模式识别受体树突状细胞相关C型凝集素1在免疫调节中的作用

树突状细胞相关C型凝集素1(Dectin-1)是模式识别受体(PRRs)家族重要的组成之一,在抗真菌的固有免疫中发挥了重要作用,而且还能和β-葡聚糖特异性结合通过诱导胞内信号传导而介导多种细胞反应。本文将对Dectin-1的结构、信号通路、与其他受体的相互作用和在固有免疫和适应性免疫调节方面的作用予以综述。

小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。

基于CRISPR-Cas9构建树突状细胞相关C型凝集素-1基因敲除小鼠模型

目的利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建树突状细胞相关C型凝集素-1(Dectin-1)基因缺失小鼠模型,研究Dectin-1基因缺失对小鼠肿瘤生长的影响。方法通过CRISPR-Cas9基因编辑技术设计靶向目的基因的sgRNA实现Cas9蛋白对DNA双链的特异性切割。将体外转录纯化得到的sgRNA和ssDNA并与Cas9混合后,通过显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵内并经胎盘移植到代孕小鼠体内,获得F0代小鼠。F0代小鼠通过基因鉴定和DNA测序获得Dectin-1基因缺失阳性子代小鼠。最后构建野生型与Dectin-1敲基因小鼠的肿瘤模型,经β-葡聚糖治疗后,观察两组小鼠的肿瘤生长情况。结果利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功敲除C57BL/6野生型小鼠的Dectin-1基因。PCR技术及DNA测序进一步显示Dectin-1基因部分碱基缺失,功能实验显示Dectin-1敲基因小鼠口服β-葡聚糖后肿瘤生长速度高于对照组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Dectin-1基因敲除小鼠模型,验证了Dectin-1对β-葡聚糖抗肿瘤的影响,为进一步研究Dectin-1基因在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。

树突状细胞C型凝集素DC-SIGN在人肾炎组织和肾小管上皮细胞表达

DC-SIGN(DC-specificICAM-grabbingnon-integrin,亦称CD209)属树突状细胞(DC)表面C型凝集素的膜蛋白。作为DC黏附及模式识别受体,其参与介导了DC的炎症组织迁移,识别捕获病原微生物,以及随后激活静息T细胞启动的免疫应答。为此观察了DC-SIGN及DC-SIGN+DC在肾炎患者肾组织中表达和分布,以及DC-SIGN在炎性状态下培养人肾小管上皮细胞表达,探讨与肾小管间质炎症病变和损伤的关系。结果显示,DC-SIGN在正常肾组织基本不表达,而在肾炎早期即以肾小管上皮细胞为主表达上调,且随肾小管间质病变程度加重表达增强(P<0.01),与肾小管间质病变程度明显相关(P<0.01)。此外,DC-SIGN在经TNF-α刺激炎性状态下的人肾小管上皮细胞也明显表达。进一步发现,DC-SIGN+DC在肾炎早期以肾间质为主分布聚集,也随肾小管间质病变程度加重明显增多(P<0.01),与肾小管间质病变程度显著相关(P<0.01),也与DC-SIGN表达相关联(P<0.01)。另外,DC-SIGN+DC在肾小管间质分布数量与肾炎患者肾功能改变明显相关(P<0.05)。研究结果提示,DC-SIGN也是肾小管间质早期炎症的启动参与因素,其介导DC可能也参与了人肾炎肾小管间质的免疫损伤机制。

树突状细胞表面C型凝集素受体表达对绒毛外细胞滋养细胞生物学行为的影响

目的采用基因克隆技术构建C型凝集素受体(CLR)过表达/siRNA慢病毒载体,观察胎盘来源的树突状细胞表面CLR过表达或低表达对人绒毛外细胞滋养细胞(EVCT)侵袭力、黏附能力和凋亡的影响。方法通过质粒转染和RNA干扰技术获取过表达和低表达CLR基因的树突状细胞。将分离、培养及鉴定后的EVCT分别与过表达和低表达CLR基因的树突状细胞共培养(过表达组和低表达组)。采用体外侵袭试验、黏附能力实验和AnnexinⅤ/PI双染法检测共培养对EVCT侵袭、黏附能力及凋亡的影响。以共培养前的EVCT作为对照组。结果过表达组EVCT的侵袭能力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),低表达组EVCT的侵袭能力明显弱于对照组(P<0.01)。过表达组和低表达组与对照组的黏附率比值分别为(94.2±2.3)%和(52.8±1.5)%,低表达组EVCT的黏附能力明显下降(P<0.01)。过表达组、低表达组和对照组的细胞凋亡率分别为(3.9±0.8)%、(8.2±1.4)%和(1.1±0.3)%,低表达组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。结论抑制树突状细胞表面CLR表达可使EVCT的侵袭力和黏附能力显著减弱,凋亡率显著增高;提示树突状细胞表面CLR表达异常可能是EVCT免疫损伤和子痫前期发病的重要机制之一。

C型凝集素受体CLR对树突状细胞功能的调控效应

树突状细胞(Dendritic cells,DC)是专职性抗原提呈细胞,其表面表达的C型凝集素受体(C-type lectin receptors,CLR)在DC的摄取糖蛋白和识别微生物抗原,并将抗原信息提呈给T、B淋巴细胞的过程中发挥重要作用,从而在调节抗真菌寄生虫感染、过敏反应和肿瘤免疫中扮演重要角色。故通过研究C型凝集素受体对DC功能的调控效应来深入了解疾病的发生发展并进一步调控其过程具有重要意义。本文将对近期相关研究成果作一综述。

C型凝集素结构域家族1成员B在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨C型凝集素结构域家族1成员B(CLEC1B)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与HCC患者临床病理特征和预后的关系。方法 利用基因表达汇编(GEO)数据库检索HCC组织芯片数据(GSE49515、GSE115018)对癌组织及正常对照样本中的基因进行差异表达分析。在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库筛选HCC转录组数据集,分析CLEC1B在HCC中的差异表达。采用基因集富集分析(GSEA)探寻HCC中与CLEC1B相关的信号通路。收集37例HCC患者的癌组织和相应的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测CLEC1B mRNA表达,蛋白质印迹分析法检测CLEC1B蛋白表达,并采用χ^2检验分析CLEC1B表达与患者临床病理特征的关系,通过Kaplan-Meier法和log-rank检验分析CLEC1B mRNA表达与HCC患者预后的关系;留取37例HCC患者和37名健康志愿者血液标本,用酶联免疫吸附试验检测血浆中CLEC1B水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估CLEC1B对HCC的诊断价值。结果 CLEC1B在HCC癌组织中低表达,CLEC1B的低表达与HCC患者的肿瘤出血有关(P<0.01)。血浆中CLEC1B水平可作为诊断HCC的生物标志物,以62.44 ng/mL作为截断值时,CLEC1B的诊断效能最佳(ROC曲线下面积为0.966,灵敏度为92.7%,特异度为91.3%)。高表达CLEC1B的HCC患者总生存期长于低表达CLEC1B的患者,差异有统计学意义(P<0.01)。在HCC中,CLEC1B基因与ATR通路(ATM and Rad3-related pathway)、细胞周期通路、DNA修复通路、myc信号通路呈现出一致的表达差异趋势。结论 CLEC1B在HCC中低表达并与肿瘤出血有关,CLEC1B低表达的患者预后较差。

SFRP1减轻血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞损伤的机制

目的研究分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)1减轻血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导H9C2心肌细胞损伤的机制。方法体外培养和扩增足量H9C2心肌细胞系,给予1μmol/L AngⅡ刺激H9C2心肌细胞建立一个体外心肌肥大模型。采用腺相关病毒9型(AAV9)-SFRP1对其进行过表达处理,用细胞计数试剂盒(CCK)8活力测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析相关蛋白表达率,检测心肌肥大指标细胞面积。结果AngⅡ诱导后,H9C2细胞凋亡率明显升高,增殖率明显降低,给予过表达SFRP1后细胞凋亡率显著降低,增殖率明显升高(P<0.05)。过表达SFRP1可明显逆转AngⅡ诱导对H9C2细胞的B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素(Cyt)c和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)等蛋白表达促进和Bcl-2蛋白表达抑制作用及对心房钠尿肽(ANP)、脑钠尿肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(MHC)等心肌肥大蛋白促进作用(P<0.05)。同时过表达SFRP1可促进ATG5和Beclin1等自噬相关蛋白表达(P<0.05)。结论过表达SFRP1能够促进心肌细胞增殖和抑制凋亡,同时启动心肌肥大进程中自噬程序,清除凋亡心肌细胞,是抑制心肌肥大的重要基因和潜在治疗靶点。

血清白细胞介素-17联合C型凝集素-1检测对真菌性鼻窦炎的诊断价值

目的探讨血清白细胞介素-17(IL-17)联合C型凝集素-1(Dectin-1)对真菌性鼻窦炎患者诊断价值。方法选择2017年2月至2019年10月在我院接受治疗并经病理学证实为真菌性鼻窦炎患者62例为观察组,以性别、年龄(±5岁)进行1:1配对选择同期在同一科室治疗的非真菌性鼻窦炎患者62例为对照组。收集两组患者人口学及临床资料,检测空腹外周静脉血清IL-17、Dectin-1水平。并以ROC曲线判断各指标单独及联合检测对真菌性鼻窦炎患者的诊断价值。根据病理学检查结果将病例组分为侵袭性真菌性鼻窦炎与非侵袭性真菌性鼻窦炎,比较不同类型真菌性鼻窦炎患者血清IL-17、Dectin-1水平。结果两组患者性别、年龄、体质量指数(BMI)、吸烟史、饮酒史等一般资料差异均无统计学意义(P均>0.05)。观察组患者血清IL-17与Dectin-1水平均高于对照组(P均<0.05)。ROC分析结果显示:血清IL-17、Dectin-1对真菌性鼻窦炎诊断的cut-off值分别为15.96 pg·mL^(-1)、16.25 pg·mL^(-1);曲线下面积(AUC)分别为0.638、0.792。二者联合诊断的AUC为0.868,其诊断效能高于两指标单独检测(P<0.05)。侵袭性真菌性鼻窦炎患者Dectin-1水平高于非侵袭性真菌性鼻窦炎(P<0.05),不同类型真菌性鼻窦炎患者IL^(-1)7水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清IL-17及Dectin-1均可作为真菌性鼻窦炎患者的诊断指标,联合检测可提高诊断效率,Dectin-1有助于侵袭性真菌性鼻窦炎与非侵袭性真菌性鼻窦炎的鉴别。

中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达

目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序。构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%。体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性。结论中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白。

血清Visfatin CTRP12半乳糖凝集素-3对2型糖尿病合并脑梗死诊断及预后评估的价值

目的 探讨血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3对2型糖尿病合并脑梗死诊断及预后评估的应用价值。方法 将72例2型糖尿病合并脑梗死患者设为研究组,另选取80例单纯2型糖尿病患者设为对照组。比较入院时两组血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3水平,采用受试者工作特征曲线分析各血清指标诊断价值,比较治疗7 d及治疗14 d不同预后患者血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3水平及颈动脉内膜中层厚度,采用Pearson相关性分析法分析各血清指标与颈动脉内膜中层厚度、格拉斯哥预后量表评分关联性及预后预测价值,并采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果 入院时研究组血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平显著高于对照组(P<0.01),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平显著低于对照组(P<0.01)。血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3联合诊断2型糖尿病合并脑梗死的曲线下面积最大,为0.878。治疗第7 d、第14 d预后良好组血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平及颈动脉内膜中层厚度显著低于入院时(P<0.01),且显著低于预后不良组(P<0.01),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平显著高于入院时(P<0.01),且显著高于预后不良组(P<0.01);治疗第14 d预后不良组血清内脂素及半乳糖凝集素-3水平显著低于入院时(P<0.05或0.01)。血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平与颈动脉内膜中层厚度呈显著正相关(P<0.05),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平与颈动脉内膜中层厚度呈显著负相关(P<0.05)。入院第14 d内脂素预测2型糖尿病合并脑梗死预后的曲线下面积最大,为0.808。Kaplan-Meier曲线分析显示,血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3的生存曲线比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论 2型糖尿病合并脑梗死患者存在血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3异常表达情况,与颈动脉内膜中层厚度、格拉斯哥预后量表评分关系密切,可作为早期诊断、预后评估的检测指标,为临床治疗指明新方向。

Dectin-1对侵袭性肺曲霉病大鼠半乳甘露聚糖、胸腺细胞凋亡及肺损伤的影响

目的:探究树突状细胞相关性C型凝集素-1(Dectin-1)对侵袭性肺曲霉病大鼠半乳甘露聚糖(GM)、胸腺细胞凋亡及肺损伤的影响。方法:大鼠随机分为对照组、Ad-EGFP组和Ad-Dectin-1-EGFP组。检测大鼠肺功能(肺容积变换、静息通气量);ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)含量和血清中GM含量;H-E染色观察肺组织病理学变化;检测胸腺指数;TUNEL检测胸腺细胞凋亡;免疫印迹检测肺组织中Dectin-1、T-bet、GATA-3蛋白表达。结果:与对照组相比,Ad-EGFP组大鼠IFN-γ含量、胸腺指数、肺容积变换和静息通气量均明显降低,IL-4含量、GM值、胸腺细胞凋亡指数明显升高;与Ad-EGFP组相比,Ad-Dectin-1-EGFP组大鼠IFN-γ含量、胸腺指数、肺容积变换和静息通气量均明显升高,IL-4含量、GM值、胸腺细胞凋亡指数明显降低。与对照组相比,Ad-EGFP组大鼠肺组织中Dectin-1、T-bet蛋白表达明显降低,GATA-3蛋白表达明显升高;与Ad-EGFP组相比,Ad-Dectin-1-EGFP组大鼠肺组织中Dectin-1、T-bet蛋白表达明显升高,GATA-3蛋白表达明显降低。结论:Dectin-1重组质粒可减轻侵袭性肺曲霉病大鼠肺损伤,降低血清中GM值,通过抑制胸腺细胞凋亡维持体内免疫功能平衡,其机制可能与T-bet、GATA-3蛋白表达有关。

血清RBP、ADPN、NGAL、CysC、α_1-MG与胰岛素抵抗及2型糖尿病肾病的相关性

目的探讨血清视黄醇结合蛋白(RBP)、脂联素(ADPN)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、α_1-微球蛋白(α_1-MG)、胱抑素C(Cys C)与胰岛素抵抗及2型糖尿病肾病的相关性。方法选择2014年2月至2016年9月确诊为2型糖尿病的60例患者作为糖尿病组(G2组),选择同期确诊为2型糖尿病合并早期肾病的60例患者作为G3组,选择同期确诊为2型糖尿病合并晚期肾病的60例患者作为G4组,选择同期健康体检者60例作为健康对照组(G1组)。同时检测4组研究对象的血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C、空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)水平并进行比较。结果 G3组和G4组患者血清RBP、NGAL、α_1-MG、Cys C水平和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均明显高于G1组和G2组(P<0.05);G4组患者的血清RBP、NGAL、α_1-MG、Cys C水平和HOMA-IR均明显高于G3组(P<0.05);G2组、G3组、G4组患者ADPN水平均明显低于G1组(P<0.05);G2组、G3组、G4组患者ADPN水平差异均有统计学意义(P<0.05)。G3组和G4组患者血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C指标灵敏度均超过80.00%,联合检测灵敏度均超过95.00%;G3组联合检测明显高于各单项指标检测结果,差异有统计意义(P<0.05),但G4组差异无统计学意义(P>0.05)。G3联合检测的特异度为88.33%(53/60)。结论血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C与胰岛素抵抗及2型糖尿病肾病具有一定的相关性,血清RBP、ADPN、NGAL、α_1-MG、Cys C联合检测能提高2型糖尿病肾病早期患者的检出率,其指标变化对2型糖尿病肾病的早期诊断、治疗监测、预后判断均具有较好的临床价值。

破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2的真核表达及多克隆抗体制备

目的:为了获得真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和OCILRP2特异性抗体,用于OCILRP2生物学功能的进一步研究。方法:构建了融合人IgG Fc段的小鼠OCILRP2真核表达载体pIg-CD5-OCILRP2,将pIg-CD5-OCILRP2转染CHO细胞,G418筛选稳定表达细胞株;Protein A亲和层析从CHO细胞培养上清中纯化重组蛋白OCILRP2-Fc并免疫家兔制备OCILRP2多克隆抗体。ELISA检测抗血清和多克隆抗体的效价,Western blot验证多克隆抗体的特异性,并应用该抗体检测OCILRP2在树突状细胞(Dendritic cells,DC)中的表达。结果:ELISA结果表明OCILRP2-Fc稳定表达细胞株经过多次传代培养后仍然具有较高的蛋白表达水平;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化后的蛋白只有单一条带出现,且该条带可以被抗人IgG检测到;重组蛋白OCILRP2-Fc免疫家兔获得的抗血清和纯化后得到的OCILRP2多克隆抗体效价分别为1∶1 280 000和1∶320 000,Western blot证明该抗体可以和免疫原OCILRP2-Fc及NIH/3T3细胞中表达的OCILRP2特异性结合。应用该抗体检测OCILRP2在DC的表达发现OCILRP2在成熟DC的表达明显高于不成熟DC。结论:获得了真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和高效价的OCILRP2特异性抗体,为进一步研究OCILRP2在免疫应答中的功能奠定了基础。

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3在1型糖尿病和树突状细胞中的作用初探

目的初步探索ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3(RAC3)在1型糖尿病(T1DM)和树突状细胞(DC)中的作用。方法选取来自广东省T1DM转化医学研究中2011至2016年入组后规律随访的T1DM患者作为病例组,选择2011至2016年来自中山大学附属第三医院就诊的正常糖耐量者作为健康对照组。病例组和对照组均在筛选阶段进行全外显子组测序,在验证阶段进行基因分型。使用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建C57BL/6小鼠背景的RAC3全身敲除(KO)小鼠模型。使用聚合酶链反应(PCR)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting法分别验证RAC3在DNA、RNA和蛋白水平是否被敲除。通过流式细胞染色检测RAC3 KO小鼠和同窝野生对照(WT)小鼠(每组3只)的DC分化比例以及主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHCⅡ)、CD86和CD80等成熟活化指标的表达水平。采用logistic回归分析法比较病例组和对照组之间等位基因频率分布的差异。组间比较采用独立样本t检验。结果筛选阶段共纳入72例T1DM患者和487名健康对照,验证阶段共纳入122例T1DM患者和577名健康对照。筛选阶段结果显示,T1DM患者中RAC3 rs4969478位点的等位基因T频率高于健康对照[分别为7.64%(11/144)和1.13%(11/974),OR=9.38,P<0.001]。验证阶段基因分型结果同样显示,T1DM患者中RAC3 rs4969478位点的等位基因T频率高于健康对照[分别为4.50%(11/244)和1.13%(13/1154),OR=4.14,P<0.01]。WT小鼠和RAC3 KO小鼠的DC分化比例差异无统计学意义(分别为85.6%±1.1%和83.3%±0.25%,P=0.08)。WT小鼠和RAC3 KO小鼠DC中MHCⅡ、CD86和CD80等成熟活化指标的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论遗传学研究提示RAC3可能是人类T1DM的易感基因,但可能不通过DC参与T1DM的发生。

C型凝集素9家族A成员的研究进展

C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树突状细胞抗原3阳性DC(BDCA3^+DC)表面。在表型和功能方面,人的同时表达CLEC9A和BDCA3(CLEC9A^+BDCA3^+)的DC与小鼠的CD8α^+DC具有相似性。CLEC9A能够与坏死或受损细胞的纤维状肌动蛋白结合,经细胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构启动细胞内信号的转导。CLEC9A能介导内吞作用,参与交叉提呈抗原等作用,在抗病毒感染、肿瘤预防与治疗和疫苗的研究中具有潜在的应用前景。本文阐述了CLEC9A分子的研究进展。

未足月胎膜早破患者C型凝集素4家族E成员单核细胞趋化蛋白-1及基质金属蛋白酶-9表达对绒毛膜羊膜炎的诊断价值

目的 探讨未足月胎膜早破(PPROM)患者外周血C型凝集素4家族E成员(CLEC4E)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达对绒毛膜羊膜炎(CAM)的诊断价值。方法 选择2020年5月—2021年6月深圳市福田区妇幼保健院产科收治的95例孕妇,分为PPROM研究组50例,正常对照组45例,根据胎膜组织病理结果,将PPROM研究组分为3组:对照组23例,亚临床型CAM组14例,临床型CAM组13例。采用qRT-PCR分析外周血单个核细胞(PBMC)中的CLEC4E mRNA表达。采用双抗体夹心ELISA检测血清MCP-1和MMP-9水平。采用Pearson法分析CLEC4E与MCP-1、MMP-9的相关性。采用logistic回归模型分析诊断CAM的有效指标。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析各种指标在CAM诊断中的价值。结果 与正常对照组[(0.55±0.04),(7.35±1.83)ng/L,(2.48±0.66)ng/L]比较,PPROM研究组PBMC中CLEC4E mRNA(1.45±0.08)及血清MCP-1[(18.73±4.49)ng/L]、MMP-9[(8.72±2.02)ng/L]水平均显著升高(均P<0.05)。PPROM研究组各亚组中,临床型CAM组患者CLEC4E mRNA(1.66±0.10)及血清MCP-1[(24.18±4.62)ng/L]、MMP-9[(14.85±3.14)ng/L]水平均高于亚临床型CAM组[(1.10±0.08),(15.64±3.26)ng/L,(7.68±2.17)ng/L]和对照组[(0.66±0.05),(8.52±1.82)ng/L,(4.17±1.06)ng/L],亚临床型CAM组CLEC4E mRNA及血清MCP-1、MMP-9水平均高于对照组。亚临床型CAM组和临床型CAM组PBMC中CLEC4E表达与血清MCP-1和MMP-9水平均呈正相关(r=0.421,0.368,均P<0.05)。建立logistic回归方程:logit(P)=-6.347+0.482X1+0.503X2+0.337X3。ROC曲线显示:CLEC4E、MCP-1、MMP-9的曲线下面积分别为0.773、0.718、0.636,3项联合的曲线下面积为0.821。结论 PPROM患者外周血CLEC4E、MCP-1、MMP-9表达上调,可作为诊断CAM的指标,且3项联合检测可能对CAM的诊断更有临床意义。

下肢动脉硬化闭塞症患者血清sLOX-1、CTRP3水平与支架植入术后再狭窄的关系

目的:探讨下肢动脉硬化闭塞症(ASO)患者血清可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)的水平与支架植入术后再狭窄(ISR)的关系。方法:选取2019年6月至2022年6月在本院进行支架植入的106例ASO患者作为研究对象,术后1年根据患者ISR发生情况分为非ISR组(n=64)和ISR组(n=42)。比较两组患者血清sLOX-1、CTRP3水平;多因素Logistic回归分析ASO患者支架植入术后ISR的影响因素;ROC曲线分析血清sLOX-1、CTRP3水平对ASO患者支架植入术后ISR的预测价值。结果:ISR组血清sLOX-1水平显著高于非ISR组(P<0.05),CTRP31水平显著低于非ISR组(P<0.05)。完全闭塞、sLOX-1是ASO患者支架植入术后ISR的独立危险因素,CTRP3是ASO患者支架植入术后ISR的保护因素(P<0.05)。血清sLOX-1、CTRP3二者联合预测ASO患者支架植入术后ISR的AUC为0.944,敏感性为97.62%,特异性为79.69%,优于sLOX-1、CTRP3各自单独预测(Z_(联合检测-sLOX-1)=2.732、Z_(联合检测-CTRP3)=2.143,P=0.006、0.032)。结论:ASO支架植入术后ISR患者血清sLOX-1水平显著升高,CTRP3水平显著降低,二者联合检测对ASO患者支架植入术后发生ISR具有较高的预测价值。

C型凝集素受体CLR与负性免疫调节

树突状细胞(dendriticcells,DC)是专职性抗原提呈细胞,其主要通过吞噬作用、胞饮和受体介导的胞吞作用摄取抗原。DC表面表达的C型凝集素受体(C-typelectinreceptors,CLR)和Toll样受体(Toll-likereceptors,TLR)能通过受体介导的内吞这一途径分别摄取糖蛋白和微生物抗原。CLR在体内参与负性免疫调节:识别糖基化的自身抗原诱导免疫耐受、负性调节TLR信号通路并且某些病原体能利用其诱导耐受功能以逃避免疫应答。深入研究CLR的结构与功能有助于理解自身免疫性疾病的发病机制,并可能为自身免疫性疾病的防治提供新的干预手段。