分支杆菌医院感染株与消毒标准株对高效消毒剂戊二醛的抗性研究

目的 :研究分支杆菌医院感染株与消毒标准株对高效消毒剂戊二醛的抗性差异。方法 :通过悬液定量杀灭试验观察戊二醛作用不同时间对两株不同来源的分支杆菌的杀灭效果。结果 :2 %中性强化戊二醛作用 1min ,3min ,5min ,分支杆菌医院感染株的杀灭率分别为 94. 73% ,99 .989%和 99. 9990 % ;消毒标准株的杀灭率分别为 99. 4 7% ,99 .997%和 99. 9999%。结论 :分支杆菌医院感染株对 2 %中性强化戊二醛的抗力大于标准株。

鲤鱼细菌性败血症及穿孔病病原菌与嗜水气单胞菌标准株特性的比较研究

从发病渔场分离的鲤鱼细菌性败血病S - 1、S - 2致病菌株 ,鲤鱼穿孔病S - 3、S - 4致病菌株 ,与嗜水气单胞菌标准株作为对照 ,进行人工感染试验对健康鲤鱼具有很强的致病力 ,出现与自然病鲤相似的症状 ,并从人工感染发病鱼体内分离出同样特性的菌株 ,通过菌体形态 ,培养特性和生化反应等测定 ,符合嗜水气单胞菌的特性 ,并与嗜水气单胞菌标准株作平行试验 ,结果一致 ,确定鲤鱼细菌性败血症和穿孔病均是同一病原 。

54株分枝杆菌国际标准株16S-23S rRNA转录间隔区序列分析

目的分析54株分枝杆菌国际标准株16S-23SrRNA转录间隔区(ITS)序列,为临床分离株的鉴定提供参考。方法用16S-23SrRNA ITS序列分析法对54株分枝杆菌国际标准株进行分析,构建系统发育树,计算相似性百分比。结果除灰尘与微黄分枝杆菌;田野与千田分枝杆菌;抗热与副偶然分枝杆菌,奥布与母牛结核分枝杆菌;杜氏与猪分枝杆菌;金色与东海分枝杆菌,海与溃疡分枝杆菌、科莫斯分枝杆菌;2株结核分枝杆菌与田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌的16S-23SrRNA ITS序列完全相同无法鉴别外,其他各分枝杆菌菌种间16S-23SrRNAITS序列均不相同,可以得到很好的鉴别。结论 16S-23SrRNA ITS序列分析是一种很好的鉴定分枝杆菌的方法,国际标准株16S-23SrRNA ITS序列的研究弥补了基因数据库的不足。

分支杆菌医院感染株与消毒标准株对消毒剂的抗性研究

目的探讨分支杆菌戊二醛抗性株的抗性机制。方法采用PCR扩增分支杆菌热休克蛋白(HSP65)基因的一个约440bp片段,分析医院感染株与消毒标准株的HSP65基因有无改变。结果医院感染株与消毒标准株的PCR-RFLP图谱基本相同。结论分支杆菌医院感染株与消毒标准株对2%强化中性戊二醛的抗性差异与分支杆菌hsp65基因无相关关系。

广西40株犬种布鲁氏菌与六种标准株药敏试验的比较

布鲁氏菌病(以下简称布病)是人畜共患的自然疫源性疾病,对人的健康和畜牧业的发展危害很大。布病患者的主要治疗药物为抗生素,但是,有关布氏菌的药物敏感试验国内外报导较少。研究布氏菌的抗生素敏感性,对布病的治疗。

羊支原体性肺炎两标准株对抗菌药物敏感性的研究

本实验测定了环丙沙星、氧氟沙星、单诺沙星、红霉素、罗红霉素、泰勒菌素、泰妙菌素、四环素等8种药物对羊肺炎支原体两个标准株Y98和Y-goat的体外抑菌浓度以及红霉素与氧氟沙星、泰勒菌素对Y-goat和四环素与氧氟沙星、泰勒菌素对Y98的联合药敏作用。对羊肺炎支原体两个标准株对抗菌药物的敏感性进行了分析。

不同来源白色念珠菌标准株对常用消毒剂抗力的研究

目的观察不同来源(分别来自中国和美国)同为ATCC10231株的白色念珠菌对常用消毒剂的抗力。方法采用悬液定量杀菌试验法在实验室对不同来源白色念珠菌抗化学消毒剂能力进行了比较研究。结果用含1000mg/L有效氯的含氯消毒液作用5min,对中国白色念珠菌标准株平均杀灭率为99.01%,对美国标准株平均杀灭率为99.99%。用50mg/L有效碘的碘伏溶液作用0.5min,对中国白色念珠菌标准株平均杀灭率为98.90%,对美国标准株平均杀灭率为99.98%。用750mg/L苯扎氯铵作用0.5min,对中国白色念珠菌标准株平均杀灭率为99.35%,对美国标准株杀灭率为100%。用750mg/L醋酸氯己定消毒液作用0.5min,对中国白色念珠菌标准株平均杀灭率为99.00%,对美国标准株平均杀灭率为99.99%。结论同为标准株ATCC10231的白色念珠菌,对相同化学消毒剂的抗力国内使用的标准株明显高于美国标准株,提示用于消毒效果评价的标准菌株抗力存在差异。

禽副粘病毒2型标准株和国内分离株的透射电镜及免疫电镜观察

将禽副粘病毒 2型的标准毒株Yucaipa病毒和国内分离株F4、F6和F8株分别接种SPF鸡胚 ,收获鸡胚尿囊液 ;经差速离心和蔗糖密度梯度离心后 ,分别制备电镜样品和免疫电镜样品 ;经 10 g/L醋酸双氧铀负染后电镜观察病毒粒子形态。电镜下病毒粒子大小差别较大 ,形态呈圆形或椭圆型 ,直径 15 0— 3 0 0nm ,有结构致密的基质蛋白膜 ,有的囊膜外可见纤突。免疫电镜样品中病毒明显集中 ,便于观察。

标准株用于健康带菌检测的质量控制

采用标准株对所制培养基进行预检测及其混合标本带入检验程序作为经常性实验室质量控制。用于观察饮食从业人员带菌检测效果。本次预测培养基20批。合格范围在80%～100%;其中自制培养基合格率为80%～85%;成品培养基合格率较高为90%～100%。检测标本为4882人份,其质控组为2410人份,带菌检出率为1.08%;非质控组2472人份,带菌检出率为0.59%。经统计处理有显著性差异(x^2=3.92,P<0.05)。标准株用于质量控制可预测培养基的质量,考察操作技术水平,提高检验质量。

鸡白痢沙门氏菌CVCC578标准株VBNC研究模型的建立及鉴定

为建立活的非可培养状态（VBNC）研究模型．本研究利用液体LB和4℃联合条件对鸡白痢沙门氏菌CVCC578参考株的进行VBNC诱导，构建VBNC研究模型。同时依靠胎牛血清和程序性升温对处于该状态的菌体进行复苏．并对复苏前后的细菌进行了16SrRNA验证。结果表明：实验菌株经液体LB和4℃联合诱导后，可培养菌数在55天后降至零，总菌数在整个观察期内基本不变，而活菌数在150天后开始下降，180天后下降显著．表明实验菌株可在55天进入VBNC，

病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准卫生行业标准解读

2023年5月1日,《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022)正式实施,这是贯彻落实《中华人民共和国生物安全法》《国家卫生健康委人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构"十四五"发展规划》,健全完善病原微生物保藏和国家生物安全标准体系的具体体现和重要举措之一。本标准首次明确了人间传染的病原微生物菌(毒)种国家标准株的一个定义、四项评价原则、五种用途类型、三类评价指标,并首次规范了国家标准株评价技术程序和证明。标准实施后,必将有力支撑我国传染病防控、食品安全检测、生物计量等病原微生物标准株评价、应用的国家需求,逐渐减少对国外标准株长期依赖等"卡脖子"问题,在促进生物科技创新高质量发展的同时,助力国家生物安全和高水平科技自立自强。

HIV-1标准株资源库的初步建立与应用

目的构建代表我国HIV-1主要流行亚型的标准株,建立种子库和工作库。方法按照《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》要求,复核鉴定分析病毒的基因型和表型。对6株HIV-1标准株进行逐级放大扩增培养,构建第二代种子库和第三代的工作库,液氮冻存。结果获得了6株HIV-1标准株,其中3株为CRF07BC(NRPC2.4.9003、NRPC2.4.9005、NRPC2.4.9006),1株为CRF01AE(NRPC2.4.9001),1株为CRF08BC(NRPC2.4.9002),1株为URF(NRPC2.4.9004)。表型检测6株病毒均为CCR5嗜性、非融合诱导型。TCID_(50)均大于1×10^(5)/ml,p24抗原浓度均高于2 ng/ml,构建了每株不少于20支的种子库以及每株不少于50支的工作库,应用HIV-1标准株对抗病毒药物PEG2kC34、PEG5kC34、LP-19以及中和抗体LSEVh-LS-F进行评价。结论获得了涵盖我国主要流行亚型的HIV-1标准株6株,建立了HIV-1标准株资源库。填补了我国HIV-1标准株保藏的空白,为药物和疫苗评价提供了技术支撑。

肺炎链球菌国家标准株的建立与评价

目的依据《病原微生物菌(毒)种国家标准菌株评价技术标准》(WS/T 812-2022)对肺炎链球菌临床分离株进行筛选,建立肺炎链球菌国家标准株候选株。方法通过对肺炎链球菌候选株菌落形态、染色特征、生化特性等进行菌种确认;通过乳胶凝集实验、荚膜肿胀实验、多重聚合酶链式反应、cpsB基因测序等进行菌种分型鉴定;利用Nanopore三代测序平台对菌种进行全基因组测序。结果在700余株肺炎链球菌临床分离株中,共筛选出21株具有肺炎链球菌典型特征的菌株纳入国家标准株候选株。21株肺炎链球菌经3种方法分型诊断一致证实为血清型3、4、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F。菌株稳定性实验结果显示,连续传代30代后,其菌落形态、染色特性、生化特性以及血清型与原代菌株均保持良好一致性。研究所选21株肺炎链球菌均符合国家标准菌株的要求。结论本研究所获21株肺炎链球菌菌株具有相应病原菌的典型特征,可作为肺炎链球菌相关疾病监测、疫苗评价等工作的国家标准株的候选株。

病原微生物菌(毒)种标准株 艾滋病病毒毒株建立技术规范团体标准解读

艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)毒株是国家重要的生物资源,规范化HIV标准株的建立是开展艾滋病检测监测、疾病防控、试剂评估、治疗药物评价以及疫苗研发的物质基础。中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心牵头制定的中华预防医学会团体标准《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)于2023年2月2日起实施。标准首次明确了建立HIV标准株必备的样本、分离培养、滴定、鉴定、评价、保藏、信息、质量控制和生物安全的全过程技术要求,并规范了HIV毒株分离鉴定技术和标准株信息描述。本文从HIV标准株国内外研究现状、标准编制过程和主要内容,以及应用等方面深入解读,对推动我国HIV标准株资源库构建,提升保藏资源质量和生物安全管理水平,提高资源共享利用提供有益参考。

G1/G3/G5型乙型脑炎病毒国家标准株实验室鉴定与评价

目的确定G1、G3和G5三个基因型别的乙型脑炎病毒(乙脑病毒)国家标准株实验室鉴定评价指标,评价乙脑病毒国家标准株。方法依据病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准,基于乙脑病毒研究工作中的应用,以形态学特征、生物学特征、分子生物学特征等数据为基础,鉴定G1型(NX1889株)、G3型(P3株)和G5型(XZ0934株)三个基因型别乙脑病毒株的特征。结果乙脑病毒电镜下为球形颗粒,直径约为60 nm;感染BHK-21、Vero细胞后,细胞病变效应以细胞圆缩脱落为主,感染C6/36细胞后,表现为细胞融合和脱落;病毒滴度为10^(5)~10^(7)PFU/ml,噬斑大小存在型别差异;G1、G3和G5型乙脑病毒三周龄小鼠腹腔攻毒的半数致死量为50.51 PFU、6.98 PFU、8.13 PFU,五周龄小鼠颅内攻毒的半数致死量为3 PFU、0.3 PFU、1.35 PFU;G1、G3和G5型乙脑病毒基因组全长分别为:10967 bp、10976 bp和10983 bp。结论通过乙脑病毒电镜、细胞、动物和基因组等实验室指标的确定,鉴定与评价了三个基因型别乙脑病毒国家标准株,为其他病毒国家标准株的鉴定与评价提供了参考。

我国HIV流行毒株分离培养与标准株筛选鉴定

目的通过对我国人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者全血样本中的HIV进行分离培养与基因型、表型鉴定,筛选符合中华预防医学会团体标准《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)评价要求的HIV标准株。方法收集48份HIV感染者全血样本;通过分离样本中的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),并将其与健康人全血样本中分离得到的PBMCs共培养分离感染者体内的HIV,测定培养上清液中的p24抗原浓度和病毒滴度;对于分离成功的毒株,提取病毒RNA,对gag、pol基因和env C2V3片段进行扩增测序,判断基因型、基因重组和耐药位点;通过将病毒培养上清液接种到表达CCR5或CXCR4的Ghost细胞,判断病毒嗜性;通过将病毒培养上清液接种MT-2细胞,观察合胞体的形成。结果从48份HIV感染者的新鲜EDTA抗凝全血中分离培养出14株病毒培养上清液的p24抗原浓度>1 ng/ml的HIV毒株;1株病毒滴度≥10^(5)TCID_(50)/ml,8株滴度≥10^(4)TCID_(50)/ml,5株滴度≥10^(3)TCID_(50)/ml;其基因型为9株B亚型、3株CRF01AE重组型和2株CRF07BC重组型;14株HIV毒株中11株含有耐药位点;细胞嗜性分析结果显示其中8株为CCR5嗜性,6株为CXCR4/CCR5双嗜性;14株毒株中只有2株可引起MT-2细胞病变,为合胞体诱导型。结论本研究共分离出14株具有HIV典型生物学、遗传学特性的HIV毒株,经评价1株为符合《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)的HIV标准株。本研究可为HIV-1标准株的筛选提供技术指导。下一步可按照标准株的共享机制完成申请及储备库建设,为HIV疫苗与药物研发等相关研究提供资源。

高等级生物安全实验室终末消毒效果评价用枯草芽孢杆菌标准株的评价与应用

目的依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022)建立高等级生物安全实验室终末消毒评价用枯草芽孢杆菌标准菌株。方法选择4株国内分离的枯草芽孢杆菌,通过对标准菌株菌落形态、染色特性、生化特性以及全基因组测序,对标准菌株进行生物学特性和分子特征分析;再将4种标准菌株制成一定浓度的菌片,与市售的菌片一起对动物生物安全三级实验室及关键防护设备进行终末消毒效果的评价。结果候选4株菌株均鉴定为枯草芽孢杆菌,全基因组均为环形,不含质粒;在相同消毒条件下,与ATCC9372一样,置于房间、生物安全柜和小鼠通风笼架4种候选菌株的菌片均可完全被杀灭。结论本研究建立了高等级生物安全实验室终末消毒评价用枯草芽孢杆菌标准菌株,这些标准菌株的建立为消毒评价用菌株的国产化奠定了物质基础。

病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术程序探讨

2022年11月,国家卫生健康委员会发布了《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022),明确了病原微生物菌(毒)种国家标准株的定义,对国家标准株的评价指标作出统一技术要求,并制定了国家标准株评价技术程序的基本框架。为进一步开展国家标准株的评价工作,推动国家标准株支撑实际工作需要,有必要制定《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价工作指导书》等技术程序,阐述国家标准株的评价操作流程,确定提交国家标准株申请后菌(毒)株复核鉴定、评价组组建、资料审查、会议评价、评价结果报告等要求。评价技术程序将成为国家病原微生物资源保藏标准体系的重要补充和拓展,有助于推动国家标准株应用落地,提高我国病原微生物资源整体保藏质量。

国家病原微生物资源库对一株嗜肺啮齿杆菌的标准化鉴定与收录

目的参照国家病原微生物资源库中国医学科学院菌毒种保藏中心实验动物与人兽共患病保藏分中心的鉴定、收藏程序以及国家标准菌株的鉴定要求,对一株分离自江西省实验小鼠呼吸道的嗜肺啮齿杆菌进行标准化鉴定并保存入库。方法江西省职业病防治研究院(江西省实验动物质量检测站)按照GB14922.1和GB14926.12的要求对实验小鼠进行常规监测采样,分离病原菌株,初步鉴定为嗜肺啮齿杆菌;菌株由国家菌毒种保藏中心进行菌落、菌体特征、生理生化特性、16S rRNA管家基因系统发育分析和基因组序列分析,并进行人工感染小鼠实验评价其致病性。结果实验小鼠分离出1株嗜肺啮齿杆菌,动物无其他明显异常;经鉴定该菌株的菌落、菌体特征以及生理生化特征与模式株NCTC 8141(Rodentibacter pneumotropicus)相似;16S rRNA基因序列与模式株NCTC 8141的同源性为98.37%,在系统发育树中与模式株NCTC 8141聚为一个分支,自举数据值达96%;基因组序列分析,分离株与模式株NCTC 8141之间的ANI值为97.97%,dDDH值为80.3%,高于国际标准95%和70%的分类界限;嗜肺啮齿杆菌江西分离株滴鼻感染ICR(Institute of Cancer Research)小鼠临床病症及肺组织病理改变与模式株NCTC 8141相似。结论国家实验动物与人兽共患病菌毒种保藏分中心将之命名为嗜肺啮齿杆菌江西株(Rodentibacter pneumotropicus),并对该菌株进行标准化保藏,收录编号CCPM-B-B-006-2209-2。