套式/多重PCR检测疟疾感染的应用研究

目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,并与镜检法进行比较。结果79份样本中,用标签引物-套式/多重PCR技术检出间日疟原虫阳性6例,镜检初检出10例间日疟原虫阳性,经复查血片后有4例排除了疟疾感染。镜检复核阳性的6例样本PCR均为阳性。以镜检复核为标准,两法阳性和阴性符合率为100%。结论标签引物-套式/多重PCR检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值。

套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性和稳定性初探

目的提高标签引物-套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。方法用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病(感冒,流感,伤寒,肝炎等)患者血样20份;抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4m1,进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感染血样;健康者血样作对照。用热裂解法制备DNA模板,用线粒体细胞色素氧化酶基因作为靶基因,应用相关软件和网络资源(PrimerPremier5.0,PUBMED,NCBI-BLAST和Mfold服务器)设计和优化标签引物-套式/多重PCR,并用于检测所采集制备的各种血样。结果间日疟与恶性疟患者血系列稀释为含1000、100、10和1个虫/μl后经标签引物-套式/多重PCR检测,恶性疟和间日疟患者各稀释含虫血样分别在611bp和255bp出现1条带,能检测到原虫密度均为1个虫/μl血;非疟疾发热病人血样30份及其他传染病患者血样均为阴性;健康者血样未出现扩增条带,每种血样反复测试3次以上均获得同样结果。结论经优化的标签引物-套式/多重PCR在疟疾诊断中具有较高的敏感性、特异性和稳定性。

单管-套式/多重聚合酶链反应在间日疟原虫基因型鉴定中的价值

目的 对单管 套式多重聚合酶链反应 (PCR)鉴定间日疟原虫基因型方法的应用价值进行研究。方法 以间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因为模型 ,综合套式多重PCR、等位特异PCR和标签引物扩增等技术 ,使用PrimerPremier 5 0软件和NCBI的BLAST网络改进与优化引物设计 ,并用矩阵试验法优化反应条件和程序 ,同时 ,用单管 套式多重PCR和套式PCR对 71份间日疟患者血标本的间日疟原虫基因型鉴定结果作比较。结果 单管 套式多重PCR可同时扩增出 3种不同长度的基因型 /族特异片段 ,且基本消除了二聚体等噪音。用单管 套式多重PCR鉴定检测 71份间日疟患者血标本 ,6 2份与套式PCR鉴定结果一致 ,并新发现 6份不同基因型和PV Ⅱ型的混合感染 ;还将 2份套式PCR鉴定为热带族的血标本纠正为PV Ⅱ型 ,1份阴性血样鉴定为温带族。结论 研究建立的单管 套式 /多重PCR鉴定间日疟原虫基因型的方法 ,简化了试验步骤 ,节省了试剂耗材 ,消除了PCR噪音 ,提高了检出间日疟原虫混合感染和低度感染的敏感性 ;