时间分辨免疫荧光技术在检验医学中的发展现状

标记免疫分析法创立于60年代初期,是将多种标记示踪技术的高度敏感性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的产物,包括放射免疫(RIA),酶联免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA).TRFIA具有零本底、灵敏度高、重复性好、特异性强、线性范围宽和应用广泛等特点,是继放射免疫分析之后,标记免疫分析法发展的一个新的里程碑,是当代配基分析中最有发展前景的分析手段.本文就时间分辨免疫荧光分析技术作如下综述.

六种TSH检测方法的对比研究

采用六种免疫检测方法检测血清促甲状腺激素（TSH），分析检测方法间的差异性和相关性及对临床诊断的影响。纳入研究的样品150份，甲亢、甲减和表面健康人各50份。免疫检测方法包括一种放射免疫分析法（RIA），一种免疫放射分析法（MRIA），四种自动化检测方法（三种化学发光免疫分析法和一种电化学发光免疫分析法）。结果表明，六种免疫方法在检测血清TSH时相互之间存在不同程度差异（P〈0．05），其中RIA法在甲亢组和表面健康组的检测值与其他方法的检测值间均不具有相关性（P〉0．05）；IRMA法在甲亢组的检测值与四种自动化检测法的检测值相关系数较低（r为0．38—0．41）；四种自动化检测法两两之间的检测值问均高度相关（r为0．92—0．99）。在临床诊断符合率方面，四种自动化检测法相互间无显著差异；IRMA法在甲亢组同四种自动化检测法有显著差异（P〈0．01），而RIA法不能将甲亢病人同表面健康组区分，不宜用于甲亢诊断。

总三碘甲状腺原氨酸定量标记免疫分析试剂盒质量标准的验证

目的对总三碘甲状腺原氨酸(Total triiodothyroxine,TT3)定量标记免疫分析试剂盒质量标准进行验证。方法对具有代表性的6个厂家的TT3定量标记免疫分析试剂盒进行外观和物理检查后,进行线性、最低检出限、准确性、精密度、质控品测定值、特异性和稳定性验证。结果 6个厂家的TT3定量标记免疫分析试剂盒外观和物理检查均达到要求;最低检出限最高为0.3 ng/ml;质控数据均呈3个梯度;准确性、精密度、特异性及稳定性良好。该类试剂盒基本满足此行业标准规定的要求,也基本符合此类试剂盒的现阶段的技术要点。结论 TT3定量标记免疫分析试剂盒质量标准的制定,对此类试剂盒的实验方法及质量标准进行了规范,进而促进产品质量的不断提高,也为该产品的检验检测、临床使用评价及监管提供了技术依据。

总甲状腺素定量标记免疫分析试剂盒行业标准的制定及验证

目的制定总甲状腺素(total thyroxine,TT4)定量标记免疫分析试剂盒行业标准,并进行验证。方法对3种不同免疫分析方法(时间分辨法、化学发光法、磁微粒免疫法)的5个厂家的TT4定量标记免疫分析试剂盒的外观和物理检查、线性、最低检出限、准确性、精密度、质控品测定值、特异性、稳定性8项行业标准进行验证。结果 5个厂家的TT4定量标记免疫分析试剂盒的外观和物理检查、线性、最低检出限、精密度、稳定性均达到要求,准确性、质控品测定值、特异性良好。该行业标准能反映现阶段该类试剂盒的技术要点,可对此类试剂盒进行科学的质量评价。结论制定了TT4定量标记免疫分析试剂盒的行业标准,并进行了验证,该行业标准的制定有利于对该类试剂盒的质量进行合理控制,促进厂家提高生产水平,同时为相似类型行业标准的制定提供了参考。

从噬菌体展示肽库中筛选与人精子蛋白17结合的短肽序列

目的:随机从噬菌体12肽库中筛选与人精子蛋白17(Sp17)特异性结合的短肽序列,并进行鉴定。方法:以基因工程制备的人Sp17为钓饵蛋白,采用亲和淘筛法对噬菌体肽库进行三轮亲和淘筛。富集Sp17特异结合噬菌体,用ELISA鉴定其结合活性并进行DNA测序分析。结果:随机挑出20个噬菌体克隆进行鉴定,ELISA显示其中5个克隆与Sp17有较强结合活性,其氨基酸序列分别为QLMSNIHRRM II、RKMMNQTKRHLP、NTMKTMR IMMTR、RRRLLLMQRRMKR和SPRPMMRR IRKQ。结论:从噬菌体展示肽库中筛选鉴定出5个与人Sp17结合的12肽序列。

蓖麻毒素检测分析方法的研究进展

蓖麻毒素(ricin toxin,RT)是从植物蓖麻种子中提取的最强的植物蛋白毒素之一,真核动物细胞对RT敏感,mg级的剂量即可导致动物和人中毒甚至死亡。RT的分子结构为糖蛋白的异二聚体,它由两个亚基组成,通过二硫键相连。其中A亚基为毒性多肽链A链(RTA)是活性链,具有抑制蛋白质合成的N-糖苷酶的活性部位,能从4324位腺嘌呤处切断真核细胞核糖体28 S rRNA,导致蛋白质翻译停止而引起细胞死亡^([1-2]);B亚基为凝集素B链(RTB)是结合链,RTB与靶细胞表面的糖蛋白或糖脂结合,介导毒素内吞进入内质网并释放RTA进入细胞质。