素低、高剂量组与维生素E组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论柴达木黑果枸杞原花青素能够减轻紫外线照射联合皮下注射D-半乳糖对小鼠皮肤的氧化损伤;减少IL-1、IL-6的分泌,减轻炎症反应,延缓皮肤衰老,且效果优于同等剂量的维生素E。

黑果枸杞花青素对低氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞增殖的影响

研究通过构建H9c2大鼠(Rattus norregicus)心肌细胞体外低氧模型,检测H9c2大鼠心肌细胞活性、细胞周期以及增殖相关因子CCNT2、CDK9和FOXP1的mRNA和蛋白表达,探究黑果枸杞花青素(Lycium ruthenicum Murry anthocyanins,AC)对H9c2大鼠心肌细胞增殖作用的影响。结果表明,25和50μg·mL^(-1)黑果枸杞花青素诱导24、36和48 h在常氧和低氧条件下均显著提高H9c2大鼠心肌细胞活性(P<0.05),50μg·mL^(-1)添加效果最佳。低氧组中,处于G0/G1期细胞数量显著增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞数量显著降低(P<0.05),添加黑果枸杞花青素后G0/G1期细胞数量显著降低(P<0.05),S期和G2/M期细胞数量显著升高(P<0.05)。低氧条件下CCNT2、CDK9和FOXP1的mRNA和蛋白表达均极显著下调(P<0.01),添加黑果枸杞花青素可显著上调CCNT2、CDK9和FOXF1的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。可知,黑果枸杞花青素促进CCNT2、CDK9和FOXP1相关因子表达,对低氧下H9c2大鼠心肌细胞增殖活性发挥保护作用,促进H9c2大鼠心肌细胞周期进程,为开发高原动物低氧生产模式下饲料添加剂,提高动物低氧适应性奠定基础。

柴达木盆地野生与栽植黑果枸杞中花青素、多糖和多酚含量

以柴达木盆地野生型和人工栽植的黑果枸杞为试材,利用分光光度计法,分析比较了二者浆果内花青素、多糖和多酚含量的差异。结果表明:野生型和人工栽培黑果枸杞浆果内的花青素含量分别为8.37、8.97mg·g^(-1),二者之间无差异;多糖含量分别为57.20、57.88mg·g^(-1),二者之间无差异。人工栽培的黑果枸杞多酚含量高达50.59mg·g^(-1),其含量显著高于野生型黑果枸杞。

黑果枸杞中原花青素提取条件的优化与含量测定

原花青素是一种天然的自由基清除剂和抗氧化剂,具有多种生理功能。文中通过单因素和正交试验确定了黑果枸杞中原花青素的最佳提取条件：反应温度50℃,料液比（g∶m L）1∶10,乙醇体积分数50%,萃取时间40 min。采用浓HCl-香草醛法对5种不同产地枸杞中原花青素的含量进行了测定,其含量为0.18%~2.99%,其中新疆塔县黑果枸杞中原花青素含量最高,为2.99%。

黑果枸杞乳酸菌发酵饮料生产工艺研究

采用干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)制备黑果枸杞发酵饮料,以减少加工过程中花青素和原花青素损失为主要目标,首先确定了酶解条件:果胶酶和纤维素酶各添加1 g/L,37℃酶解3.5 h;优化了扩培培养基:脱脂乳粉30 g/L,葡萄糖70 g/L,枸杞汁80 g/L;得到了最优的发酵条件:料水比1∶30(g∶mL),接种量3%(体积分数),发酵温度37℃,发酵时间15 h,发酵结束时总酸含量约3.5 g/L。结果显示,乳酸菌发酵显著提高了花青素的含量和保留率,但是杀菌会造成花青素和原花青素的大量损失。通过优化杀菌参数和控制环境因子开发了有利于花青素和原花青素保护的杀菌工艺:料液避光并控制氧气含量小于0.5 mg/L,于85℃加热25 min,此工艺使花青素保留率提高了7.1%,原花青素保留率提高了6.0%,功能成分在加工过程中得到了有效保护,制备的发酵饮料具有黑果枸杞的风味及柔和的微酸口感。该研究可为黑果枸杞深加工产品开发提供一定的理论参考。

不同产地黑果枸杞中原花青素和花青素含量研究

在溶剂提取法基础上,采用香草醛-盐酸显色法测定不同产地黑果枸杞果实原花青素的含量,采用消光系数法测定花青素含量,为人工种植高品质黑果枸杞提供理论依据。结果表明：原花青素含量范围为14.26~90.24 mg/g（烘干粉）,花青素含量范围为0.69~8.40 mg/g,黑果枸杞果实中原花青素含量明显高于花青素含量。不同地区野生黑果枸杞中原花青素和花青素依次为青海格尔木〉新疆阿克苏〉青海诺木洪〉新疆库尔勒〉内蒙古额济纳旗。此外,格尔木人工露地种植黑果枸杞原花青素含量显著高于（p〈0.05）格尔木野生的黑果枸杞,说明人工栽培黑果枸杞可能是一种更好的方式。在水、肥、阳光充足的条件下,选择性状表现好的品种,可实现北京人工栽培的黑果枸杞果实原花青素和花青素含量达到原产地人工栽培的水平。

青藏高原黑果枸杞花青素稳定性评价

采用控制变量法分别研究了环境因素(pH、温度、光照)和添加物(氧化剂、还原剂、食用酸、糖、防腐剂和金属离子)对青藏高原黑果枸杞花青素稳定性的影响。用分光光度计法测定花青素含量的变化。结果表明,酸性(pH<3)、低温(T<60℃)、避光条件有利于花青素溶液稳定保存。氧化剂(H_2O_2)和还原剂(Na_2SO_3)对花青素稳定性有不良影响;食用酸(柠檬酸、抗坏血酸、草酸、酒石酸)、葡萄糖、蔗糖可增加花青素稳定性;防腐剂苯甲酸对花青素稳定性无显著影响;金属离子Na^+、K^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)、Al^(3+)对花青素稳定性无不良影响,而Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)对花青素稳定性有不良影响。

黑果枸杞花青素在水相体系中的稳定性研究

以黑果枸杞水提液中花青素保存率为指标,研究黑果枸杞花青素氧化变化规律及几种抗氧化剂提高稳定性的方法。结果显示:黑果枸杞花青素的热降解符合一级反应动力学模型;维生素C、迷迭香、茶多酚及木糖醇对水溶液中花青素具有一定保护作用,可防止水相体系中花青素的氧化,单一使用时有效的质量百分比分别为:0.1%、0.4%、0.3%、6%,保存率分别达到89.0%、87.8%、91.0%和56.0%;花青素在较低温度(20℃),酸性(p H3.0)条件下较稳定;采用微波杀菌时(850 W,5 min),花青素保存率为67.6%,高于其他杀菌方式,微波杀菌对黑枸杞水相体系中的花青素破坏程度最小。

果胶酶提取黑果枸杞花青素的工艺优化

研究果胶酶提取黑果枸杞花青素的工艺。在单因素实验的基础上,利用响应曲面法优化果胶酶提取黑果枸杞花青素的工艺条件。结果表明,果胶酶提取黑果枸杞花青素的最佳条件为:酶添加量70 mg/100 g、酶解温度41℃、酶解时间1.0 h,在此条件下,实验测得黑果枸杞花青素提取率为63.70%,提取量为215.31 mg/100 g鲜果,与实验预测值63.01%相符,且与未加果胶酶样品相比(20.28%),花青素的提取率增加了43.42%,说明响应面优化的酶法提取工艺有利于提高黑果枸杞花青素提取率。

柴达木野生黑果枸杞营养成分分析

对柴达木野生黑果枸杞果实中的主要营养成分进行了分析,结果表明,黑果枸杞鲜果含水质量分数85.03%,其干果蛋白质量分数10.61%,脂肪6.66%,多糖4.28%,总黄酮质量分数4.29%,原花青素3.42%。果实含有γ-VE及δ-VE,每百克分别为0.0075和0.016 mg,从黑果枸杞籽中提取的枸杞籽油维生素E含量较果实要高的多,籽油富含α-VE、γ-VE及δ-VE,每百克分别为0.1906 mg、1.8939 mg和0.045 mg。黑果枸杞中氨基酸种类相对较丰富,亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸等含量相对较高。黑果枸杞中矿质元素丰富,其中钾的含量最高,且远高于钠的含量,属于高钾低钠的食品。

响应面法优化黑果枸杞中原花青素提取工艺

为了提高原花青素的得率,在单因素实验的基础上,采用响应面实验设计优化从黑果枸杞中提取原花青素的工艺。通过考察乙醇体积分数、提取温度、提取时间三个因素及其交互作用对原花青素得率的影响,建立了该工艺的二次多项数学模型。实验表明,曲面回归方程拟合性良好,乙醇体积分数、提取温度、提取时间对响应值均有极显著影响,在乙醇体积分数56%、提取温度46℃、提取时间48 min的条件下,黑果枸杞原花青素得率为4.315%,与响应面预测值相比,相对误差为1.5%,说明本研究方法是一种适合于从黑果枸杞中提取原花青素的方法。