地高辛标记DNA探针对茶园NPV的检测

研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 CFU/μL。以感染病毒致死的茶尺蠖幼虫为试材,提取病毒基因组DNA,采用斑点杂交法检测均得到强的杂交信号。斑点杂交检测可有效区分茶园中几种核型多角体病毒,表明地高辛标记DNA探针的特异性好。

用狄高辛标记DNA探针对鸡MD病流行病学研究进展

广西兽医研究所用狄高辛标记的DNA探针对鸡马立克氏病(MD)进行流行病学研究。通过对广西大群饲养的地方良种三黄鸡自然感染MD鸡羽囊排毒规律的研究和从人工感染鸡羽囊、脏器以及同居感染鸡羽囊直接检出病毒核酸,不仅使该病的研究发展到分子水平,更重要的是为该病防制提供了详细的流行病学资料,其主要研究进展如下。1、阐明了自然感染MD三黄鸡羽囊排毒的最早时间和排毒规律。检测广西不同地区5个鸡场共854羽份不同日龄的鸡羽囊。

一种利用Taq酶快速标记DNA探针的方法

目的 :探索低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。方法 :以特定引物和 16mer的随机引物作为延伸引物 ,利用Taq酶标记DNA探针。以大肠杆菌Klenow片断随机引物延伸标记法作为对照。点杂交方法检测探针标记效果。结果与结论 :Taq酶标记法和大肠杆菌Klenow片段随机引物延伸标记法同样有较好的标记效果 ,且随机引物或特定引物作为延伸引物均可以合成足够有效的探针。Taq酶标记法是一种低成本、高效。

地高辛配基标记DNA探针检测HLAⅡ类基因技术的建立

本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针杂交;条件洗涤、化学发光显影等一系列步骤。该实验方法具有用血量少、结果精确稳定、操作简便安全、不污染环境等优点。作者对模板DNA的提取、杂交缓冲液制备、标记探针的使用剂量以及条件洗涤等多个环节作了改良,使实验方法和结果进一步优化。

一种快速低廉的PCR探针标记方法

【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现标记产物在电泳时相对非标记的对照表现明显滞后,表明探针标记成功;电泳条带清晰明亮,表明探针标记效率高;Southern杂交条带清晰,说明该方法标记的探针可用于Southern等分子杂交实验;【结论】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,是一种低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。

基于分子识别作用鉴别人参基因的电化学传感器

本文以人参ITS及518 s基因上的SNP位点为检测对象,利用分子识别作用构建了一种电化学传感器,成功地对人参、西洋参进行了品种鉴别。本文设计合成了一种双标记DNA探针(DLP),该探针的一端标记了4-4-二甲氨基苯基偶氮苯甲酸(dabcyl)作为客体分子,另一端标记了金纳米颗粒作为电化学杂交指示剂。同时使用α-CD/MCNTs/GCE电极作为工作电极。由于DLP的茎环结构,只有在DLP与目标DNA杂交后,DLP上的dabcyl分子进入修饰电极表面的α-CD空腔中,进而DLP被α-CD修饰电极捕获。并且,通过金纳米颗粒的AuCl4-的电化学还原电流信号。可灵敏检测4.6×10-10mol.L-1的目标DNA。

基于磁性纳米颗粒和金纳米粒子构建DNA电化学生物传感技术

本文构建了一种基于纳米粒子、茎环DNA和丝网印刷电极(SPCE)的电化学生物传感技术用于乳腺癌基因的快速、灵敏检测。该传感技术中,探针DNA的两端分别标记了巯基和生物素,巯基用于与金纳米粒子(AuNPs)作用,生物素用于与磁性纳米颗粒(MNPs)表面修饰的链酶亲和素作用以达到富集的目的,之后利用SPCE进行电化学检测。无目标DNA存在时,双标记DNA保持茎环结构,使得生物素分子很难和MNPs上的亲和素接触。一旦加入目标DNA,茎环结构打开,生物素得以与MNPs上的链霉亲和素发生特异性结合,形成的复合物(MNPs-DNA-AuNPs)通过磁性富集到SPCE表面,从而获得AuNPs的电化学信号。该DNA电化学生物传感对单碱基错配有良好的分辨能力,完全互补DNA的检出限为8.0×10-13 mol/L。

基于电化学基因传感器的冬虫夏草及其伪品北虫草的鉴别

目的:构建一种能够灵敏鉴别中药冬虫夏草及其伪品北虫草的电化学基因传感器。方法:β-环糊精修饰的具有特异性分子识别特性的金纳米颗粒(Au-CDS)被用作电化学信号提供者和主体分子。用3’端标有dabcyl,5’端标有氨基的发卡探针DNA进行电极修饰,冬虫夏草的DNA片段可以和该探针DNA形成双螺旋结构,从而将目标杂交事件转换为Au-CDS提供的电流信号,该信号变化可通过循环伏安法灵敏检测,目标DNA特异性基因位点的微小差异可产生显著的电流响应差异。结果:可灵敏检测2.6×10-12M的目标DNA。结论:该传感器为冬虫夏草的快速鉴别提供了一种新方法和工具。

一种小麦背景中外源染色质的高效检测方法——斑点杂交研究

作者选用绵阳 11与黑麦自交系R3的几个后代材料及两亲本 ,通过种子DNA的吸附银染、点样杂交和吸附杂交等方法的探索 ,结果得到了一种从干种子中直接吸附DNA于膜上用于斑点杂交检测小麦背景中的外源遗传物质的方法 ,该方法具有简单、经济、快速、安全、可靠和应用范围广等优点 ,并用该方法证明了所选 6个后代都含有外源种质R3的遗传物质 .还对该改进方法的优越性和应注意的问题进行了讨论 .