栀子苷元通过抑制内质网应激改善脾细胞凋亡治疗脓毒症的机制研究

目的评估栀子苷元(Genipin)对盲肠结扎穿孔术(Cecal Ligation and Puncture,CLP)诱导的脓毒症小鼠模型的治疗效果,并探讨其潜在的作用机制。方法将雄性C57BL/6小鼠分为假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)、栀子苷元治疗脓毒症组(Genipin+CLP组)。栀子苷元治疗组在建模后0 h和20 h经尾静脉注射2.5 mg/kg栀子苷元,而Sham组和CLP组注射等体积生理盐水。实验1,观察栀子苷元对脓毒症小鼠120 h生存率的影响;实验2,基于生存率的结果选取建模后36 h为采样时间点,并行以下方法检测:利用酶联免疫吸附法(Enzym-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)和白细胞介素6(Interleukin 6,IL-6)含量;常规苏木精-伊红(Hematoxylin eosin,HE)染色法检测肺和肝组织病理损害;Western Blot法检测脾脏内质网应激相关蛋白的表达变化,包括葡萄糖调节蛋白78(Glucose Regulated Protein 78,GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(Protein Kinase R-like Endoplasmic Reticulum Ki‐nase,PERK)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eukaryotic Initation Factor 2α,p-eIF2α)和C/EBP同源蛋白(C/EBP Homolo‐gous Protein,CHOP);脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal-deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP Nick End-labeling,TUNEL)检测脾细胞凋亡变化。结果与CLP组相比,栀子苷元治疗提高了脓毒症小鼠120 h生存率(P<0.05),降低了血清TNF-α和IL-6含量(P<0.05),并减轻肺和肝脏组织病理学损伤。另外,栀子苷元显著下调了脾脏GRP78、PERK、p-eIF2α和CHOP蛋白的表达水平(P<0.05),并进而减少内质网应激诱导的脾细胞凋亡数量(P<0.05)。结论栀子苷元能够明显减轻脓毒症所导致的脏器损害和过度炎症反应,改善脓毒症预后。该效应的作用机制可能与栀子苷元减轻脾脏内质网应激导致其凋亡机制的启动被阻断,进而减轻脾细胞凋亡有关。

栀子苷元衍生物的格氏反应

栀子苷元与乙二胺反应生成咪唑烷类拟单萜生物碱,再进一步与甲醛发生M ann ich反应生成另一新的类生物碱化合物2,我们将化合物2与苯基溴化镁、乙基碘化镁、和甲基碘化镁进行格氏反应得到3个新的类生物碱化合物。

栀子苷元与三羟甲基氨基甲烷的反应

以栀子苷为原料,栀子苷元为关键中间体,与三羟甲基氨基甲烷通过曼尼希反应仿生合成绣线菊碱的类似物,同时证明栀子苷是组合化学研究的一个理想起始原料。

栀子苷元及其包合物对人胰腺癌细胞在裸鼠体内增殖的抑制作用

目的:观察栀子苷元及其包合物对荷人胰腺癌PANC-1裸小鼠的抑瘤作用。方法:将荷人胰腺癌PANC-1裸小鼠随机分为栀子苷元小剂量组(50 mg/kg)、栀子苷元大剂量组(100 mg/kg)、栀子苷元包合物小剂量组(25 mg/kg)、栀子苷元包合物大剂量组(50 mg/kg)及模型组(生理盐水),每组10只。分别予尾静脉注射相应药物,干预治疗9周后计算抑瘤率,测定血清白介素(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10)、粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等浓度。结果:栀子苷元大剂量组和栀子苷元包合物小剂量组的肿瘤显著小于模型组(P<0.05或P<0.01),其中栀子苷元包合物小剂量组的抑瘤率最高(60%);其余两组肿瘤体积与瘤重略小于模型组,但无显著差异(P>0.05)。栀子苷元大剂量组IL-5、GMCSF、TNF-α浓度显著高于模型组(P<0.05或P<0.01),栀子苷元包合物小剂量组IL-4、IL-5、GM-CSF、TNF-α浓度均显著高于模型组(P<0.05);而栀子苷元小剂量组和栀子苷元包合物大剂量组仅TNF-α浓度显著高于模型组(P<0.01或P<0.05)。结论:栀子苷元和栀子苷元包合物对荷人胰腺癌PANC-1裸小鼠均有一定的抑瘤作用,且栀子苷元包合物作用优于栀子苷元;其作用机制可能与提高机体的抗肿瘤免疫作用有关。

栀子苷和栀子苷元血浆蛋白结合率的HPLC法测定

建立了高效液相色谱法测定栀子苷和栀子苷元的血浆蛋白结合率。采用C18色谱柱,流动相为乙腈-0.05%磷酸(15︰85),检测波长238 nm。测得栀子苷、栀子苷元与小牛血清白蛋白、人血清白蛋白和大鼠血浆的蛋白结合率分别为(38.1±4.2)%和(63.4±1.2)%,(17.6±4.9)%和(81.5±6.2)%,以及(24.5±3.8)%和(94.6±1.0)%。结果表明栀子苷元与血浆蛋白的结合力高于栀子苷。

栀子苷结构改造中间体的制备

将栀子苷置甲醇中用硫酸水解,成功得到甲基栀子苷元,用硼氢化钠还原栀子苷元,得到还原产物。

β-葡萄糖苷酶水解栀子苷的工艺研究

目的:研究栀子苷元最佳制备工艺。方法:采用β-葡萄糖苷酶水解的方法将栀子苷转化为苷元,以栀子苷元转化率为指标,正交试验优化β-葡萄糖苷酶水解栀子苷的工艺。结果:最佳水解条件为:水解介质pH4.5、反应温度50℃、酶用量9600U·ml-1,水解时间1h,栀子苷元转化率为44.7%,纯度为97.3%。结论:选取的水解工艺条件合理、可行,栀子苷元转化率高。

纤维素酶水解栀子苷的工艺条件研究

目的:考察纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的最佳工艺条件。方法:采用单因素实验设计,考察反应温度、反应时间、水解介质的pH值3个因素对纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的影响,确定纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元法的最佳反应条件。结果:纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的最佳工艺条件为:纤维素酶水解的反应温度为50℃,反应时间为2h,水解介质的pH值为5.1。结论纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的最佳工艺条件合理、可行,所得栀子苷元纯度较高。

京尼平的研究进展及其药理价值

从京尼平的理化性质、制备、检测和药理价值等几个方面进行了综述。京尼平是栀子苷的肠内代谢产物,是体内发挥药效作用的主要形式。同时,京尼平还在抗肿瘤、抗血栓、抗炎、治疗糖尿病等方面疗效显著,作为一种新兴的药物中间体具有很多新型的、重要的药理价值。

二次通用旋转试验设计优化栀子苷的酶解工艺

目的研究苦杏仁酶水解栀子苷制备栀子苷元的工艺条件。方法以产物得率为指标,通过二次通用旋转试验设计考察缓冲液pH值、反应温度、反应时间和酶加入量4个主要因素对工艺的影响,得出苦杏仁酶水解栀子苷的最合适工艺条件;采用理化性质及NMR谱鉴定产物结构,HPLC峰面积归一化法检测产物纯度。结果酶加入量、缓冲液pH值和反应时间对产物得率有显著影响,所确定的最合适工艺条件为缓冲液pH值5.25,反应温度50.5℃,反应时间90 min,酶加入量1∶10;产物栀子苷元得率>34.5%,质量分数为99.6%。结论用苦杏仁酶水解栀子苷制备栀子苷元的方法是可行的。

中草药有效成分的氚标记

分别采用氚水交换与低负压气液交换2种标记方法,标记了中草药的3个有效成分:栀子苷元、乙酰阿卡宁和绿原酸;经TLC和HPLC分离分析,放化纯度均>95%,比活度分别为5.97、3.24和470GBq/g。以上结果表明,氚水交换法及低负压气液交换法成功标记了含活泼双键的中草药有效成分。