秋冬季节柿属植物树体内酚类物质含量的变化

本测试结果表明 ,原产日本中部的栽培柿‘富有’(Diospyros kaki cv.Fuyou)的抗寒性为 (- 2 5±0 .7)℃ ,而原产于亚热带台湾的台东豆柿 (D.taitoensis)的抗寒性仅为 (- 18± 0 .6 )℃。试材枝内酚类物质总含量在 9～ 11月中旬上升至最大值 ,富有柿增加了 0 .7倍 ,台东豆柿增加了 0 .8倍。此后至 2月中旬维持在较高水平 ,3月中旬以后迅速下降。 9～ 11月中旬富有柿枝内黄酮类物质含量显著上升了近 4倍 ,台东豆柿增加了近 1倍 ;此后至 2月中旬维持在较高水平 ,3月中旬以后迅速下降。 2树种枝条皮层中的酚类物质总含量分别为其木质部的 5倍左右。酚类物质的大部分为缩合型单宁 ,其含量变化曲线近似于酚类物质总含量的曲线。试材枝内简单酚类物质和可溶性单宁含量极低 ,且在秋冬季节无显著变化。与富有柿相比 ,台东豆柿枝内酚类物质中简单酚类物质比例高 ,而缩合单宁含量所占比例较低。结果显示 。

柿属植物种子表型多样性及其萌发与幼苗生长研究

对64份采自河南、福建、湖北、湖南、江西、浙江等省的柿属植物野生资源和主栽品种的种子表型、发芽率及实生苗生长指标进行了测定和评价。结果表明:64份资源的种子按种子长度可分为长种型、较长种型、普通型、短种型;按种子宽度可分为宽种型、普通型、窄种型;按种子厚度可分为厚种型、较厚种型、普通型、薄种型;按长宽比可以分为高长宽比型和低长宽比型;按发芽率可以分为高发芽率型、普通型、低发芽率型;按实生苗苗高可分为高苗高型、较高型、普通型、低苗高型;按实生苗地径可以分为粗地径型、较粗型、普通型、细地径型。种子发芽率分别和种子长度、宽度、厚度呈极显著正相关(P<0.01),但和种子长宽比没有相关性,即种子萌发能力与饱满度呈显著正相关,与种子形状无关;5个柿属植物不同种之间种子发芽率无显著差异,但柿种内不同来源间发芽率差异显著(P<0.05),表型差异极显著(P<0.01)。利用主成分分析法得出不同种类种子的实生繁育难易程度排序及日本甜柿的备选砧木资源。

柿EST-SSR标记在柿属植物中的通用性研究

公共数据库和柿转录组测序产生的大量EST序列为开发新的SSR标记提供了有效资源。我们在前期利用这些数据开发出112个EST-SSR标记,此次研究选用其中11个标记对柿属(Diospyros L.)15个种20份试材进行了标记通用性检测。结果表明,所有引物均能扩增出产物,多态性引物比率达100%,并且UPGMA聚类结果可靠,说明柿EST-SSR标记在近缘种中可以通用。上述通用性标记为柿属植物遗传多样性研究提供了标记资源。

柿属植物基因组DNA提取方法比较

针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试剂盒较改良CTAB法提取的DNA质量高、杂质少,DNA得率略低,但其操作步骤简单,耗时短,毒害小,因其费用较改良CTAB法高,各实验室可根据自身条件选择适宜方法提取柿属植物DNA。

部分柿属植物SRAP-PCR反应体系的优化

SRAP技术是一种多态性和信息量丰富的新的分子标记技术,其技术简便、快速,不需预知序列信息,近年来在植物遗传多样性分析、种质鉴定、遗传连锁图的构建以及比较基因组学研究等方面得到广泛应用。为了建立柿属植物SRAP技术体系,对影响SRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq聚合酶、引物浓度等因素进行了优化。确定优化的反应体系为:模板DNA30ng,Buffer1×,Mg2+2.5mmol/mL,dNTPs0.2mmol/L,Taq酶1u,引物0.3μmol/L,反应总体积25μL。该体系在柿属植物6种1类型共29个基因型中获得较好的扩增结果,可望在柿属植物起源和进化研究中应用。

柿属植物种质资源遗传多样性的SSR分析

【目的】用SSR标记分析柿属植物种质资源的遗传多样性,为其有效利用提供依据。【方法】以7个柿种或变种的48份材料为研究对象,利用30对SSR标记对其进行遗传多样性分析。采用NTSYS-pc2.10e分析软件对SSR数据进行聚类分析。【结果】共检测到83个等位基因,每对SSR引物检测到3～6个等位基因变异,平均为4.9个。供试柿品种间的遗传相似系数介于0.397～1.000,平均为0.698,范围较大,说明柿资源种类较多、来源较广泛、遗传多样性较丰富。48份柿材料在相似系数为0.66水平上分为4大类,第Ⅰ类包括浙江柿和5个美洲柿及1个柿品种;第Ⅱ类只有2个资源,即油柿和野柿;第Ⅲ类为柿种下的大部分柿品种(27个);第Ⅳ类包括2个有核君迁子、3个无核君迁子、2个野柿、3个金枣柿及2个柿种下的品种;不同种类的柿种质资源基本分别聚在一起。同一种类下的不同类型也能区分开来。【结论】SSR标记是研究柿种质资源遗传多样性的有效手段。

浙江部分柿属植物鉴定及亲缘关系的SSR分析

应用SSR对浙江省分布的部分柿属植物(包括柿、浙江柿和金枣柿在内的3种46个基因型)进行了种质鉴定和亲缘关系分析。从已公开序列的20对柿属植物SSR引物中筛选出扩增谱带清晰和多态性丰富的引物11对;应用建立的技术体系,可将同物异名和同名异物的试材得以系统整理,一般认为是同一品种的兰溪大红柿与永康方柿,玉环长柿与永嘉长柿指纹图谱各有不同,应为不同种质。聚类分析结果表明,金枣柿(Diospyros sp.)与其他供试试材间的亲缘关系较远,支持其可能为一新种的观点;浙江柿(D.glaucifolia Metc.)与金枣柿的亲缘关系较远但与柿(D.kaki Thunb.)较近;部分供试日本柿种质与浙江省柿种质的亲缘关系较近。研究结果可为浙江省柿属植物种质资源保护和利用提供一定的科学依据。

柿属植物叶绿体DNA提取方法优化

利用Percoll密度梯度离心法,对4种柿属植物君迁子D.lotus L.、油柿D.oleifera Cheng、浙江柿D.glaucifolia Metc.、金枣柿D.kaki spp.进行叶绿体DNA(cp DNA)提取方法的优化,结果显示优化后的柿属植物cp DNA提取方法具有高效、简便、重复性好、稳定性高的特点;经检验,利用此方法提取的cp DNA质量好,浓度与纯度均较高,能够满足后续叶绿体PCR扩增、基因组测序等分子生物学试验。

柿属植物叶绿体蛋白质编码基因密码子用法

为给后续柿属植物叶绿体基因工程研究提供基础,利用Codon W、CUSP、SPSS软件对5个柿属植物叶绿体基因组中的55条蛋白质编码基因序列进行密码子使用模式分析。结果显示,柿属植物叶绿体基因组密码子第3位碱基GC含量为26.9%~27.8%,有效密码子数在49.58~50.18之间,密码子偏好性较弱;柿叶绿体基因组不同位置的有效密码子数不同,取值范围为32.36~59.64;中性绘图分析和ENC-plot绘图分析结果表明,柿叶绿体基因组的密码子偏好性主要受选择的影响;通过高频密码子和高表达优越密码子分析相结合的方法,筛选出23个柿属植物最优密码子,且这些密码子主要以A和U碱基结尾。

柿属植物cpDNA分子标记开发及遗传变异研究

基于柿属植物Diospyros spp.叶绿体全基因组测序结果,开发cpDNA分子标记,并利用16份柿属材料对其在种间及柿种内的可行性进行验证。结果表明:4个cpDNA标记在16份柿属植物中分别检测到31、27、7、25个变异位点,简约信息位点分别为14、5、2、13个。分别对4个标记进行聚类分析表明:CP1标记可以将11份柿品种与5个柿的近缘种完全分离,且柿与油柿距离最近,表明该标记适用于柿属植物种间资源鉴定和遗传变异分析,但不适用于柿种内;CP2、CP3、CP4标记均不能将柿品种与柿近缘种完全区分,但在11份柿品种间均检测到了多个碱基突变、插入和缺失位点,且多数柿品种发生变异的位点不同,只有‘富有’和‘中柿一号’两个品种未检测到特异的变异位点,故可以考虑用于柿种内的遗传变异研究。

正交设计优化柿属植物SSR-PCR反应体系

为了快速有效地确定柿属植物SSR-PCR反应体系,给柿属植物遗传多样性的SSR标记研究奠定基础,采用正交设计的方法,利用2×Taq PCR Master Mix,将Taq酶、dNTPs和Mg2+3个因素作为整体,综合评价其对柿属植物SSR-PCR反应体系的影响。结果显示:反应各因素水平对PCR反应均具有显著影响,其中Mix影响最大,引物次之,模板DNA最小;确定柿属植物SSR-PCR反应体系为模板DNA 2μL(40～100 ng)、2×TaqPCR Master Mix 10μL、引物1μL,总体积25μL;反应体系具有较高的重复性和稳定性,筛选出20对多态性较高的柿属植物SSR引物。

柿属植物化学成分及药理活性研究进展

柿属植物含有萘醌、三萜、黄酮等化合物 ,具有抗菌、驱虫、抗杜氏利什曼虫、抗突变。

制备柿单宁金属吸附剂的柿属植物种质筛选

以7份有代表性的柿属植物为对象,经真空冷冻干燥后制备成果粉,对果粉采用硫酸交联法制备出柿单宁金属吸附剂,比较其对Au(Ⅲ)吸附的效果以筛选出优质的柿单宁金属吸附剂种质。结果表明,不同类型种质的柿果实单宁质量分数差异明显,所制备的吸附剂对Au(Ⅲ)吸附率与单宁质量分数存在正相关;在供试柿种质中,油柿果实的单宁质量分数最高,且在果实发育期均维持较高水平,适合用作吸附剂制备专用种质;优选出盛花后140d的油柿果实为原料制备的柿单宁金属吸附剂对Au(Ⅲ)的吸附动力学和等温线数据表明该吸附过程容易发生,吸附容量高于1 200mg/g,显示其有良好的应用前景。

柿属植物分子标记和基因工程技术研究进展

综述了近年来柿属植物分子标记和基因工程方面的研究进展，结合目前的研究现状提出了未来柿属植物分子生物学研究的方向以及分子标记和基因工程技术在柿属植物种质资源和育种研究中的应用途径，评述了它们在柿属植物遗传育种上的应用前景。

不同处理对柿属植物DNA提取产率和品质的影响

基于CTAB法对鄂柿一号、前川次郎、君迁子3份材料进行DNA提取纯化,探讨不同采样时期、不同的纯化及沉淀方法对柿属植物DNA产率和品质的影响。结果表明,不同时期采样对DNA产率影响很大,随叶片生长,DNA产率不断下降,成熟叶片DNA产率仅为幼嫩叶片的16.7%～19.4%;在苯酚氯仿法、高盐乙醚法、CTAB沉淀法中以高盐乙醚法效果最好,可酶切,能有效去除多糖污染,产率较高;4种沉淀方法中,高浓度的盐溶液有助于去除多糖、多酚等杂质,相比单纯的乙醇或异丙醇沉淀可获得更高品质的DNA。另外,不同材料间提取DNA难度存在较大差异。

部分柿属植物TRAP标记反应体系的建立与引物筛选

为了建立柿属植物目标区域扩增多态性(TRAP)标记技术体系,对影响TRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、固定引物和随机引物浓度比5个因素进行了优化。确定优化的反应体系为:模板DNA 40 ng,buffer 1×,Mg2+1.4 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,固定引物和随机引物浓度比为11∶1,Taq酶0.5 U,反应总体积为15μL。利用柿属植物EST数据库信息设计锚定引物10条,与11条随机引物组合共110对引物。利用这些引物对柿属植物6个基因型进行TRAP-PCR扩增,其中84个引物组合能扩增出清晰条带,占引物总量的76.36%;36个引物组合表现出良好的多态性扩增,并在20份柿属植物中进行了引物验证。

柿属植物3种及栽培柿17个品种的抗寒性

用电解质渗出率法和示差热分析法 (DTA)测定了柿属植物 (Diospyros) 3个种及栽培柿 (D.kaki) 17个品种的抗寒性。结果表明 ,柿属植物种间抗寒性存在着很大差异 ,而栽培柿品种间抗寒性差异不大。供试材料中 ,君迁子 D.lotus最为抗寒 ,其中 D.lotus♂的抗寒性为 - 2 9.1℃ ,D.lotus♀的为 - 2 8.6℃ ;其次为栽培柿D.kaki,供试 17个品种的抗寒性范围在 - 2 1.0～ - 2 7.0℃之间 ;原产于亚热带地区的台东豆柿 D.taitoensis最不抗寒 ,仅耐 - 16 .5℃低温。降温速度对于树体冻害影响极大。若气温降至某一低温值 ,则到达该低温值所用时间越长 ,树体受低温伤害越重。低温驯化可在某种程度上提高柿品种的抗寒性。此外 ,供试材料抗寒性的强弱与其是否为甜或涩品种无关。

金枣柿与部分柿属植物亲缘关系的ISSR分析

应用ISSR标记对柿属(Diospyros)17份植物材料的亲缘关系进行分析,以明确金枣柿的分类地位。用君迁子(D.lotusL.)进行预扩增后,从100条引物中筛选出37条扩增清晰的多态性引物,这些引物共扩增出997条DNA条带,平均每个引物扩增的DNA条带数为26.94条,其中多态性DNA条带973条,占97.59%。根据ISSR扩增结果,进行聚类分析,结果表明:17份柿属材料可明显分为2个大类群,其中金枣柿的6份试材为一个大类群,与组成另一类群的3个种形成明显遗传界限。通过聚类分析,结合形态观察,认为金枣柿极有可能是柿属的又一个新种。

柿属植物DNA分子标记研究进展

经过近20 a的发展,DNA分子标记已经在柿属植物中得到较为广泛的应用。以基于核酸杂交、PCR、逆转座子及胞质基因组等不同类型的分子标记技术为线索,从种质鉴定、遗传多样性检测、亲缘关系重建,以及特殊种质的起源和重要经济性状的连锁分析等方面,扼要总结了DNA分子标记在柿属植物上的应用研究进展。同时对该领域的研究前景和尚需解决的问题进行了讨论,认为柿属植物DNA分子标记的开发应侧重于功能型分子标记、DNA条形码片段和品种标准DNA指纹图谱。