逆转录病毒介导的标记基因neo导入恒河猴原代肌肉母细胞的实验研究

目的 :探索逆转录病毒介导的neo基因导入恒河猴原代肌肉母细胞的转染条件和方法。方法 :逆转录病毒上清在不同条件下与肌肉母细胞共同培养 ,观察肌肉母细胞体外增殖情况 ;用免疫荧光染色和流式细胞仪分析在转染过程中肌肉母细胞的表型Thy 1,NCAM和Desmin的变化 ;克隆PCR分析不同情况下导入基因的转染率和评价导入靶细胞标记基因的稳定性。结果 :含有 2 0 %FCS ,5 %鸡胚液的F10细胞培养液培养肌肉来源的干细胞能获得高纯度的肌肉母细胞Thy 1(85 0± 5 0 ) % ,NCAM (96 7± 5 8) % ,Desmin (95 7± 2 1) % ,而且这些表型不受转染的影响 ;持续暴露于病毒载体上清抑制肌肉母细胞的体外增殖 ;每天肌肉母细胞暴露于病毒载体上清 6h ,可获得 (6 3 9± 7 3) %的转染率 ,而且细胞体外增殖不受影响 ,转染后继续体外培养 2个月 ,转染率不下降。结论 :逆转录病毒介导的neo基因能高效率的导入肌肉母细胞 ,而且能稳定地整合到细胞DNA内 。