树突状细胞表面特异性非整联蛋白外显子4在中国裔丙型肝炎患者中的遗传多态性

目的探讨树突状细胞表面特异性非整联蛋白（DC—SIGN）及其同源物（DC-SIGNR）外显子4遗传多态性在中国裔丙型肝炎患者中是否存在遗传易感性。方法采用PCR结合DNA测序对300例丙型肝炎患者和520名健康人的DC-SIGN和DC-SIGNR外显子4重复序列多态性进行基因分型和测序分析。结果DC—SIGN外显子4基因型与等位基因频率在丙型肝炎患者和健康人群间差异无统计学意义（P〉0．05）。DC-SIGNR外显子4等位基因的频率差异也无统计学意义（P〉0．05）；但9／5基因型分布频率在丙型肝炎患者和健康人群间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DC-SIGN外显子4遗传多态性与HCV感染易感性无明显相关性；9／5基因型DC-SIGNR外显子4在丙型肝炎患者中的分布频率较高，可能与HCV感染的易感性相关，值得进一步研究。

树突状细胞表面特异性非整联蛋白同源物基因多态性与丙型肝炎病毒感染的相关性

目的研究丙型肝炎患者树突状细胞表面特异性非整联蛋白同源物（DC—SIGNR）外显子4基因颈区重复序列的遗传多态性分布，探讨DC-SIGNR基因多态性与HCV病毒基因分型及HCV载量的关系。方法采用PCR结合DNA测序对268例丙型肝炎患者DC-SIGNR重复序列多态性进行基因分型和测序分析；同时检测患者的HCV病毒载量及HCV病毒基因分型。组间两两比较用LSD法。结果DC—SIGNR基因型或等位基因与HCV基因分型的相关性不显著。HCV载量携带7等位基因的患者为（4．6722±1．9766）log10拷贝／ml，携带9等位基因的患者为（5．3073±1．6795）log10拷贝／ml，P=0．036，两组差异有统计学意义。7／7基因型的患者HCV载量水平为（4．5974±2．0067）log10拷贝／ml，9／7基因型的患者组为（5．2771±1．8587）log10拷贝／ml，P=0．025，两组差异有统计学意义。提示HCV更易与携带较长DC—SINGR等位基因的患者结合。结论DC—SIGNR遗传多态性可能与HCV在个体内的复制有关，但与HCV基因分型不相关。

人DC的获取与DC特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素的表达

目的:证实体外诱导分化的人树突状细胞(DC)表面高效表达树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(DC-SIGN),为进一步研究其在丙型肝炎病毒传播中的作用奠定基础。方法:F icoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),黏附2 h后接种于完全培养液中,并加入rhGM-CSF、rhIL-4刺激分化,共培养7天,光镜及扫描电镜观察细胞形态,以DC表面特异性标志DC-SIGN的特异性抗体进行荧光染色,检测DC-SIGN的表达。结果:经诱导产生的细胞具有典型的DC形态特征,高表达DC特异性标志物DC-SIGN。结论:GM-CSF与IL-4联合刺激PBMC可分化为DC,且高表达DC-SIGN,为后续研究DC-SIGN奠定了基础。

脂氧素抑制脂多糖诱导的单核巨噬细胞向树突状样细胞分化

目的:脂氧素是天然免疫/炎症反应中的重要"刹车信号",具有促进炎症及时缓解的独特功能;但其对特异性免疫应答有何调节作用尚缺乏直接证据,为此,本研究观察了脂氧素对脂多糖诱导的单核巨噬细胞向树突状样细胞分化过程的影响.

DC-SIGN受体促进肠道病毒71型体外感染树突状细胞

目的探讨树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(dendritic cell specific intercellular adhesion molecule-3 grabbing non integrin,DC-SIGN)的表达对肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)体外感染人树突状细胞(dendritic cells, DCs)和293T细胞的影响。方法梯度密度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),体外诱导培养DCs,通过RT-PCR方法克隆DC-SIGN分子,并构建稳定表达DC-SIGN分子的载体pLB-DC-SIGN,脂质体方法转染293T细胞。分别用EV71感染对照组293T细胞和过表达DC-SIGN的293T细胞,荧光定量PCR检测病毒mRNA,蛋白质印迹法检测EV71/VP1的表达水平;同时用DC-SIGN抑制剂酵母甘露聚糖阻断DCs表面的DC-SIGN分子后,荧光定量PCR检测病毒mRNA,蛋白质印迹法检测EV71/VP1的表达水平。结果过表达DC-SIGN的293T细胞与对照组293T细胞相比,感染病毒量明显增高,EV71/VP1表达量显著增加,而阻断DC-SIGN的DCs病毒感染量低于对照组DCs,EV71/VP1表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DC-SIGN分子可促进EV71体外感染DCs和293T细胞,可能是EV71感染的受体之一。

苯并噁唑衍生物PO-296对树突状细胞分化及相关指标的影响

目的:探讨苯并噁唑衍生物2-(氯苯并噁唑基-2基)-4,5,6,7-四氢-二氢-吲唑-3-醇(PO-296)对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)分化及其特异性表面分子、炎症细胞因子等相关指标的影响。方法:分离小鼠骨髓核细胞,以重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组小鼠白细胞介素4刺激获取未成熟DC(imDC);经低、中、高剂量(1、5、25μmol/L)PO-296预处理后,以脂多糖诱导获取DC。应用流式细胞术检测DC特异性表面分子[即Ⅱ类主要组织相容性复合物(MHCⅡ)、CD80、CD86和趋化因子受体7(CCR7)阳性细胞比例]的表达以及imDC吞噬能力(即葡聚糖阳性细胞比例)和DC存活情况(即存活细胞比例),采用酶联免疫吸附测定法检测DC培养液中炎症细胞因子[白细胞介素10(IL-10)、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平。结果:与imDC组比较,空载组MHCⅡ、CD80、CD86阳性细胞比例均显著升高(P<0.05)。与空载组比较,PO-296各剂量组细胞培养液中IL-10水平均显著升高,阳性组以及PO-296中、高剂量组细胞MHCⅡ、CD80、CD86阳性细胞比例以及各给药组细胞培养液中IL-12、TNF-α水平均显著降低(P<0.05);而各给药组CCR7阳性细胞、葡聚糖阳性细胞和存活细胞比例与空载组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:PO-296无明显的细胞毒性,亦不影响imDC的吞噬功能;同时,该化合物可抑制DC特异性表面分子的表达,调控其炎症细胞因子的分泌。

直肠癌患者的血清C型凝集素受体及其下游效应分子CARD9表达与临床病理特征和预后的关系

目的探究直肠癌患者的血清C型凝集素受体(CLR)及其下游效应分子胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选择2018年3月至2020年3月国药同煤总医院收治的98例直肠癌患者作为研究对象(设为观察组),另选择45名同期在该院体检的健康志愿者设为对照组。采用ELISA法检测血清可溶性树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(sDC-SIGN)和CARD9表达水平,并分析其与直肠癌患者临床病理特征的关系。采用Pearson相关性分析探讨血清sDC-SIGN与CARD9表达的关系。入组直肠癌患者术后均随访3年,计算3年总生存(OS)率。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析血清sDC-SIGN和CARD9表达与直肠癌患者预后的关系。采用多因素Cox回归分析探讨直肠癌患者预后的影响因素。采用ROC曲线分析血清sDC-SIGN和CARD9对直肠癌患者术后生存情况的预测价值。结果与对照组相比,观察组的血清sDC-SIGN表达水平降低,血清CARD9表达水平升高,2组的差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,直肠癌患者的血清sDC-SIGN与CARD9表达呈显著负相关(r=-0.743,P<0.05)。与无淋巴结转移的直肠癌患者相比,有淋巴结转移的患者的血清sDC-SIGN表达水平显著降低,而血清CARD9表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。sDC-SIGN低表达组的3年OS率显著低于sDC-SIGN高表达组,CARD9高表达组的3年OS率显著低于CARD9低表达组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度、TNM分期、淋巴结转移、血清sDC-SIGN和CARD9均是影响直肠癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。血清sDC-SIGN和CARD9联合预测直肠癌患者术后3年生存情况的ROC曲线下面积(AUC)为0.896,均大于两者单独预测的AUC(P均<0.05)。结论血清sDC-SIGN和CARD9表达水平均与直肠癌发生密切相关,且血清sDC-SIGN低表达及血清CARD9高表达均提示直肠癌患者术后预后较差,其可能成为直肠癌诊断和预后预测的新血清学标志物。

卡介苗接种效果与树突状细胞表达的特异性表面分子重复序列区基因多态性的关系

目的分析汉族婴儿接种卡介苗(BCG)后的免疫效果,探讨树突状细胞表达的特异性表面分子(DC-SIGN)编码第4外显子多拷贝重复序列区(简称DC-SIGN重复序列区基因)多态性与BCG接种效果的关系。方法收集200例符合以下入选条件的汉族婴儿作为研究对象:1.出生24 h内在出生医院接种BCG;2.BCG接种后12周在指定医疗机构进行结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)试验;3.排除早产儿接种、伴随感染和漏接种后补接种等情况;4.获得婴儿监护人的知情同意。采集150例BCG接种后PPD试验阳性婴儿(PPD阳性组)和50例BCG接种后PPD阴性婴儿(PPD阴性组)的外周静脉血,通过全血基因组DNA抽提、基因片断的PCR扩增和琼脂糖电泳分析DC-SIGN重复序列区基因多态性,探讨BCG接种效果与DC-SIGN编码基因多态性的关系。结果在200例BCG接种后PPD阳性和PPD阴性汉族婴儿中,存在6型和7型2种DC-SIGN序列区基因型,分别组成7/7野生型纯合子(197例,占98.5%)或6/7变异型(3例,占1.5%)。150例PPD阳性婴儿的DC-SIGN重复序列区基因均为7/7(100.0%),50例PPD阴性组的DC-SIGN重复序列区基因中,47例为7/7纯合子(94.0%),3例为6/7杂合子(6.0%)。二组比较差异有统计学意义(2χ=9.137 1,P<0.05)。结论汉族婴儿DC-SIGN重复序列区基因以7/7野生型纯合子为主,BCG接种失败(PPD阴性)汉族婴儿存在6/7变异型杂合子。DC-SIGN重复序列区基因变异可能是导致BCG接种失败的原因之一。

DC-SIGN真核表达载体的构建及其稳定转染HeLa细胞系的建立

为研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)与树突状细胞特异性粘附分子-3-结合非整合素分子(dendritic cell specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)的相互作用对NDV感染树突状细胞(dendritic cell,DC)的影响,本研究拟构建能够稳定表达DC-SIGN蛋白的细胞系,为研究DC-SIGN蛋白与病毒蛋白互作提供基础。以小鼠DCs提取的c DNA为模板,通过PCR方法获得DC-SIGN基因,连入真核表达载体,并命名为pcDNA-DCSIGN,利用LipofectamineTM 2000转染HeLa细胞,G418进行药物压力筛选,经RT-PCR和Western blot鉴定,获得了一株可以高效表达DC-SIGN蛋白的HeLa细胞,且经过多次传代后仍然可以稳定表达DC-SIGN,说明该细胞系构建成功。

HBV感染与宿主细胞高尔基体α^1甘露糖苷酶Ⅰ活性关系的研究

目的:研究慢性HBV感染与宿主细胞高尔基体α1甘露糖苷酶I(Golgi MⅠ)活性的关系。方法:培养Hep G2细胞和Hep G2.2.15细胞,采用蔗糖密度梯度离心法分离纯化高尔基复合体,比色法检测Golgi MⅠ的活性,RT-PCR法检测基因MAN1A1(人甘露糖苷酶1A类成员1)、MAN1A2和MAN1C1 m RNA的表达,Western blot法检测上述3种基因编码蛋白的表达情况。结果:与Hep G2细胞相比,Hep G2.2.15细胞Golgi MⅠ的活性明显升高,MAN1A1、MAN1A2的m RNA水平显著上调,所编码的MAN1A1、MAN1A2蛋白量也显著增加,而MAN1C1的m RNA和蛋白的表达量无明显变化。结论:HBV感染可提高宿主细胞Golgi MⅠ的活性,这一作用可能是通过上调MAN1A1、MAN1A2基因m RNA和蛋白表达的量介导。

细胞治疗·研究评价

嵌合抗原受体T细胞，即CAR—T（Chimeric antigen receptor T）是一种基因修饰的T细胞，通过将带有特异性肿瘤细胞抗原识别结构域及T细胞激活信号的遗传物质转人T细胞，使T细胞通过直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而激活，通过释放穿孔素、颗粒酶素B等直接杀伤肿瘤细胞；同时，还通过释放细胞因子募集人体内源性免疫细胞杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的；此外，还可形成免疫记忆T细胞从而获得特异性的抗肿瘤长效机制。由于CD19-CAR—T细胞在多种血液肿瘤临床试验中的突出表现，CAR—T细胞已经在全球范围内掀起了研究热潮，甚至有研究者认为肿瘤治愈已成为可能。

DC-SIGN基因多态性及表达差异与宿主易感性之间的关系

树突状细胞(DCs)是体内功能最强的抗原呈递细胞,其表面的DCs特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(DC-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin,DC-SIGN)一方面可介导DCs对病原体的结合和抗原呈递,有利于宿主免疫应答;另一方面也可被胞内寄生病原体利用,协助其感染宿主T细胞,并通过干扰DCs成熟来影响其抗原呈递能力,抑制宿主免疫功能。目前研究认为,DC-SIGN基因多态性及表达差异可能会影响宿主对病原体的易感性。

DC-SIGN与微生物感染研究进展

树突状细胞(DC)在抵御病原体的过程中至关重要.然而, 近来的研究表明,一些病原体破坏了DC的功能以逃脱免疫监视.许多细胞表面分子与病毒包膜糖蛋白结合后并不介导病毒抗原的加工和呈递,相反,他们可作为捕获受体将病毒颗粒传递给靶器官或敏感细胞.HIV-1就可与DC特异的C型凝集素DC-SIGN(Dc specific intercellular—adhesion—molecule-3 grabbing nonintegrin,树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子;即CD209)结合,“绑架”C,感染宿主.DC—SIGN除了可与HIV-1、HCV结合外, 还可与其他多种病原体结合.对病原体和DC—SIGN的相互作用以及对DC功能的进一步研究,必将有助于抗感染的治疗.本文就DC—SIGN与微生物感染的研究进展作一综述.

DC-SIGN在病毒感染中的作用机制研究进展

树突状细胞(DCs)表面特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(SIGN)主要分布在DCs表面,通过依赖Ca2+的碳水化合物识别区域(CRD)识别与结合内源性和外源性抗原,介导细胞与细胞之间的相互作用,参与DCs对病原体的识别和捕获,在HIV、HCV、登革热病毒(DENV)以及肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)等的感染和传播中发挥重要作用。本文就DC-SIGN与病毒感染相关研究进展作一综述。

DC-SIGN与肿瘤关系的研究进展

树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(dendritic cell specific intercellular-adhesionmolecule-3 grabbing non-integrin,DC-SIGN)是一种主要表达于树突状细胞(dendritic cell,DC)表面的特异性受体,属于C型凝集素超分子家族。DC-SIGN不仅能与细胞间黏附分子-2(intercellular adhesion molecule-2,ICAM-2)和细胞间黏附分子-3(intercellular adhesion molecule-3,ICAM-3)等结合,还能识别HIV、登革病毒、巨细胞病毒等病原微生物,从而参与了这些病原体的感染过程,与多种感染性疾病的发病机制密切相关。近年来,有学者发现DC-SIGN还与肿瘤的发生、免疫、易感性有关,也因此受到了更广泛的关注。对DC-SIGN与肿瘤之间的关系进行更深一步的研究将有助于了解相关肿瘤疾病的发生机制,为促进其诊疗进展奠定基础。

免疫分子生物学(免疫化学)

0023908 在激活天然 CD8^+TCR 转基因 T淋巴细胞时 B7.1较 B7.2在数量上更强的共刺激因子/Fields PE//J Immunol.-1998,161(10).-5268～5275 四军大0023909 常人 CD4^+记忆性 T 淋巴细胞显示广泛的细胞因子合成激活阈的异质性/Waldrop SL//J Immunol.-1998,161(10).-5284～5295

DC-SIGNR与肿瘤关系的研究进展

肿瘤是一种威胁生命的疾病,目前肿瘤的具体发展过程和作用机制还没有完全研究清楚。C型凝集素受体是一大类蛋白质,具有抑制炎症和抗菌功能。DC-SIGNR属于C型凝聚素的其中一员,越来越多的临床证据分析表明,DC-SIGNR也极有可能与恶性肿瘤的发展有关。本文综述了DC-SIGNR表达与肿瘤发生、发展之间的关系,深入探究DC-SIGNR在肿瘤各个环节的作用,为进一步了解肿瘤的机制提供了一个全新的角度。