兔子宫内膜中标记滞留细胞的初步鉴定

目的:利用鉴定标记滞留细胞(LRC)的方法分析兔子宫内膜中可能存在的成体干细胞及其分布。方法:首先用促性腺激素处理兔,将子宫内膜调整到增殖期,并采用免疫组织化学方法鉴定增殖期子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,以评价子宫内膜的增殖期状态。BrdU标记后追踪8周,以鉴定LRC细胞的存在与分布。结果:增殖期子宫内膜较促性腺激素处理前明显增厚,子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体与PCNA的表达明显升高。8周追踪后,子宫内膜中有(2.1±2.4)%的细胞核为BrdU阳性,即LRC细胞。这些LRC细胞主要存在于腔上皮组织中。结论:在成年兔子宫内膜中有LRC存在,子宫内膜成体干细胞可能存在于这些LRC中。

标记滞留细胞技术结合干细胞标记物检测小鼠子宫内膜干细胞

目的通过标记滞留细胞技术检测昆明小鼠子宫内膜干细胞的存在及其分布情况;观察P63和Musashi-1在不同周龄小鼠子宫内膜的表达以及两者与标记滞留细胞的关系,探讨P63和Musashi-1作为子宫内膜干细胞特异性标记物的可能性。方法出生3天雌性昆明小鼠皮下注射BrdU,分别在1w、2w、3w、4w、6w、8w和10w处死小鼠取其子宫。采用免疫组化法分别检测BrdU、P63和Musashi-1在各周龄小鼠子宫内膜的表达情况。结果标记后1w的小鼠,子宫内膜绝大部分的上皮和基质细胞都被BrdU标记。随着小鼠周龄的增加,子宫内膜BrdU阳性细胞百分率逐渐降低。至第8w时,仅在基质中有极少量的BrdU阳性细胞,主要位于基质与肌层交界处。早期小鼠子宫内膜组织中P63和Musashi-1阳性细胞数量较多,随着子宫内膜的逐渐发育成熟,P63和Musashi-1的表达逐渐减少,其表达规律及分布与标记滞留细胞基本一致。结论 (1)小鼠子宫内膜标记滞留细胞主要位于基质内膜与肌层交界处,这些细胞的分布与推测的子宫内膜干细胞的分布部位相符。(2)P63和Musashi-1是较特异的干细胞标记物。

胃癌组织中标记滞留细胞的初步鉴定

目的研究裸鼠胃癌组织中标记滞留细胞的存在及其分布特点。方法培养人胃癌细胞株BGC-823,5-BrdU标注后接种于裸鼠右腋窝皮下。于接种后10、20、28、35、42、49、56d处死裸鼠,取其右腋下肿瘤结节进行免疫组化检测。结果实验组接种后第10天,裸鼠肿瘤组织中标记滞留细胞(LRCs)表达最高,达到96.14%,随着时间的增加,LRCs逐渐降低,到第80天在肿瘤中仅有极少量细胞表达BrdU,约占0.51%,主要位于癌巢的边缘部位,细胞形态与BrdU阴性细胞无明显的差异。结论胃癌BGC-823细胞株在裸鼠体内形成的肿瘤内存在标记滞留细胞,这部分细胞与肿瘤干细胞密切相关,可能在维持肿瘤生长、转移、复发方面发挥重要作用。

溴脱氧尿苷标记滞留细胞在SD大鼠足垫皮肤及汗腺的分布

目的:将溴脱氧尿苷(BrdU)作为标记滞留细胞(LRCs)标记物,通过对皮肤组织中LRCs的检测,证实干细胞的存在及其分布。方法:SD大鼠予50 mg·kg^(-1)·次^(-1)BrdU腹腔注射,每天4次,每次间隔2h,连续2d。最后一次注射后第6周,处死之,取双后足垫。免疫组化染色对表达BrdU细胞进行检测。结果:BrdU阳性细胞散在分布于真皮层的外泌汗腺蟠状分泌部、弯曲和直导管部。BrdU阳性细胞表达率在外泌汗腺(4.2±1.3)%)明显高于在表皮基底层(0.5±0.1)‰)(P<0.05)。结论:大鼠后足垫外泌汗腺中存在的这些干细胞或许在皮肤及其附件损伤修复中发挥重要作用。

小鼠输卵管中标记滞留细胞的定位研究

本研究旨在探讨小鼠输卵管中标记滞留细胞的存在与分布情况。C57乳鼠从出生后第3天开始,每隔1天分别在9:00和16:00皮下注射BrdU(5-溴-2-脱氧尿苷),8周后对输卵管取材进行冰冻切片和免疫荧光染色,用以检测BrdU标记滞留细胞的定位情况。结果显示:经过长周期的定位示踪,输卵管中有标记滞留细胞的存在,这些细胞自输卵管远端(壶腹部方向)至近端(峡部方向)呈现明显的梯度分布,并且其主要位于上皮组织中。以上结果表明,成年小鼠的远端输卵管上皮中很可能存在相应的前体细胞或干细胞。

用BrdU标记滞留细胞联合Sox2表达检测晶状体干细胞

目的检测小鼠晶状体上皮细胞中可能存在的晶状体干细胞及其分布位置。方法 60只(60眼)Balb/c小鼠随机分为BrdU标记组和生理盐水对照组,每组各30只(30眼)。BrdU标记组以150mg·kg-1剂量的10g·L-1BrdU每天2次腹腔注射,连续注射10d。生理盐水对照组以15mL·kg-1生理盐水每天2次腹腔注射,连续注射10d。在BrdU或生理盐水注射结束后0周、1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周、12和14周分别处死3只小鼠,制备眼球冰冻切片。通过免疫荧光化学染色观察晶状体上皮BrdU标记细胞的量和分布变化。在BrdU标记组,通过免疫荧光化学染色观察0周、4周、8周、12和14周晶状体上皮细胞Sox2蛋白的表达及分布规律。通过BrdU-Sox2双标记免疫荧光染色观察BrdU-Sox2双标阳性细胞。结果 BrdU标记组在完成BrdU标记时(0周),晶状体上皮中央区和赤道区BrdU标记率均达100%;随着时间延长,中央区和赤道区的BrdU标记率逐渐下降,至12周时降至最低,中央区和赤道区分别为14.23%、5.86%(P=0.000);14周时中央区和赤道区分别为14.97%、6.11%(P=0.000),分别与12周时两区比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。0周、4周、8周、12周和14周时,中央区Sox2阳性细胞率分别为3.74%、3.47%、4.23%、4.09%和3.70%,赤道区Sox2阳性细胞率分别为0.66%、0.37%、0.47%、0.33%和0.51%,各时间点中央区与赤道区Sox2阳性细胞率差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Sox2在晶状体上皮细胞内表达稳定,主要分布于中央区。部分BrdU阳性细胞表达Sox2,即BrdU-Sox2双标阳性细胞,集中分布于晶状体上皮中央区。结论表达Sox2的标记滞留细胞可能是晶状体干细胞,主要分布于晶状体上皮中央区。

脑胶质母细胞瘤干细胞球中标记滞留细胞表型研究

目的 对悬浮培养的脑胶质母细胞瘤干细胞球中的标记滞留细胞进行表型研究.方法 通过荧光标记滞留分析区分胶质母细胞瘤干细胞球中的标记滞留细胞及标记阴性细胞;通过体外克隆分析比较上述两类细胞的自我更新能力;以Western blot检测分化前后分化标记物的表达,评估其体外分化能力;给予放、化疗处理后检测细胞增殖,评估其放、化疗敏感性;通过免疫缺陷鼠颅内种植,评估其成瘤能力.结果 胶质瘤干细胞球细胞经初始DiI荧光标记示踪2周后,可区分慢增殖的DiI滞留细胞,其比例＜10％及快增殖的DiI阴性细胞.DiI滞留细胞经多次传代克隆分析,其克隆成球率保持恒定,而DiI阴性细胞呈显著下降（P＜0.05）.DiI滞留细胞分化后分化标记物GFAP,PDGFRα以及βⅢ-tubulin蛋白表达相对于分化前显著上调（P＜0.05）.给予10 Gy剂量照射或500μm/l替莫唑胺处理72 h后,DiI滞留细胞增殖相对于处理前无显著改变,而DiI阴性细胞增殖显著下降（P＜0.05）.仅约100个DiI滞留细胞在最长追踪观察6个月时在免疫缺陷鼠颅内已可成瘤,而相应数量的DiI阴性细胞未能成瘤.结论 胶质母细胞瘤干细胞球中呈现慢增殖特性的标记滞留细胞相对于标记阴性细富集了肿瘤干细胞.

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记在喉黏膜干细胞的研究

目的以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-BrdU)为标记对小鼠喉黏膜可能存在干细胞进行初步研究。方法选取出生3 d的昆明小鼠36只,随机分为A、B和C组,每组12只。A组小鼠皮下注射100μg/g的5-BrdU,B组小鼠皮下注射50μg/g的5-BrdU,C组小鼠皮下注射生理盐水。第8周后分别处死各组小鼠,并取小鼠喉黏膜进行免疫组化检测,计算其标记滞留细胞的阳性率。结果 8周后,注射了5-BrdU的A组与B组小鼠喉黏膜鳞状上皮有标记滞留细胞表达但两组间表达无统计学意义(t=0.06,P=0.949)。C组小鼠喉黏膜鳞状上皮无标记滞留细胞表达。结论 A、B两组小鼠喉黏膜存在标记滞留细胞,此标记滞留细胞具有喉黏膜成体干细胞的一些特点,可能是成体干细胞的来源。

表皮干细胞鉴别与分离的研究进展

近年来,对干细胞的深入研究揭示了表皮主要由三种细胞成分组成表皮干细胞(epidermalstemcells熏ESCs)及其子代细胞——短暂增殖(transitamplifying熏TA)细胞、有丝分裂后(post鄄mitoticdiffer鄄entiating熏PMD)细胞。但由于尚未找到能够有效区别ESCs与TA细胞的方法,限制了以ESCs的分离及体外培养为基础的研究工作与临床应用。本文就ESCs的鉴别、分离方法的研究进展进行综述。

小鼠子宫内膜干细胞的存在及其分布规律

目的通过标记滞留细胞技术检测昆明小鼠子宫内膜干细胞的存在及其分布规律。方法取出生3 d雌性乳鼠皮下注射BrdU50μg/g体重,连续3 d。分别在注射后第1、2、3、4、6和8周取子宫。采用免疫组化SP法检测子宫内膜BrdU的表达情况,并在高倍镜下计算阳性细胞百分率。结果 BrdU阳性细胞在第1周时在内膜上皮及基质部均广泛表达,但阳性细胞的数量随时间逐渐下降,至第8周时则主要位于基质部血管周围以及基质与肌层交界处。结论小鼠子宫内膜基质中存在成体干细胞。

奶牛乳腺上皮细胞培养体系中疑似干/祖细胞的鉴定

为了揭示奶牛乳腺干细胞在体外泌乳调控中的潜在作用,本研究根据成体干细胞具有BrdU标记滞留的特点检测了奶牛乳腺上皮细胞(DCMECs)中疑似乳腺干/祖细胞,同时分析了两种新发现的乳腺干细胞分子标志(FNDC3B和PROCR)的表达定位,验证了它们指示DCMECs的可行性。通过实时荧光定量PCR方法检测分析DCMECs体外培养过程中催乳素、生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体的基因表达变化。结果显示,连续培养25d后BrdU标记滞留细胞比例接近0.4%,极少数细胞呈FNDC3B或PROCR阳性,可以观察到不对称分裂细胞,原代和传代后DCMECs在激素、胰岛素样生长因子及其受体mRNA水平上差异极显著(P<0.01)。总之,在非诱导泌乳分化培养条件下,脱离泌乳生理环境的DCMECs自身具有的泌乳调控基因表达迅速受到抑制,但在一定培养时间内,DCMECs群体中能够保留一定比例疑似乳腺干/祖细胞,提示这些多能奶牛乳腺干/祖细胞在体外泌乳调控和乳腺腺泡重塑过程中可能发挥重要作用。

干细胞与子宫内膜异位症

子宫内膜异位症是一种良性妇科疾病,其发病机制涉及诸多因素,最终导致子宫腔外出现子宫内膜腺体及间质.近年来,一系列实验发现可能存在子宫内膜干/祖细胞,这些细胞与骨髓干细胞被认为与子宫内膜周期性更新和一些妇科疾病发病有关.该文分析了子宫内膜干细胞的研究结果 及这些细胞与子宫内膜异位症的关系,并为今后的研究提供了一些建议.

人表皮干细胞分离培养和纯化鉴定的进展

皮肤体现出很强的再生能力,是由于表皮基底层中的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)终身不断自我更新、持续分化以取代终末分化细胞,从而在维持组织结构的更新、细胞内环境的稳定及在创伤后创面修复过程中起至关重要的作用。随着分子生物学、细胞生物学。

免疫荧光双标法在小鼠表皮干细胞分子标记筛选中的应用

目的用标记滞留细胞(LRCs)及免疫荧光双标记法进行小鼠表皮干细胞可靠分子标记的筛选。方法选择出生5 d的昆明小乳鼠进行腹腔注射5-溴,2-脱氧尿嘧啶(5-bromodeoxyuridine,BrdU),隔日注射,连续7 d。于注射后第90天进行取材,在冰冻切片上分别进行BrdU与整合素β1、P63和CD34的双重免疫荧光标记,观察这些标记物与BrdU的符合度。结果 90 d后小鼠皮肤上皮细胞中仍有少数阳性细胞,主要存在于毛囊的隆突部位,另有少数阳性细胞散落在基底层。免疫荧光双标的结果示,Brdu与整合素β1双标阳性的细胞占所有整合素β1阳性细胞的81%,占所有Brdu阳性细胞的94%;Brdu与P63双标阳性的细胞占所有P63阳性细胞的65%,占所有Brdu阳性细胞的86%;Brdu与CD34双标阳性的细胞占所有CD34阳性细胞的30%,占所有Brdu阳性细胞的62%。结论整合素β1与BrdU的符合率最高,P63其次。β1和P63是这些分子标记物中筛选干细胞最好的指标。

口腔黏膜中存在间充质干细胞的探索性实验研究

目的:确定口腔黏膜间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的存在及分布。方法:SD大鼠腹腔注射溴脱氧尿苷(BrdU),分别于注射后2、4、8周,免疫荧光法观察大鼠口腔黏膜中BrdU阳性细胞的存在及分布。结果:大鼠口腔黏膜内存在散在分布的BrdU阳性细胞,4周后阳性细胞比率趋于稳定。结论:SD大鼠口腔黏膜固有层存在间充质干细胞,该实验为进一步分离、鉴定以及研究MSCs在口腔黏膜病发病中的作用提供基础。