树突细胞疫苗在脑胶质细胞瘤免疫治疗中的作用研究进展

脑胶质细胞瘤是颅内最常见的原发性肿瘤,占颅内原发性肿瘤的比率可高达40%[1]。目前,临床上治疗主要为手术切除联合化学治疗和放射治疗,但该病复发率极高,且放射治疗和化学疗法所引起的副反应多,而且对机体的免疫系统损害非常大,严重影响患者的预后[2]。胶质细胞瘤生长极其迅速。文献资料[3]表明,高级别胶质瘤患者平均存活时间仅15年左右,2年生存率仅为25%~30%,而5年的生存率低于5%,所以,探索一种更为科学、有效的治疗策略意义重大。近年来,肿瘤免疫治疗已经成为恶性肿瘤治疗的热点和发展方向,且现已进入临床研发阶段,目前被美国《科学》杂志评为2013年年度十大科学突破之首。树突细胞作为具有人体最强捕获抗原和递呈抗原的能力,在免疫治疗中起着至关重要的作用。

阿德福韦联合特异性树突细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的效果分析

目的:观察阿德福韦联合特异性树突细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的疗效,为临床用药提供参考。方法:选择我院2009年2月～2011年1月收治的慢性乙型肝炎患者74例,随机分为对照组和观察组各37例。对照组患者给予阿德福韦治疗,观察组患者在此基础上给予特异性树突细胞疫苗治疗。连续治疗12个月后,观察并比较两组患者肝功能指标、HBV-DNA、IFN-γ、IL-4的差异。结果:与治疗前比较,全部患者治疗后ALT、AST、IFN-γ、IL-4均有不同程度的改善,其中观察组的改善程度明显优于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者HBV-DNA阴转率明显高于对照组,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:采用阿德福韦联合特异性树突细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎疗效显著,值得临床推广应用。

树突细胞疫苗治疗脑胶质瘤的研究进展

树突细胞能致敏原初T淋巴细胞,可能恢复机体抗肿瘤免疫的有效性,树突细胞疫苗被认为是最具应用前途的肿瘤疫苗。随着脑组织的免疫原性被逐渐认识,树突细胞疫苗对脑胶质瘤的治疗价值开始显现。本文复习近年树突细胞疫苗治疗脑胶质瘤的临床研究结果,讨论树突疫苗的研究发展方向。

新抗原脉冲树突状细胞疫苗在肿瘤免疫治疗中的作用

新抗原脉冲树突状细胞疫苗(Neo-DCVac)是一种新型肿瘤免疫治疗手段。新抗原是指肿瘤细胞突变产生的具有较强免疫原性和肿瘤特异性的肽段。Neo-DCVac是基于新抗原被树突状细胞摄取、加工后递呈并激活T细胞引发机体免疫反应,从而发挥抗肿瘤作用。在高通量测序基础上发展而来的个体化Neo-DCVac有望成为肿瘤精准免疫治疗的新方向。本文从个体化Neo-DCVac构建、在实体瘤中联合治疗的临床应用、适宜接种人群和目前存在的局限性等方面进行综述,旨在为肿瘤免疫治疗的相关研究提供参考。

树突状细胞疫苗叠加环磷酰胺联合化疗栓塞治疗肝细胞癌

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)仍然是全世界范围内主要的健康威胁,而我国HCC发病率和病死率占全球总数一半以上,负担非常沉重。经动脉化疗栓塞(transarterial chemoembolization,TACE)是不适合手术切除或具有局限性病灶HCC患者的一线治疗手段,其临床有效性已得到证实,但因为不同程度的副作用,被认为只具有姑息性作用。树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前发现的功能强大的抗原提呈细胞,在介导天然免疫与适应性免疫反应中发挥着重要作用。考虑到TACE后大量肿瘤抗原被释放,TACE联合免疫治疗可能会提升对HCC患者的治疗作用。本文结合笔者发起的临床研究就DC疫苗叠加低剂量环磷酰胺联合TACE治疗HCC患者的原理、方法及潜在功效进行简要综述。

益气活血解毒中药联合树突状细胞疫苗对荷瘤小鼠免疫抑制的调控

目的从免疫抑制角度观察益气活血解毒中药联合树突状细胞(DC)疫苗对小鼠宫颈癌移植瘤的影响,为宫颈癌的治疗提供依据。方法将1×106个(0.2 mL)U14细胞接种于小鼠背部皮下,7 d后建立荷瘤小鼠模型,将造模成功小鼠随机分为4组,每组10只。对照组0.2 mL/只生理盐水腹腔注射;中药组0.2 mL/只中药灌胃,均每日1次,连续14 d;DC疫苗组局部注射DC疫苗5×106/只,每周1次,共注射2次;联合组给予中药及DC疫苗。观察小鼠瘤质量,采用免疫组化方法测定小鼠瘤组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)及脾脏CD4+、CD8+T细胞的百分比。结果干预14 d后,联合组、中药组及DC疫苗组的瘤质量显著低于对照组,各用药组对小鼠移植瘤生长均有抑制作用,以联合组最为明显。干预后,联合组和中药组TGF-β1、IL-10显著低于DC疫苗组及对照组(P<0.05);联合组和中药组CD4+、CD8+T细胞所占百分比显著高于DC疫苗组和对照组(P<0.05)。结论中药增强DC疫苗的抗肿瘤作用与其去除免疫微环境中免疫抑制因子有关。中药与DC疫苗的联合有望成为一种有效的免疫疗法。

Survivin致敏的树突状细胞疫苗激活抗白血病T细胞的实验研究

为研究survivin致敏树突状细胞 (DC)疫苗对特异性T细胞的激活影响及对白血病细胞生长抑制作用 ,采用共聚焦显微镜及免疫沉淀 Western印迹等方法检测急性白血病细胞survivin表达 ;外周血单个核细胞体外培养 ,诱导DC细胞的形成 ;体外进行survivin抗原负载 ,制备survivinDC疫苗 ;survivinDC激发同基因型T细胞 ,用流式细胞术进一步分析T细胞表型 ;3H TdR法测定刺激指数 (SI) ;并用51 Cr释放法测定特异性的抗白血病CTL细胞毒活性。结果表明 ,检测 19例初治急性白血病患者survivin的表达率为 84 .2 % ;其荧光分布均在细胞胞浆内 ;免疫沉淀 Western印迹进一步分析证实其survivin蛋白表达 ;外周血单个核细胞体外诱导形成的DC细胞具有典型DC的形态学特征 ;survivinDC可显著刺激T细胞的活化增殖 ;survivinDC激活的T细胞中 ,CD4 + TH 比例显著较DC组高 ,DC激发的T细胞则以表达CD8和CD5 6为主 ;同时survivinDC显著抑制白血病细胞的生长。结论 :急性白血病细胞表达survivin抗原 ,利用survivinDC疫苗可有效地抑制白血病细胞的生长 。

树突状细胞疫苗联合Imiquimod对小鼠乳腺肿瘤的治疗作用

目的观察局部应用TLR7激动剂Imiquimod对树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗治疗小鼠肿瘤的影响,寻找增强DC肿瘤疫苗疗效的佐剂。方法培养乳腺肿瘤细胞株EMT-6,反复冻融法制备肿瘤相关抗原,小鼠乳腺区注射EMT-6制备荷瘤动物模型。用含重组小鼠GM-CSF和IL-4的培养液扩增培养Balb/c小鼠来源的BM-DC,负载肿瘤相关抗原(Ag-DC)后进行肿瘤治疗实验。荷瘤小鼠分别采用Imiquimod局部涂抹、Ag-DC皮内注射、Imiquimod联合Ag-DC进行治疗,检测不同处理方法小鼠的肿瘤生长情况。采用上述方案免疫Balb/c小鼠后细胞增殖抑制实验检测小鼠脾脏淋巴细胞对EMT-6细胞的杀伤效应。流式细胞术检测Imiquimod处理局部皮肤对BM-DC向局部引流淋巴结(DLN)迁移的影响。结果 Imiquimod联合Ag-DC治疗荷瘤小鼠可明显抑制肿瘤生长,与单纯Imiquimod、Ag-DC治疗组及NS处理对照组比较差异具有显著性。Imiquimod联合Ag-DC免疫小鼠后脾脏淋巴细胞杀伤肿瘤细胞能力较其它组明显增强。局部涂抹Imiquimod后注射BM-DC,24 h后DLN内BM-DC数量较对照组明显增多。结论 TLR7激动剂Imiquimod可增强BM-DC疫苗诱导的免疫应答,提高肿瘤治疗效果。其机制可能与Imiquimod诱导DLN BM-DC细胞数量增多有关。

自体树突状细胞疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胆系肿瘤的临床疗效观察

目的观察自体树突状细胞（DC）疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）治疗胆系肿瘤的临床疗效。方法采集患者外周血单个核细胞,采用多种肿瘤抗原刺激后进行扩增和培养,收获成熟DC制成疫苗进行皮内注射,同时联合自体CIK细胞静脉回输,观察85例胆系肿瘤患者治疗前后的临床疗效、免疫功能、不良反应及生存时间。结果 85例胆系肿瘤患者经自体DC-CIK细胞治疗后,临床症状较前明显改善（P〈0.05）;临床疗效显著,完全缓解2例（2.3%）、部分缓解14例（16.5%）、疾病稳定54例（63.5%）及疾病进展15例（17.6%）;免疫功能提高,治疗后淋巴细胞亚群中CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋及CD4＋/CD8＋比值升高,而调节性T细胞降低（P〈0.05）。至随访结束,58例患者死亡,2例失访,25例存活,中位生存期为16.5个月（95%CI：12.1-20.9个月）。结论自体DC-CIK细胞治疗是胆系肿瘤患者一种安全有效的治疗方法,不良反应少,但相关结论仍有待进一步大样本随机对照研究证实。

树突状细胞负载肝癌抗原肽疫苗体外诱导特异性免疫学反应的研究

目的 :研究树突状细胞 (dendriticcell,DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果。方法 :用顺序特异引物聚合酶链反应技术 (PCR SSP)选择HLA B7表型供者 ,从脾组织中分离、培养DC EPVTKAEML特异性CTL。用51Cr释放法检测CTL的杀伤活性 ,并用抗HLA I分子单抗 (mAb)进行杀伤抑制实验。结果 :找到 4例HLA B7杂合子供者 ,用DC负载HLA B7限制的抗原肽EPVTKAEML可诱导特异性CTL反应 ,对肝癌细胞HHCC有较强的杀伤作用。结论

树突状细胞疫苗肿瘤抗原负载方式的临床转化研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)是体内功能最强的抗原提呈细胞,能将肿瘤抗原提呈给T细胞,是抗肿瘤免疫的启动者。DC疫苗的肿瘤免疫治疗虽已取得丰硕成果,但在其临床转化过程中还有很多问题需要解决,选择何种抗原负载方式则是其中之一。目前临床试验中常用的有肿瘤细胞裂解物负载DC、重组肿瘤相关抗原负载DC及携带肿瘤相关抗原信息的mRNA转染DC三种方法。本文对此三种方法在临床试验中的应用做一综述,为树突状细胞疫苗的临床应用提供参考。

负载CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞疫苗的免疫活性

目的探讨负载人肝细胞性肝癌(HCC)组织来源的CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞(CD133+HCC RNA-DC)疫苗的免疫活性。方法采用酶消化法从人HCC组织中分离出肝癌细胞,利用流式细胞术分选出CD133+肝癌细胞,制备负载CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞疫苗,最后用流式细胞术检测DC的表型,ELISA法测定DC分泌IL-12水平,采用混合淋巴细胞反应法检测DC在体外刺激自体淋巴细胞增殖的能力。结果 CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞的HLA-ABC、HLA-DR、CD86、CD80、CD83表达水平分别是(96.52±2.02)%、(92.17±3.04)%、(94.25±3.28)%、(55.14±1.67)%、(40.53±2.31)%,与肝癌细胞RNA树突状细胞和成熟DC比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。CD133+肝癌细胞RNA-DC、肝癌细胞RNA-DC、成熟DC和未成熟DC分泌IL-12的量分别为(421.50±3.12)、(418.20±1.10)、(324.20±2.19)和(102.47±4.60)pg/ml,前两者之间差异无统计学意义(P=0.14),前两者均高于后两者,差异有统计学意义(P<0.05)。CD133+肝癌细胞RNA-DC与肝癌细胞RNA-DC刺激自体T淋巴细胞增殖能力分别均强于成熟DC和无DC刺激的自体T淋巴细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CD133+肝癌细胞RNA树突状细胞疫苗具有成熟表型,能够在体外有效刺激自体T淋巴细胞增殖。

血源性树突状细胞融合疫苗抗恶性黑色素瘤的应用研究

目的 探讨外周血源性树突状细胞抗恶性黑色素瘤的作用及作用机制。方法 利用本校肿瘤免疫与生物治疗中心建立的外周血树突状细胞分离与细胞因子体外扩增培养法 ,并在体外经灭活恶性黑色素瘤细胞及其裂解产物刺激后直接作为疫苗 ,应用于恶性黑色素瘤的免疫治疗。结果 15例中 ,2例完全消退 ,8例部分消退 ,5例无效 ,未观察到明显过敏及其他毒副反应。结论 外周血源性树突状细胞融合疫苗对恶性黑色素瘤具有较明显的免疫治疗作用。

负载肝癌抗原的树突状细胞疫苗对SCID荷瘤鼠的抑瘤作用观察

采用人外周血淋巴细胞腹腔注射法建立人外周血淋巴细胞—严重联合免疫缺陷(Hu-PBL-SCID)鼠模型。随机分为四组:Ⅰ组尾静脉注射mRNA未致敏的树突状细胞(DC)疫苗,Ⅱ组注射抗CD4+、CD8++mRNADC,Ⅲ组为DC,Ⅳ组为PBS,每周1次,共2次,然后接种2×106肝癌细胞HepG-2,观察鼠成瘤率、成瘤潜伏期、肿瘤体积以及测定特异性细胞毒淋巴细胞(CTL)活性;流式细胞术检测体内种植瘤的细胞周期;用ELISA法检测鼠血清中是否有人IgG。结果鼠血清中均有人IgG,Hu-PBL-SCID嵌合模型重建成功,各组小鼠间成瘤率无明显差异,但Ⅰ组成瘤潜伏期延长,肿瘤生长缓慢,2周后肿瘤体积明显小于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组脾淋巴细胞对HepG-2有特异性杀伤效应。Ⅰ组HepG-2有75.82%±4.78%处于G0/G1期,13.54%±2.55%处于S期,10.64%±2.36%处于G2/M期,与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ比较,P<0.05。认为负载肝癌抗原的DC疫苗体内能诱导产生明显的抑瘤作用。

家兔与BALB/c小鼠对猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗敏感性的比较

为比较家兔与BALB/c小鼠对猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗的敏感性,本研究首先根据小鼠与家兔体重比,分别免疫糖基化E2蛋白与E2蛋白(家兔2mg/只,小鼠20μg/只),在不同时间采血制备血清,通过ELISA方法测定血清中IgG水平。结果显示,接种后BALB/c小鼠出现了轻度的免疫应答,而家兔产生了强而持久的免疫保护。本研究对BALB/c小鼠的接种量进行了进一步摸索,结果表明,50与100μg/只免疫效果明显优于20μg/只;其中50μg/只E2蛋白与糖基化E2蛋白免疫后,血清IgG水平较高且稳定;而100μg/只糖基化E2蛋白免疫后,免疫初期,糖基化E2蛋白组产生了免疫抑制,至21d抗体水平逐渐升高且达极高水平;但100μg/只E2蛋白免疫后,整个免疫期内抗体水平均较低,只有轻微波动。以上结果表明,家兔对糖基化E2蛋白与E2蛋白的敏感性均显著高于BALB/c小鼠,且糖基化E2蛋白免疫效果明显好于E2蛋白,BALB/c小鼠的糖基化E2蛋白最佳免疫剂量为50μg/只。

树突状细胞疫苗与肿瘤免疫

抗原脉冲的树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌ，ＤＣ）的潜能和新颖的肿瘤靶的鉴定，重新激起对恶性肿瘤治疗型疫苗的研究兴趣，已成为许多研究课题的热点。本文综述ＤＣ在肿瘤免疫治疗中的开发应用。１引言人体免疫系统具有抵御恶性细胞失控制性生长的能力，其核心是...

树突状细胞疫苗在胰腺癌免疫治疗中的应用研究

胰腺癌是具有高度恶性的肿瘤，早期诊断困难，传统治疗方法疗效差。由于手术切除率低，大多数病人就诊时已属晚期，根治性手术切除率仅为20％，术后5年生存率低于5％。肿瘤免疫治疗作为继手术、化、放疗等传统治疗后的新兴肿瘤治疗方法在现代肿瘤综合治疗中发挥愈来愈大的作用。肿瘤免疫治疗就是通过调动宿主的天然防卫机制或给予天然或基因工程产生的针对性、靶向性很强的物质，通过增强宿主的免疫防御效应，降低免疫抑制，来增强机体抗肿瘤细胞的免疫应答能力，杀伤或抑制肿瘤细胞生长。